湖北省科技攻关计划(2005AA301C56)
- 作品数：9 被引量：215H指数：4
- 相关作者：周世力李琳琳董长垣韩雪王国梁更多>>
- 相关机构：江汉大学中国疾病预防控制中心武汉大学更多>>
- 发文基金：湖北省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 肠道病毒71型SHZH03株5′-UTR区遗传进化分析
- 2010年
- 目的构建肠道病毒71型SHZH03、SHZH98、SHZH-001以及具有中枢神经毒性的MS株的5′-UTR序列的系统发育树,研究我国肠道病毒71型的神经毒性和分子流行病学。方法以肠道病毒71型SHZH03株的基因组RNA为模板,通过RT-PCR方法,扩增5非编码区(5′-UTR)序列,将其克隆至pGEM(-T载体中,对其进行序列测定,与我国早期分离的肠道病毒71型SHZH98、SHZH-001以及具有神经毒性的肠道病毒71型标准株MS的5′-UTR序列进行比较分析。结果 SHZH03株的5′-UTR序列全长743bp,与SHZH98株的5′-UTR序列的同源性为99.2%,与具有中枢神经毒性的BrCr株的5′-UTR序列的同源性为94.2%。结论我国分离的SHZH03株和SHZH98株的5′-UTR序列同源性高,而与具有中枢神经毒性的MS株的5′-UTR序列有较大差异。
- 段海生韩雪李金奎王国梁周世力董长垣
- 关键词：肠道病毒71型进化分析
- 肠道病毒71型SHZH03株VP1基因在毕赤酵母中的表达被引量：3
- 2007年
- 利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法扩增得到肠道病毒71型(EV71SHZH03)外壳蛋白VP1基因,经序列测定证实后,构建重组表达质粒VP1/pPIC9K,转化Pichiapastoris酵母宿主菌GS115,以Myc-Tag多克隆抗体作为一抗,利用双层滤膜法筛选酵母转化子.甲醇诱导表达.SDS-PAGE分析显示:表达产物的分子量约为30000,与天然VP1大小一致;ELISA实验表明,表达上清液可与EV71患者急性感染期血清呈阳性反应,表明重组蛋白VP1具有免疫原性.
- 周世力李琳琳何雅青
- 关键词：VP1毕赤酵母
- 肠道病毒71型SHZH03株VP1基因的进化分析被引量：4
- 2005年
- 构建了肠道病毒71型(EV71)中国(深圳)分离株SHZH03全基因组的8个相互重叠的克隆,对其全基因组7406bp的核苷酸进行序列测定,利用DNA-Star软件分析外壳蛋白基因VP1的遗传进化。结果表明,SHZH03和SHZH98与亚洲流行株中的台湾1998年流行株、日本1999年流行株的遗传距离较近,而与新加坡2000年和2001年流行株的遗传距离较远;SHZH03株与一些欧洲流行株有较大的差异。以上结果说明我国深圳地区流行的肠道病毒71型有可能来源于台湾1998年的EV71大规模流行时的毒株。
- 周世力李琳琳田波
- 关键词：肠道病毒71型VP1基因基因分型
- 肠道病毒71型外壳蛋白VP2在Pichia．pastoris酵母中的表达被引量：3
- 2009年
- 利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)的方法,克隆肠道病毒71型(Entero-virus 71,EV71)SHZH03株外壳蛋白VP2基因,构建酵母分泌型表达质粒pPIC9K/VP2,经序列测定证实-αfactor信号肽和VP2的序列和阅读框正确后,用SacI酶切使之线性化,电转化法将目的基因整合到宿主菌GS115基因组上;经转化子表型筛选和PCR分析鉴定后,甲醇诱导筛选到高效表达VP2蛋白的工程菌株。用饱和硫酸铵法对重组蛋白VP2进行了较好的纯化。Western Blot分析表明,重组蛋白VP2具有较好的反应原性,从而为发展EV71快速、高效、廉价诊断试剂奠定了基础。
- 周世力朱绍咏许国权王国梁韩雪
- 关键词：肠道病毒71型VP2巴斯德毕赤酵母
- 肠道病毒71型外壳蛋白VP1在大肠杆菌中的表达被引量：10
