国家自然科学基金(30571948)
- 作品数：11 被引量：33H指数：5
- 相关作者：张国成乔玉环许东亮李小青张建好更多>>
- 相关机构：第四军医大学西京医院郑州大学第一附属医院郑州大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省社会发展科技攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 妊娠期高血压疾病溶血磷脂酸及其受体的变化及意义被引量：5
- 2009年
- 目的:探讨溶血磷脂酸(LPA)在妊娠期高血压疾病患者血液中的水平及其受体在胎盘组织的表达。方法:应用生化法检测60例妊娠期高血压疾病患者和20例正常晚期妊娠妇女血浆LPA水平,同时应用免疫组化技术检测60例妊娠期高血压疾病患者和20例正常妊娠妇女胎盘组织LPA受体Edg4和Edg7的表达,以初步探讨LPA与妊娠期高血压疾病的关系。结果:妊娠期高血压疾病组血浆LPA水平明显高于正常晚期妊娠妇女组(P<0.05),且妊娠期高血压疾病不同组别血浆LPA水平相比均有显著差异(P<0.05)。溶血磷脂酸受体蛋白Edg4、Edg7主要在胎盘绒毛滋养细胞及蜕膜细胞的细胞质和细胞膜上高表达,免疫组化染色呈浅黄或棕黄色。Edg4、Edg7在子痫前期组的表达显著高于正常晚期妊娠妇女组。结论:血浆LPA及其在胎盘组织中的溶血磷脂酸受体蛋白Edg4、Edg7可能参与妊娠期高血压疾病的发生及发展,血浆LPA水平有望成为妊娠期高血压疾病预测、诊断、病情监测及预后判断的重要临床指标。
- 张建好李留霞郭瑞霞乔玉环
- 关键词：溶血磷脂酸类妊娠期高血压疾病
- Edg4基因小分子干扰RNA载体的构建及其对卵巢上皮性癌细胞的沉默效应
- 2007年
- 目的构建针对 Edg4基因的小分子干扰 RNA(siRNA)载体,初步观察其对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞的沉默效应。方法利用软件分析、设计针对人 Edg4 mRNA 的 siRNA 靶序列,合成发夹样 DNA 序列;退火成双链,克隆至真核表达载体 pRNAT-U6.1质粒上,经 PCR 技术鉴定及DNA 双向测序证实其序列无误后,用脂质体包裹并转染卵巢癌细胞系 SKOV3细胞,用荧光显微镜初步观察其在 SKOV3细胞中的转染率。采用实时荧光定量荧光定量 PCR 技术检测转染前后 SKOV3细胞中 Edg4 mRNA 的表达,生化法测定转染前后 SKOV3细胞上清液中溶血磷脂酸(LPA)含量的变化,流式细胞术检测转染后 SKOV3细胞的凋亡率。结果经 PCR 技术鉴定及 DNA 双向测序证实重组真核表达载体的序列无误,并将此命名为 pRNAT-U6.1-siEdg4。荧光显微镜下观察,转染后 SKOV3细胞内有明显绿色荧光信号,转染率为64%;实时荧光定量 PCR 技术检测显示,转染后 SKOV3细胞的Edg4 mRNA 表达水平(0.05±0.01)明显低于转染前(0.29±0.04,P<0.05);SKOV3细胞上清液中LPA 的含量,转染后明显低于转染前[分别为(3.0±1.0)、(7.5±2.2)μmol/L;P<0.05];流式细胞仪检测显示,转染后 SKOV3细胞的凋亡率明显高于转染前(分别为53.38%、0.51%;P<0.05)。结论本研究成功构建了针对人 Edg4基因的 siRNA 真核表达载体,并能较高效转染 SKOV3细胞,转染后能明显抑制 SKOV3细胞中 Edg4 mRNA 的表达,诱导卵巢癌细胞凋亡。
- 乔玉环李留霞郭瑞霞周蔚王淼张孝艳张建好赵先兰张梦真赵国强
- 关键词：卵巢肿瘤基因表达
- 人细小病毒B19 XA株VP1蛋白原核表达及初步鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的:通过DNA重组技术,构建B19病毒XA株VP1全长基因表达载体,诱导重组VP1融合蛋白表达。方法:自B19病毒感染患者血清中提取病毒DNA为模板,用PCR法扩增编码VP1蛋白的全长基因片段,以pET28(a)为表达载体,构建重组表达质粒pET28(a)-VP1,转化E.coli.BL21(DE3),获得重组工程菌株。经IPTG诱导培养获得高效表达的VP1融合蛋白,SDS-PAGE、免疫印迹鉴定表达产物;并以该重组融合蛋白为抗原,免疫家兔,ELISA法检测所获抗体效价。结果:①获得了含重组表达质粒pET28(a)-VP1的正相阳性工程菌株,经IPTG诱导能高效表达VP1融合蛋白。②经ELISA法检测抗VP1多克隆抗体效价为1∶12 800。结论:重组工程菌可表达VP1融合蛋白,且该蛋白具有良好的免疫原性,对诊断试剂制备及疫苗研制具有重要意义。
