广东省自然科学基金(06021298)
- 作品数：5 被引量：14H指数：2
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- 相关机构：中山大学附属第三医院中山大学附属第一医院更多>>
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- 生长激素对大鼠胫骨生长板软骨细胞胶原Ⅱ表达的影响
- 2010年
- 目的探讨生长激素（growth hormone，GH）对离体培养的大鼠胫骨生长板的软骨细胞Ⅱ型胶原（collagenⅡ，colⅡ）表达的影响。方法采用两步酶消化法分离培养5～8只三周龄大鼠生长板的软骨细胞，用RT—PCR和免疫组化的方法分别检测不同浓度GH对软骨细胞Ⅱ型胶原mRNA和蛋白的表达。结果GH能促进软骨细胞ColⅡ的表达并呈浓度依赖性，GH在10～500ng/ml之间能促进ColⅡ的表达，与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05），并且以100ng／ml时表达最强，随着GH浓度的加大，其促ColⅡ表达的效应逐渐减弱，1000ng／ml与对照组比较无差异（P〉0．05）。结论GH通过促进软骨细胞ColⅡ的表达能维持软骨细胞的表型，GH在使用过程中不会导致骨龄的增加。
- 潘思年张成喜
- 关键词：软骨细胞生长板生长激素
- 生长激素上调性激素抑制下青春期大鼠生长板原代软骨细胞表皮生长因子的表达被引量：6
- 2010年
- 【目的】研究生长激素(GH)对性激素抑制下的离体青春期大鼠生长板软骨细胞表皮生长因子(EGF)mRNA表达及其蛋白合成、分泌的影响。【方法】3周龄雌性SD大鼠开始注射促性腺激素释放激素拟似物(GnRHa)至7周龄,随后分离培养5～8只大鼠胫骨生长板原代软骨细胞,分为时效组和量效组。采用四氮甲基唑蓝(MTT)以及免疫组化法测定增殖细胞核抗原(PCNA),观察不同剂量、不同干预时间的生长激素对性激素抑制下的离体青春期大鼠生长板软骨细胞增殖的影响。用RT-PCR法检测软骨细胞EGF mRNA的表达,酶联免疫吸附法(ELISA)测定EGF的表达。【结果】生长激素以时效和量效作用方式对雌激素受抑的离体青春期大鼠生长板软骨细胞增殖呈双相型影响。GH作用6h后软骨细胞的EGF mRNA表达显著增加(与0h比较P<0.05),且从6h到24h间存在明显的时间依赖性(组间P<0.05),在18h达到最高峰。GH作用12h后软骨细胞分泌入培养基中的的EGF表达显著增加(与0h比较P<0.05),且从12h到48h间存在明显的时间依赖性(组间P<0.05),在36h达到最高峰。量效关系显示50ng/mL浓度的GH开始能显著增加培养基中EGFmRNA和蛋白的表达,且从50ng/mL至1000ng/mL间存在明显的浓度依赖性(组间P<0.05),在100ng/mL时表达达到最高峰。【结论】生长激素能促进性激素抑制下的离体青春期大鼠生长板软骨细胞的增殖及EGF mRNA和蛋白的表达。
- 潘思年张成喜李燕虹马华梅朱顺叶杜敏联
- 关键词：软骨细胞生长板生长激素表皮生长因子
- 生长激素对促性腺激素释放激素拟似物处理后的青春期大鼠生长板软骨细胞增殖和表型的影响被引量：1
- 2010年
- 目的研究生长激素(GH)对促性腺激素释放激素拟似物(GnRHa)处理后的离体青春期大鼠生长板软骨细胞增殖和表型的影响。方法采用两步酶消化法分离培养经GnRHa处理后的5～8只雌鼠胫骨生长板软骨细胞,用四氮甲基唑蓝(MTT)、流式细胞仪测定细胞周期以及免疫组化法测定增殖细胞核抗原(PCNA)和胶原Ⅱ(ColⅡ)的表达,观察不同作用时间和不同剂量的GH对软骨细胞增殖和表型的影响。结果 GH能促进体外培养GnRHa处理后的青春期大鼠生长板软骨细胞的增殖,并存在一定的时效和量效关系。GH作用后第1天、第2天、第3天、第4天、第5天、第6天组与对照组比较有统计学意义(P<0.05),并以第4天时的促增殖效应最强。GH浓度低时(10ng/ml,20ng/ml)促增殖效应不明显(P>0.05),而浓度增加至50ng/ml时促增殖效应开始显现(P<0.05),至100ng/ml时促增殖效应最明显。GH亦能促进ColⅡ的表达,以GH作用后第4天,浓度为100ng/ml时ColⅡ的表达最强。结论 GH能以直接作用的方式促进体外培养的经GnRHa处理后的大鼠胫骨生长板软骨细胞的增殖和ColⅡ的表达,GH促增殖的剂量与临床应用剂量存在一致性,为GH克服GnRHa使用过程中所造成的生长减速提供了实验理论依据。