- 2007年
- 将扩增得到的肠道病毒71型外壳蛋白VP1基因克隆到测序载体pGEM-T,测序验证该序列为目的片段后,将目的基因克隆到原核表达载体pGEX-5x-1中,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,产物经SDS-PAGE分析和Western blot验证。结果表明,在经IPTG诱导的BL21中检测到分子量与预期大小相符的大约60 kDa的融合蛋白。利用表达产物作为抗原,对EV71感染病人阳性血清的检测初步证实,重组蛋白VP1可以作为检测EV71感染的检测用抗原。
- 周世力李琳琳何雅青
- 关键词：肠道病毒71型VP1
- 深圳市肠道病毒71型血清流行病学初步调查被引量：190
- 2007年
- 目的探讨深圳市不同人群肠道病毒71型血清流行病学规律。方法收集1999-2003年深圳地区正常人血清584份,按年龄0～岁、1～岁、2～岁、5～岁、15～岁和>30岁分成6个组,用ELISA方法对其肠道病毒71型抗体进行检测。结果1999-2003年深圳地区正常人血清中肠道病毒71型抗体阳性率最高的年龄组为5～岁组,阳性率超过50%;15～岁和>30岁组血清阳性率分别为47.7%和39.8%;2～岁血清阳性率约为30%,其中0～岁和1～岁两个低年龄组的血清阳性率最低,不超过20%。结论5岁以下低年龄儿童是肠道病毒71型的易感人群。
- 周世力李琳琳何雅青
- 关键词：肠道病毒71型流行病学
- 肠道病毒71型SHZH03结构蛋白基因的遗传进化分析被引量：13
- 2007年
- 目的对SHZH03株、SHZH98株、亚洲流行株(台湾98年、日本99年、及新加坡2000和2001年流行株等)以及一部分欧洲流行株等的结构蛋白基因进行遗传进化分析。方法在对肠道病毒71型中国(深圳)分离株SHZH03进行全基因组序列测定的基础上,利用DNA-STAR软件对结构蛋白基因进行遗传进化分析。结果SHZH03和SHZH98与亚洲流行株中的台湾98流行株、日本99流行株的遗传距离较近,而与新加坡2000和2001年流行株的遗传距离较远;SHZH03株与一些欧洲流行株有较大的差异。结论我国深圳地区流行的肠道病毒71型有可能来源于台湾1998年EV71大规模流行时的毒株。
- 周世力艾晓武董长垣
- 关键词：肠道病毒71型结构蛋白进化分析
- 肠道病毒71型外壳蛋白VP3在Pichia.pastoris酵母中的表达被引量：1
- 2006年
- 利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)的方法克隆肠道病毒71型SHZH98株外壳蛋白VP3基因,连接T载体,经序列测定后,构建酵母分泌型表达质粒pPIC9K/VP3,经序列测定证实-factor信号肽和VP3的序列和阅读框正确后,用SacI酶切使之线性化,电转化法将目的基因整合到宿主菌GS115基因组上;经转化子表型筛选和PCR分析鉴定后,甲醇诱导,筛选到5株高效表达VP3蛋白的工程菌株.ELISA实验表明:重组蛋白VP3具有较好的免疫原性.
- 周世力李琳琳
- 关键词：肠道病毒71型VP3巴斯德毕赤酵母
- 肠道病毒71型SHZH03株VP2和VP4基因的进化分析被引量：4
- 2006年
- 目的:对SHZH03株、SHZH98株、亚洲流行株(中国台湾98年、日本99年及新加坡2000和2001年流行株等)以及一部分欧洲流行株等的VP2和VP4基因进行了遗传进化分析.方法:在对肠道病毒71型中国(深圳)分离株SHZH03进行全基因组序列测定的基础上,利用DNA-STAR软件对VP2和VP4基因进行遗传进化分析.结果:SHZH03和SHZH98与亚洲流行株中的中国台湾98流行株、日本99流行株的遗传距离较近,而与新加坡2000和2001年流行株的遗传距离较远;SHZH03株与一些欧洲流行株有较大的差异.结论:中国深圳地区流行的肠道病毒71型有可能来源于中国台湾1998年EV71大规模流行时的毒株.
- 周世力李琳琳
- 关键词：肠道病毒71型VP2基因VP4基因