- 李小青张国成许东亮李志宏
- 关键词：人细小病毒B19VP1蛋白免疫原性
- 六种蛋白质质谱在宫颈癌发生发展中的变化被引量：1
- 2007年
- 目的 探讨在宫颈癌发生发展过程中蛋白质质谱的变化。方法 2005年6月至12月郑州大学第一附属医院采用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱仪，铜离子结合芯片检测宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅰ～Ⅱ级35例，Ⅲ级32例，宫颈癌Ⅰ～Ⅱa期39例，Ⅱb期以上26例以及71例健康女性血清，进行差异蛋白质的比较。结果 在宫颈癌发生发展过程中存在多种蛋白质的表达异常，其中具有分类意义的质荷比为8929.31、7930.52、9127.31、8141.01、7963.06、9280.63的6种蛋白质在宫颈浸润癌患者血清中低表达，含量由正常对照、CINⅠ～Ⅱ级、CINⅢ级、宫颈癌Ⅰ～Ⅱa、宫颈癌Ⅱb期以上，依次降低。结论 6种蛋白质与宫颈癌的发生发展密切相关，有可能成为与宫颈癌相关的一组生物学检测标志物。
- 郭社珂刘红彦乔玉环
- 关键词：飞行时间质谱宫颈癌宫颈上皮内瘤变
- 儿童微小病毒B19感染的诊断与治疗被引量：8
- 2008年
- 人微小病毒B19经常感染儿童,临床表现复杂,轻者表现为自限性的传染性红斑,重者可因血细胞减少而导致患儿死亡。在免疫缺陷的患儿可发生持续感染。文章对改进其诊断和治疗,作了探讨。
- 张国成
- 关键词：微小病毒B19
- ELISA法检测人微小B19抗体及其临床应用评价
- 2008年
- 目的建立检测人微小病毒B19的间接酶联免疫吸附(ELISA)法,评价其临床应用价值。方法采用原保存的XA-B19 VP1独特区蛋白包被ELISA板,优化该方法检测B19抗体的最佳实验条件。与聚合酶链反应(PCR)、parvovirus B19 ELISA方法进行比较,评价其一致性。结果最佳包被量为25 ng/孔,标本血清最佳稀释倍数为1∶200。建立的间接ELISA检测体系与腺病毒、呼吸道合胞病毒、流感病毒、副流感病毒、疱疹病毒抗体阳性血清无交叉反应。其检测B19 IgM敏感性为88.37%,特异性为96.15%,与PCR方法一致性好(kappa值>0.75,P>0.05);与parvovirus B19 IgM ELISA方法符合性好,符合率为96.8%。与parvovirus B19IgG ELISA方法比较kappa值>0.75,P>0.05,两种检测方法一致性好。结论建立的间接ELISA检测B19抗体的方法具有灵敏度高、特异性强、经济、快速、方便等优点,适合于流行病学调查和临床标本检测。
- 聂晓晶李小青张国成许东亮孙新李志宏张学红
- 关键词：人微小病毒B19酶联免疫吸附法
- 妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中溶血磷脂酸受体蛋白Edg4、7的表达及其意义被引量：6
- 2007年
- 目的探讨胎盘组织中溶血磷脂酸受体蛋白 Edg4、7的表达与妊娠期高血压疾病发生的关系及作用机制。方法采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法,检测20例正常晚期妊娠妇女(正常晚孕组)、20例妊娠期高血压患者(妊娠期高血压组)、20例轻度子痫前期患者(轻度子痫前期组)、30例重度子痫前期患者(重度子痫前期组)的胎盘组织中溶血磷脂酸受体蛋白Edg4与 Edg7的表达。结果 (1)表达部位:Edg4与 Edg7主要表达于胎盘绒毛滋养细胞及蜕膜细胞的细胞质和细胞膜。(2)Edg4和 Edg7在胎盘绒毛滋养细胞中的表达阳性率:正常晚孕组分别为25%和20%,妊娠期高血压组分别为60%和40%,轻度子痫前期组分别为80%和65%,重度子痫前期组分别为83.3%和86.7%。