- 潘思年张成喜李燕虹马华梅朱顺叶杜敏联
- 关键词：软骨细胞细胞培养技术生长激素生长板
- 大鼠胫骨生长板软骨细胞的体外培养及鉴定被引量：7
- 2009年
- 【目的】建立体外培养及鉴定大鼠胫骨生长板软骨细胞的方法。【方法】采用胰酶和Ⅱ型胶原酶序贯消化法对5～8只3周龄SD大鼠胫骨生长板软骨行体外分离、培养并传至第6代、观察各代软骨细胞形态,MTT法绘制细胞生长曲线,Ⅱ型胶原免疫组化染色,阿力新蓝染色检测各代软骨细胞外基质硫酸糖氨多糖(GAG)含量和结构,采用逆转录聚合酶链反应检测各代细胞Ⅱ型胶原和aggreacan mRNA表达水平。【结果】体外培养的软骨细胞随着传代次数的增加,细胞形态由原代的多角形逐渐变为长梭形;MTT比色法显示,4代以前的软骨细胞的生长曲线近似"S"形,在第4～8天细胞呈对数生长,在第9～10天达平台期,至第11天开始出现生长抑制。4代以前的软骨细胞Ⅱ型胶原免疫组化呈强阳性。原代至第6代软骨细胞的GAG含量、长链分子百分比分别为0.35±0.04,(83.0±3.6)%;0.33±0.02,(78.7±4.2)%;0.31±0.06,(77.7±2.3)%;0.30±0.05,(77.0±5.3)%;0.14±0.01,(44.3±4.0)%;0.10±0.01,(39.3±2.5)%及0.07±0.01,(28.0±2.0)%,显示从第4代后随着传代次数的增加逐渐下降(P<0.05),Ⅱ型胶原和aggreacan mRNA表达水平亦显著减少(P<0.05)。【结论】本研究所采用的软骨细胞分离和培养的方法,能在短时间内获得高纯度和高存活率的软骨细胞,第3代及以前的细胞保留了软骨细胞的表型特征,增殖较快,这一方法为更深入地从细胞水平研究儿童的生长提供了可靠有效的模式。
- 潘思年杜敏联马华梅李燕虹
- 关键词：软骨细胞细胞培养
- GH与EGFR受体后信号交联在GH促进青春期大鼠生长板软骨细胞增殖中的作用被引量：2
- 2010年
- 目的:观察促性腺激素释放激素类似物(GnRHa)处理后青春期大鼠生长板体外培养的软骨细胞内是否存在生长激素(GH)与表皮生长因子受体(EGFR)之间的信号交联(cross-talk)。方法:3周龄雌性SD大鼠开始注射GnRHa至7周龄;随后分离培养5-8只大鼠胫骨生长板软骨细胞,在GH作用前分别加入JAK2阻断剂AG490(1nmol/L、10nmol/L和100nmol/L)、EGFR酪氨酸激酶阻断剂AG1478(0.1nmol/L、1nmol/L和10nmol/L)和表皮生长因子(EGF)中和抗体(0.1mg/L、1mg/L和10mg/L);采用四氮甲基唑蓝(MTT)以及免疫组化法测定增殖细胞核抗原(PCNA),观察不同阻断剂对软骨细胞增殖的影响;采用Western blotting检测软骨细胞p-ERK1/2及p-EGFR的表达。结果:GH作用后具有浓度依赖性地促进软骨细胞增殖和增加p-ERK1/2及p-EGFR水平的作用,100μg/L时作用最为明显。AG490及AG1478几乎能完全抑制GH促进软骨细胞增殖和激活ERK1/2及EGFR的作用。而EGF中和抗体仅能部分抑制GH的作用。结论:GH通过激活JAK2而激活其下游的ERK通路,实现其直接促细胞增殖效应。GH亦能通过激活EGFR及其信号转导通路促进细胞增殖效应,表明GH通路和EGF通路间存在相互作用。
- 潘思年张成喜李燕虹马华梅朱顺叶杜敏联
- 关键词：生长激素促性腺激素释放激素
