湖南省卫生厅科研基金(B2005-072)
- 作品数：16 被引量：66H指数：6
- 相关作者：杨作成陈淳媛孙跃女李小明邓长柏更多>>
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- 阻断Smad3表达对转化生长因子β1诱导肌成纤维细胞增殖的影响被引量：10
- 2008年
- 目的探讨转化生长因子β1及其信号转导分子Smad3在肌成纤维细胞C2C12殖中的作用。方法以转化生长因子β1作用于C2C12细胞,对其信号转导分子Smad3基因进行RNA干扰,用MTT法检测转化生长因子β1诱导的C2C12细胞增殖。结果0、1、5和10μg/L转化生长因子β1作用C2C12细胞24h后,C2C12细胞增殖随转化生长因子β1浓度增加而增加,且呈剂量依赖性(光密度值分别为0.096±0.015、0.177±0.014、0.240±0.028和0.312±0.012,P<0.01);经200pmol/LsiRNA-Smad3转染24h后,再用5μg/L转化生长因子β1作用,其细胞增殖(光密度值0.063±0.011)比内对照组下降(光密度值0.137±0.016,P<0.01)。结论转化生长因子β1通过Smad3信号转导促进C2C12细胞增殖并呈剂量依赖性,siRNA-Smad3可有效阻断其信号转导而降低C2C12细胞增殖。
- 邓长柏杨作成
- 关键词：病理学与病理生理学成纤维细胞SMAD3基因转化生长因子Β1
- 静脉内免疫球蛋白治疗病毒性心肌炎的机制研究进展被引量：8
- 2007年
- 静脉内免疫球蛋白（IVIG）是一种免疫调节因子，已被广泛应用于临床。病毒性心肌炎（VM）是一种感染-免疫机制共同作用所致的疾病，自身免疫反应可能是其主要致病机制。MG治疗Ⅷ主要通过封闭Fc抗体、调节细胞因子分泌及淋巴细胞增殖、产生特异性抗体或抗自身抗体活性而对Ⅷ起免疫调节功能；并通过减少细胞凋亡、调节细胞周期、参与蛋白质自稳调节等多种机制共同作用于VM。MG治疗儿童VM可改善左室功能，提高存活率，对暴发性心肌炎有较好的疗效。
- 陈淳媛杨作成
- 关键词：免疫球蛋白类静脉内心肌炎
- TGF-β_1对新生大鼠心肌成纤维细胞Ⅰ型和Ⅳ型胶原合成的影响被引量：1
- 2007年
- 目的:探讨TGF-β1对原代培养的新生大鼠心肌成纤维细胞Ⅰ型与Ⅳ型胶原表达的影响。方法:取出生1-3天的SD大鼠心脏,利用酶消化法结合差速贴壁体外培养心肌成纤维细胞;分别用不同浓度的TGF-β1(10 ng/mL、1ng/mL、0 ng/mL)干预心肌成纤维细胞,于干预后24h采用免疫细胞化学染色法检测Ⅰ型胶原和Ⅳ型胶原的表达。结果:1.以胰酶与Ⅱ型胶原酶合用消化分离新生大鼠心肌成纤维细胞,可将心肌细胞和心肌成纤维细胞分离,心肌成纤维细胞抗波形蛋白(vimen-tin)染色阳性,抗α-横纹肌肌动蛋白(α-sarcomeric actin)染色阴性。2.用0(对照组)、1、10 ng/mL的TGF-β1干预心肌成纤维细胞24h后,免疫细胞化学染色法发现心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原和Ⅳ型胶原的表达随着TGF-β1浓度的增加而增加。结论:TGF-β1能促进细胞外基质的合成,增强Ⅰ型和Ⅳ型胶原的表达。
- 谢朝晖Elifuraha Francis Mchomvu杨作成
- 关键词：转移生长因子Β1
- mTOR信号通路与心脏疾病被引量：3
- 2007年
- 李小明杨作成
- 关键词：心脏疾病信号通路MTORRAPAMYCIN信号转导通路雷帕霉素靶蛋白
- mTOR基因转染对NIH3T3成纤维细胞增生的影响
- 2008年