轻、重度子痫前期组阳性率明显高于正常晚孕组,两组分别比较,差异有统计学意义(P<0.05);妊娠期高血压组与正常晚孕妇组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(3)Edg4和 Edg7在胎盘蜕膜细胞中的表达阳性率:正常晚孕组分别为20%和25%,妊娠期高血压组分别为55%和50%,轻度子痫前期组分别为70%和55%,重度子痫前期组分别为83.3%和73.3%。轻度子痫前期组及重度子痫前期组阳性表达率明显高于正常晚孕组,两组分别比较,差异有统计学意义(P<0.05);妊娠期高血压组与正常晚孕组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中溶血磷脂酸受体蛋白 Edg4、7呈高表达,提示溶血磷脂酸与胎盘组织中的特异性受体 Edg4、7结合,并参与了妊娠期高血压疾病的发生。
- 李留霞周蔚乔玉环王淼张建好
- 关键词：高血压胎盘
- 妊娠期高血压疾病患者血浆溶血磷脂酸水平的测定及其意义被引量：9
- 2007年
- 妊娠期高血压疾病是影响妊娠预后最常见的妊娠期特有疾病，直接威胁母儿的生命安全，其病因及病理机制尚不清楚，目前多认为其发病可能与血管内皮细胞损伤、自身免疫、凝血及纤溶系统失调等有关。溶血磷脂酸（lysophosphatidic acid，LPA）是一种细胞间磷脂类信号分子，通过G蛋白耦联受体发挥广泛而多样的生物学功能。近年来研究发现，妊娠期高血压疾病患者血液中的LPA可以来源于活化的血小板，而血小板的活化聚集则促使血栓形成，因此，LPA在缺血性脑卒中的诊断及中风预警中有重要价值。本研究通过对妊娠期高血压疾病患者血浆IJPA水平的检测，以探讨LPA与妊娠期高血压疾病的发生、发展及预后的关系。
- 李留霞张建好王淼周蔚乔玉环
- 关键词：妊娠期高血压疾病血浆溶血磷脂酸疾病患者血管内皮细胞损伤妊娠预后
- 人细小病毒B19-XA株VP1蛋白在Bac-to-Bac系统中的表达及其反应原性分析被引量：3
- 2009年
- 目的:探讨人细小病毒B19-XA株VP1蛋白在Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中的表达及其反应原性分析。方法:以PCR法扩增VP1全长基因,并将其克隆到pFastBac1载体中,通过转化E.coliDH10Bac筛选阳性克隆,抽提重组VP1-Bacmid。以VP1-Bacmid经Cellfectin介导转染昆虫细胞Sf9,获取重组杆状病毒,扩增后感染Sf9细胞表达VP1蛋白,并以SDS-PAGE进行鉴定。以表达的重组VP1蛋白作为抗原,采用间接ELISA法检测B19病毒感染的患儿血清抗体,并与德国ELISA试剂盒检测的结果比较,分析表达产物的反应原性。结果:(1)获得含VP1全长基因的重组杆状病毒,转染Sf9细胞后能表达相对分子质量(Mr)约87000的VP1重组蛋白。(2)以表达的重组VP1蛋白作抗原,与B19病毒感染的患儿血清的反应,平均A值为0.46,P/N值>2.1,与德国ELISA试剂盒检测的结果(平均A值为0.68)相似。结论:人细小病毒B19-XA株VP1蛋白在Bac-to-Bac表达系统中可成功表达,且表达产物能有效地与抗B19病毒的阳性血清反应,具有良好的反应原性。
- 李小青张国成许东亮聂晓晶
- 关键词：人细小病毒B19VP1基因杆状病毒反应原性
- 抗呼吸道合胞病毒免疫噬菌体抗体库的构建及初步鉴定
- 2008年
- 目的:构建小儿呼吸道合胞病毒感染患者人源性噬菌体抗体库,搭建人源性抗体制备的技术平台,为小儿呼吸道合胞病毒感染发病机制的研究、诊断、治疗和预防提供新的有效途径。方法:从52例呼吸道合胞病毒感染患儿外周血淋巴细胞中提取总RNA,并逆转录为cDNA。用PCR扩增轻链和重链Fd段(即重链的可变区和第一恒定区)基因,并将扩增的轻链和重链基因片段克隆于pComb3x噬粒载体,电转化XL1-Blue大肠杆菌,经辅助噬菌体M13K07超感染后构建成Fab段噬菌体抗体库。对此抗体库双酶切进行鉴定,并用呼吸道合胞病毒颗粒作抗原进行初步筛选。结果:经过重轻链基因的重组,成功构建一免疫噬菌体抗体基因库,共有2.6×106个不同的克隆菌,其中70%的克隆均含有轻链和重链Fd基因。因此,所构建的噬菌体抗体库的库容量为1.8×106,经初步筛选,抗体库得到了不同程度的富集。结论:利用基因重组技术和噬菌体展示技术,成功构建小儿呼吸道合胞病毒感染患者人源性免疫噬菌体抗体库,为进一步的研究奠定了基础。
- 汪治华张国成许东亮孙新李小青李思袖张学红聂晓晶豆玉凤
- 关键词：抗体库噬菌体展示技术FAB抗体呼吸道合胞病毒
