广州市科技计划项目(12C12101663)
- 作品数：8 被引量：35H指数：4
- 相关作者：雷红涛孙远明袁利鹏徐振林黄启欣更多>>
- 相关机构：华南农业大学广东农工商职业技术学院中国人民解放军海军总医院更多>>
- 发文基金：广州市科技计划项目国家教育部博士点基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程理学化学工程医药卫生更多>>
- 三聚氰胺单试剂荧光偏振免疫分析法被引量：2
- 2013年
- 用三聚氰胺半抗原(MEL)与异硫氰酸荧光素乙二胺(EDF)反应合成了荧光示踪物MEL-EDF,示踪物与三聚氰胺抗体反应得到稳定的单试剂免疫复合物,考察了其结合动力学和置换动力学过程,建立了一种三聚氰胺单试剂荧光偏振免疫分析方法(SR-FPIA).该方法的检出限(LOD)为3.2 ng/mL,半抑制浓度(IC50)为157.1 ng/mL,检测范围(IC20～IC80)为12.2～1012.4 ng/mL,能够满足国家标准和国际食品法典委员会(CAC)对于食品中三聚氰胺最高残留限量的检测要求.整个检测过程在15 min内完成,并且单试剂免疫复合物在4℃下至少可稳定保存30 d以上.本研究对开发三聚氰胺新型免疫检测方法具有重要意义.
- 王强黄启欣孙远明刘英菊徐振林雷红涛
- 关键词：三聚氰胺
- 碱性橙与蛋白间的特异性与非特异性作用荧光光谱比较被引量：1
- 2012年
- 将碱性橙与抗体的作用、碱性橙与牛血清白蛋白(BSA)间的作用分别作为特异性作用和非特异性作用模型,采用荧光光谱法固定激发波长为280 nm,扫描不同温度下碱性橙与抗体和牛血清白蛋白两种相互作用,在300～600 nm的发射波长,比较了两种相互作用的差异。结果表明,碱性橙与抗体结合为单一的静态猝灭过程,二者之间的作用力主要为静电作用力;在溶液中,二者以摩尔比1∶1结合,结合常数为3.88×104L/mol(25#C),3.73×104L/mol(37#C)和2.35×104L/mol(45#C);碱性橙距抗体分子色氨酸残基最短距离(r)为5.52 nm。碱性橙与BSA的结合也为静态猝灭,作用力为静电作用力。但碱性橙与抗体作用过程中形成了激基复合物,与BSA则不形成激基复合物。
- 雷红涛唐秋实黄文凯Chen Situ刘英菊孙远明
- 关键词：碱性橙相互作用荧光光谱
- 二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药单链抗体的制备及广谱特异性被引量：7
- 2012年
- 从分泌抗二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药(DPPs)单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞系(12C2)中提取了总RNA,经RT-PCR反转录成cDNA,设计带linker引物,采用重叠延伸PCR制备单链抗体(scFv)基因,将其克隆到噬菌体载体p3MH中,构建成噬菌体单链抗体表达载体,转化大肠杆菌表达出噬菌体表面展示scFv,对经过Phage-ELISA鉴定的阳性克隆进行噬菌体外壳蛋白基因geneⅢ的去除,用IPTG诱导其可溶性表达,对表达产物进行SDS-PAGE,Western-Blot及ELISA鉴定,并与亲本MAb进行性能对比.结果表明,可溶性表达的scFv分子量为27000;scFv与DPPs的交叉反应率比其亲本MAb提高了1.3～3.5倍,表明其广谱特异性有所提高.由于scFv与MAb相比具有诸多优点,因此本研究为有机磷农药多残留检测方法的建立提供了一种更广谱、更灵敏的新型识别分子.