- 目的探讨mTOR基因转染对NIH3T3成纤维细胞增生的影响。方法运用电穿孔法将pcDNA3-mTOR质粒转染NIH3T3成纤维细胞,经G418筛选抗性克隆,RT-PCR和Western印迹分析检测转染组和对照组细胞mTOR mRNA与蛋白的表达,MTT方法检测细胞增生。结果转染组细胞mTOR mRNA和蛋白质的表达显著增强(P<0.01);MTT法检测转染组光吸收值显著大于对照组(P<0.01);结论mTOR基因转染成纤维细胞可获稳定表达,并明显促进成纤维细胞增生。
- 李小明杨作成陈淳媛李卓颖
- 关键词：MTOR基因转染成纤维细胞细胞增生
- mTOR/p70S6K信号通路与NIH3T3成纤维细胞增殖被引量：10
- 2008年
- [目的]探讨mTOR/p70S6K信号通路激活在成纤维细胞增殖中的作用。[方法]以mTOR基因转染小鼠NIH3T3成纤维细胞,用MTT法检测其是否增殖,用RT-PCR和Western印迹分析测定细胞mTOR、p70S6KmRNA与蛋白的表达。[结果]MTT法检测转染组细胞增殖能力增强;RT-PCR与Western印迹分析转染组中mTOR和p70S6K的mRNA与蛋白表达水平明显增加(P﹤0.01)。[结论]mTOR/p70S6K信号通路激活可能介导成纤维细胞增殖。
- 李小明杨作成陈淳媛李卓颖
- 关键词：雷帕霉素靶蛋白成纤维细胞信号转导
- 哺乳类雷帕霉素靶蛋白信号通路对柯萨奇病毒B3诱导的心肌成纤维细胞Smad3蛋白和Ⅰ型胶原表达调控的实验研究被引量：4
- 2008年
- 目的探讨哺乳类雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路对柯萨奇病毒B3（CVB3）诱导的心肌成纤维细胞Smad3蛋白（Smad3）和Ⅰ型胶原表达的调控作用。方法CVB3感染原代培养的SD鼠心肌成纤维细胞，用mTOR的抑制剂—雷帕霉素阻断mTOR信号通路，采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Westernblot方法检测细胞Smad3和Ⅰ型胶原表达。结果（1）雷帕霉素干预心肌成纤维细胞48h，RT—PCR检测mTOR／β-肌动蛋白（actin）光密度值分别为1nmol/L组0．381±0．022、10nmol/L组0．282±0．014、100nmol/L组0．263±0．012，均低于对照组1．45±0．04，10nmol/L组和100nmol/L组低于1nmol/L组，差异均有统计学意义（P均〈0．05）。10nmol/L雷帕霉素干预心肌成纤维细胞0h（对照组）、24h．48h、72h，其mTOR／β-actin光密度值分别为0．341±0．022、0．203±0．021、0．163±0．022、0．144±0．013，光密度值随雷帕霉素干预时间的延长而降低（P〈0．05）。（2）RT-PCR和Westernblot测得对照组、CVB3组、CVB3＋雷帕霉素组心肌成纤维细胞Smad3／β-actin光密度值分别为0．63±0．06、1．18±0．03、0．77±0．08，Smad3／β-actin灰度值分别为0．89±0．07、2．27±0．13、0．131±0．013。RT—PCR测得上述各组Ⅰ型胶原／B—actin光密度值分别为1．13±0．06、1．303±0．012、0．82±0．03。以上结果显示CVB3组光密度值／灰度值高于对照组，CVB3＋雷帕霉素组低于CVB3组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论雷帕霉素抑制CVB3诱导的心肌成纤维细胞Smad3和Ⅰ型胶原表达，提示mTOR信号通路可能通过调控Smad及Ⅰ型胶原表达，在CVB3诱导的心肌纤维化过程中起重要作用。
- 陈淳媛孙跃女杨作成蔡姿丽
- 关键词：心肌疾病肠道病毒属
