江苏省自然科学基金(BK2008351)
- 作品数：16 被引量：66H指数：7
- 相关作者：何孔旺温立斌杨汉春郭容利周俊明更多>>
- 相关机构：江苏省农业科学院中国农业大学国家兽用生物制品工程技术研究中心更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 类猪圆环病毒因子P1核酸链型和极性的研究被引量：8
- 2012年
- 研究报道类猪圆环病毒因子P1的核酸链型和极性的研究结果。采用氯化铯平衡密度梯度离心获得较为纯净的病毒粒子后,提取病毒DNA,经S1核酸酶消化、特异性单引物第一轮PCR扩增结合常规第二轮PCR扩增等研究,结果表明,类猪圆环病毒因子P1为单股、负链基因组。
- 温立斌何孔旺倪艳秀张雪寒李彬王小敏郭容利周俊明俞正玉茅爱华吕立新
- 猪感染类猪圆环病毒因子P1后血小板的变化被引量：2
- 2009年
- 探讨类猪圆环病毒因子P1感染对广西巴马小型猪血小板参数的影响。将12头30日龄的广西巴马小型猪随机、平均分成两组,实验组经腹股沟淋巴结途径接种类猪圆环病毒因子P1的分子克隆。采用自动血液分析仪检测接种后3d、8d、17d、24d、31d及40d猪的外周血血小板参数。统计分析显示猪感染P1后,与对照组相比,实验组的血小板平均体积(MPV)无显著差异,而血小板计数(PLT)和血小板压积(PCT)在接种后8d明显降低,血小板体积分布宽度(PDW)在接种后17d显著降低。
- 温立斌何孔旺杨汉春吕立新郭容利周俊明钟书霖
- 关键词：广西巴马小型猪
- 中国猪群存在Torque teno Virus(TTV)感染被引量：9
- 2010年
- 为了探讨中国猪群TTV的感染现状以及是否存在新的基因亚型，基于TTV1和TTV2相对保守的5’非翻译区（5’UTR）设计引物，采用PCR法对2008～2009年采集于中国江苏省的138份猪血清进行了检测。结果表明，中国猪群，TTV1的感染率为15．9％，TTV2的为34．8％，共感染率为5．8％。所扩增片断的核苷酸序列分析结果表明，中国TTV1和TTV2流行毒株之间的核苷酸同源性分别为87．3％～93．8％和74．8％～99．1％，与GenBank其他TTV1和TTV2毒株的同源性分别为69．6％～100．0％和74．8％～99．1％。系统进化分析结果表明，中国TTV1和TTV2流行毒株存在新的基因亚型。
- 温立斌何孔旺杨汉春郭容利李成仁钟书霖茅爱华倪艳秀张雪寒周俊明吕立新俞正玉李彬王小敏
- 应用高分辨熔点曲线分析区分类猪圆环病毒因子P1和猪圆环病毒2型被引量：4
- 2010年
- 为评价高分辨熔点曲线分析在快速鉴别类猪圆环病毒因子P1和猪圆环病毒2型中的应用。在Cor-bett Rotor-Gene 6000定量PCR仪上,利用EvaGreen荧光染料对靶核苷酸序列进行扩增,建立HRM分析P1和PCV2的工作流程。在优化各种条件基础上,利用HRM分析可区分相差1个碱基的靶序列。因此,HRM分析可为P1和PCV2的分子诊断提供一种新的技术手段。
- 温立斌何孔旺杨汉春郭容利钟书霖周俊明李成仁陈梦海
- 关键词：猪圆环病毒2型
- 类圆环病毒因子P1结构蛋白表位肽抗体的制备及应用被引量：7
- 2011年
- 旨为制备兔抗类猪圆环病毒因子P1的特异性抗体,对其在病原学方面的应用进行研究。采用人工合成选定的表位肽,将其与载体蛋白KLH偶联后免疫新西兰大白兔制备抗P1多克隆抗体,通过免疫组化对该多抗与P1的反应性进行检测。获得了抗P1多克隆抗体;免疫组化结果显示抗体可与P1病毒蛋白出现特异性反应。偶联后的P1表位肽具有免疫原性,可用于制备相应的抗体;制备的抗体特异性良好,可用于P1病原学方面的研究。
- 温立斌何孔旺杨汉春刘梦雅
- 关键词：P1合成肽多克隆抗体
- 类圆环病毒因子P1感染对猪外周血T淋巴细胞含量和增殖活性的影响被引量：4
- 2009年
- 探讨类猪圆环病毒因子P1感染对猪细胞免疫功能的影响。将12头30日龄广西巴马小型猪随机分成试验组和对照组,每组6头。在猪感染P1后第3,8,17,24,31和40天,采用血常规和单色流式细胞术分析猪外周血T淋巴细胞的含量,通过WST法对其增殖活性进行检测。P1感染组的T淋巴细胞数量(绝对数和相对数)整体趋势低于对照组,而两组的T淋巴细胞增殖活性没有显著差别。P1感染对机体的细胞免疫功能有一定程度的影响。