- 周丽君黄启欣雷红涛王欲晓王强徐振林王弘孙远明
- 关键词：单链抗体噬菌体展示
- 丝网印刷生物传感器在食品分析中的应用被引量：3
- 2013年
- 丝网印刷生物传感器因其成本低,耗时短,微型化等优点,近年来在食品分析领域得到广泛应用。本文对丝网印刷电极的原理、制作过程进行了介绍,并综述了丝网印刷生物传感器在食品分析领域的研究进展,探讨了其在食品分析领域的应用前景。
- 臧帅刘珒卢蓝蓝孙远明刘英菊雷红涛
- 关键词：生物传感器食品分析
- 荧光偏振免疫分析法检测沙丁胺醇被引量：10
- 2013年
- 利用沙丁胺醇半琥珀酸与异硫氢酸荧光素己二胺衍生物反应合成荧光示踪物SAL-HDF,通过优化示踪物和抗体的最适工作质量浓度,建立一种检测沙丁胺醇的荧光偏振免疫分析方法。结果表明:该方法的检出限为72.36ng/mL,半抑制质量浓度(IC50)为975.18ng/mL,检测范围(IC20～IC80)为178.08～4871.15ng/mL。
- 袁利鹏杨金易徐振林孙远明吴翠华雷红涛
- 关键词：荧光偏振免疫分析沙丁胺醇
- 基于洛美沙星免疫原的喹诺酮药物广谱特异性抗体制备的研究被引量：4
- 2012年
- 以洛美沙星为半抗原,采用碳二亚胺法和活泼脂法将洛美沙星分别偶联于牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)制备出免疫原和包被抗原,免疫新西兰大白兔获得了抗体。经间接竞争酶联免疫吸附分析方法(icELISA)鉴定,首次基于洛美沙星一种半抗原获得了能够识别至少11种喹诺酮药物的抗体,且检测限低于10ng/mL,灵敏度满足相关标准检测要求。这对进一步开发喹诺酮类药物多残留检测试剂盒具有重要意义。
- Uwamahoro Emmanuella吕书为唐秋实王弘沈玉栋徐振林孙远明杨金易雷红涛
- 关键词：洛美沙星抗体
- 盐酸克伦特罗抗体纯化及直接竞争ELISA方法研究被引量：7
- 2013年
- 对比饱和硫酸铵法、辛酸法、辛酸-硫酸铵法和硫酸铵-DEAE-纤维素法4种纯化方法对盐酸克伦特罗抗体的纯化效果,研究简易过碘酸钠法与3种改良过碘酸钠法对抗体-辣根过氧化物酶标记率的影响,基于酶标记抗体建立快速检测盐酸克伦特罗的直接竞争酶联免疫分析(ELISA)方法。结果表明:辛酸法纯化抗体得率最高,但纯度最差;辛酸-硫酸铵和硫酸铵-DEAE-纤维素法纯化抗体得率较低,但纯度最好。简易过碘酸钠法所获得的抗体-酶标记得率最高,但抗体效价偏低,改良过碘酸钠法获得的抗体效价明显升高。直接竞争ELISA方法检测盐酸克伦特罗的最低检测限为2.7ng/mL,尿样加标回收率94.2%,批内变异系数为9.1%,批间变异系数为13.8%,与其他结构类似物无明显交叉反应。该方法具有操作简便、步骤少、灵敏度高、特异性更好等特点,可进一步在克伦特罗的监测中发挥重要作用。
- 袁利鹏卢倚群孙远明徐振林雷红涛
- 关键词：克伦特罗纯化酶标记ELISA
- 氟喹诺酮药物格林沙星抗体制备及其icELISA方法建立被引量：2
- 2014年
- 目的：制备格林沙星多克隆抗体并建立间接竞争酶联免疫吸附分析方法（icELISA）。方法：采用碳二亚胺法将格林沙星偶联于牛血清白蛋白（BSA）作为免疫原,免疫新西兰大白兔获多克隆抗体;采用活泼脂法分别将格林沙星、克林沙星、加替沙星、培氟沙星和沙拉沙星偶联于卵清白蛋白（OVA）,制备5种包被抗原并做性能比较;建立icELISA方法并对其灵敏度和特异性进行评价。结果：成功制备了免疫原和包被抗原及抗体,抗体效价最高达64 000倍。以克林沙星-OVA作异源包被,建立的icELISA方法灵敏度最高,半抑制药物浓度（IC50）为9.14 ng/mL,检测限（IC10）为0.9 ng/mL,检测范围（IC20~IC80）为2.3~36.4 ng/mL,与其他喹诺酮类药物无明显交叉反应。结论：首次制备出格林沙星抗体并建立间接竞争酶联免疫吸附检测方法,该法灵敏度高、特异性强,为分析生物样品中格林沙星含量的测定提供了1种新的方法。
- 吕书为雷红涛唐秋实周丽君王睿娇卢蓝蓝王弘沈玉栋孙远明
- 关键词：多克隆抗体