- TGF-β1介导新生大鼠心肌成纤维细胞Ⅰ型和Ⅳ型胶原合成的研究(英文)被引量：2
- 2007年
- 目的:观察TGF-β1对原代培养的新生大鼠心肌成型与Ⅳ胶原表达的影响。方法:取出生3~7d的SD大鼠心脏,利用酶消化法结合差速贴壁体外培养心肌成纤维细胞;分别用不同浓度的TGF-β1(TGF-β1=10 ng/mL、1ng/mL、0 ng/mL)干预心肌成纤维细胞,分别于干预后5h、24h,采用RT-PCR检测I型胶原和Ⅳ型胶原的表达。结果:1.用0ng/mL(对照组),1ng/mL和10ng/mL的TGF-β1干预心肌成纤维细胞5h,RT-PCR检测I型胶原/β-actin光密度值分别为0.61±0.02,0.73±0.03和0.86±0.04,光密度值随着TGF-β1浓度的增加而增加,各组比较,差异有显著性(P<0.01);干预心肌成纤维细胞24h后,RT-PCR检测I型胶原/β-actin光密度值分别为0.65±.03,0.91±0.02和0.98±0.02,光密度值随着TGF-β1浓度的增加而增加,各组比较,差异有显著性(P<0.01)。2.用0 ng/mL(对照组),1ng/mL and 10ng/mL的TGF-β1干预心肌成纤维细胞5h,RT-PCR检测Ⅳ型胶原/β-actin光密度值分别为0.58±0.06,0.71±0.02,0.87±0.02,光密度值随着TGF-β1浓度的增加而增加,各组比较,差异有显著性(P<0.01);干预心肌成纤维细胞24h后,RT-PCR检测Ⅳ型胶原/β-actin光密度值分别为0.62±0.01,0.83±0.05,0.96±0.02,光密度值随着TGFβ1浓度的增加而增加,各组比较,差异有显著性(P<0.01)。结论:TGFβ1能加强I型和Ⅳ型胶原的表达,在24小时内呈时间和剂量依赖性。
- Elifuraha Francis Mchomvu杨作成孙跃女李小明陈淳媛
- 关键词：转移生长因子Β1
- siRNA阻断肌成纤维细胞内源性Smad3表达的研究被引量：6
- 2007年
- 目的观察Smad3基因的RNA干扰(RNAi)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的小鼠肌成纤维细胞(C2C12)的Smad3表达。方法实验分为实验组、内对照组和空白对照组。用不同浓度TGF-β1干预C2C12细胞,利用体外转录合成的siRNA-Smad3,以阻断Smad3基因表达。用Westernblot检测Smad3和磷酸化的Smad3。结果5ng/mlTGF-β1干预C2C12细胞,促进Smad3磷酸化。0.5h开始诱导Smad3磷酸化,5h达高峰。TGF-β1干预C2C12细胞,诱导Smad3磷酸化呈剂量依赖性。siRNA-Smad3转染C2C12细胞24h,Smad3表达逐渐被抑制到无表达。siRNA-Smad3转染C2C12细胞24h后,加5ng/mlTGF-β1干预,Smad3无表达。结论TGF-β1促进C2C12细胞Smad3磷酸化呈剂量与时间依赖性;siRNA阻断C2C12细胞Smad3表达与Smad3磷酸化。
- 邓长柏杨作成
- 关键词：SMAD3转化生长因子Β1成纤维细胞
- 基质金属蛋白酶及其在心肌纤维化中的作用(英文)被引量：5
- 2006年
- 基质金属蛋白酶(MMPs)是一组能降解细胞外基质成分的具有重要生理和病理功能的酶。过去研究已对MMPs的生化和结构方面等了解取得了很大的进展,其中包括MMPs的活化,催化机制,底物特异性,组织金属蛋白酶抑制剂(TIMPs)的抑制机制,等,然而仍有许多重要未决问题。为此,本文对MMPs的结构,分类,信号通路,及其在心肌纤维化中的作用等进展进行探讨。
- Elifuraha Francis Mchomvu杨作成
- 关键词：金属蛋白酶类转化生长因子心肌纤维化