- 温立斌何孔旺杨汉春郭容利钟书霖周俊明陈梦海
- 关键词：广西巴马小型猪T淋巴细胞计数
- 猪Th1/Th2型细胞因子重组质粒实时荧光定量PCR标准曲线的建立被引量：8
- 2009年
- 依据GenBank登录的猪Th1型细胞因子(IL-2、IL-12、IFN-γ)、Th2型细胞因子(IL-4、IL-6、IL-10)的核苷酸序列设计特异性引物,经RT-PCR技术从猪外周血单个核细胞中扩增和克隆了上述因子的101 bp核苷酸片段。测序鉴定后,将重组质粒10倍系列稀释后作为标准模板,通过实时荧光定量PCR方法,建立了它们各自的标准曲线及直线回归方程。结果表明,该方法具有线性关系好,特异性、敏感性、重复性高等特点,为猪体内IL-2、IL-12I、FN-γ、IL-4、IL-6和IL-10的mRNA水平的定量检测,提供了必要的技术手段。
- 温立斌何孔旺杨汉春郭容利李成仁卢维彩贾付从
- 关键词：TH1/TH2型细胞因子外周血单个核细胞重组质粒实时荧光定量PCR
- 类圆环病毒因子P1感染对猪外周血单个核细胞抗病毒蛋白mRNA转录的影响被引量：3
- 2010年
- 为探讨类猪圆环病毒2型因子P1感染对猪抗病毒蛋白分子mRNA转录的影响,将P1分子克隆接种30日龄健康广西巴马小型猪,利用实时荧光定量PCR技术对猪外周血单个核细胞抗病毒蛋白分子PKR、2'-5'OAS2、 RNase L和Mx1的mRNA转录水平的变化进行了定量分析。结果表明,PKR mRNA转录在接种后8 d和40 d呈上调趋势;而2'-5'OAS2 mRNA在3 d和17 d下调,Mx1 mRNA也在接种后17 d下调;RNaseL mRNA转录水平则没有发生明显变化。研究揭示P1感染猪后,机体的抗病毒蛋白的功能受到了不同程度的影响。
- 温立斌何孔旺杨汉春郭容利俞正玉茅爱华倪艳秀张雪寒周俊明吕立新李彬王小敏
- 关键词：P1外周血单个核细胞抗病毒蛋白
- 类猪圆环病毒因子P1感染对猪红细胞的影响被引量：15
- 2009年
- 探讨类猪圆环病毒因子P1感染后,广西巴马小型猪发生贫血的类型,推断贫血发生的原因。12头30日龄的猪随机分成两组,每组6头,试验组经腹股沟淋巴结途径接种P1分子克隆。采用自动血液分析仪对接种后3d、8d、17d、24d、31d及40d猪的外周血进行红细胞各参数检测。统计分析结果显示P1感染后,与对照组相比,红细胞参数之间无差异的指标有RBC、HGB、HCT、MCV和MCHC等5项,而MCH在接种后17d明显降低,而RDW在31d增高明显。可见,猪感染类猪圆环病毒因子P1可导致小细胞低血色素性贫血。
- 温立斌何孔旺杨汉春倪艳秀张雪寒俞正玉茅爱华
- 关键词：广西巴马小型猪贫血红细胞参数
- 类猪圆环病毒因子P1感染对猪肺泡巨噬细胞外源性抗原加工递呈相关分子和共刺激分子的影响被引量：2
- 2011年
- 采用实时定量PCR技术对类猪圆环病毒因子P1感染猪不同时相猪肺泡巨噬细胞中外源性抗原加工递呈相关分子SLA-DR、SLA-DM和CD74及共刺激分子CD40、CD80和CD86 mRNA的表达进行了检测。结果表明,病毒感染后3 d,上述分子的mRNA表达皆低于对照组相应分子的mRNA表达。其中,CD80 mRNA的表达呈下调趋势(P<0.1),CD40、CD74和SLA-DR的mRNA的表达显著下调(P<0.05);感染后8 d的SLA-DR和SLA-DM以及感染后17 d SLA-DM的mRNA的表达有下调趋势(P<0.1);感染后24 d的CD86 mRNA的表达呈上调趋势(P<0.1);感染后40 d的CD74 mRNA的表达显著下调(P<0.05)。结果揭示,类猪圆环病毒因子P1感染对猪肺泡巨噬细胞的外源性抗原加工和递呈功能有显著影响,导致其外源性抗原递呈功能下降及紊乱,进而使机体的体液免疫应答功能受到影响。
- 温立斌何孔旺杨汉春刘梦雅
- 关键词：肺泡巨噬细胞共刺激分子
