国家自然科学基金(30170678)
- 作品数：29 被引量：109H指数：6
- 相关作者：李碧春秦洁陈国宏肖小珺蔡琳琳更多>>
- 相关机构：扬州大学中国农业科学院家禽研究所湖州师范学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 冷冻保护剂和平衡方法对鸡胚原始生殖细胞冷冻保存效果的影响被引量：4
- 2004年
- 采用Ficoll密度梯度离心,提取第19期(孵化72h)和第28期(孵化132h)性腺中的原始生殖细胞(PGCs),应用不同的冷冻保护剂和平衡方法进行冷冻保存。PGCs解冻后用DMEM培养液进行体外培养,并采用苔盼蓝染色法鉴定复苏后PGCs的存活情况。结果表明:1从第19期或第28期性腺中获取的PGCs在同一种冷冻保护剂下,平衡方法对PGCs的存活率有显著或极显著影响,平衡方法1的冷冻保护效果优于平衡方法2。2采用相同的平衡方法,冷冻保护剂C的冻存效果与其他保护剂之间存在显著或极显著差异,冷冻保护剂E和F对PGCs的冻存效果次之,冷冻保护剂A、B和D对PGCs的冻存效果最差。复苏后PGCs进行体外培养,其存活时间与分离后PGCs直接培养相比未出现显著缩短现象。
- 肖小珺秦洁蔡琳琳李碧春
- 关键词：原始生殖细胞冷冻保存
- 保护剂浓度对第19期鸡胚原始生殖细胞存活率的影响
- 2004年
- 采用Ficoll密度梯度离心 ,提取第 19期 (孵化 72h)性腺中的原始生殖细胞 (PGCs) ,用不同浓度的冷冻保护液进行冷冻保存。复苏后的PGCs用台盼蓝染色检测其存活率 ,并进行体外培养。结果发现 :在同一浓度下 ,不同的冷冻保护液之间存在显著 (P <0 0 5 )或极显著 (P <0 0 1)差异。在同一种冷冻保护液下 ,不同的浓度之间存在显著(P <0 0 5 )或极显著 (P <0 0 1)差异 ,具体表现为冷冻保护液浓度越大 ,复苏后细胞的存活率越低。PGCs复苏后于体外培养 ,可增殖形成细胞克隆 。
- 肖小珺秦洁蔡琳琳李碧春
- 关键词：性腺鸡胚原始生殖细胞存活率冷冻保存体外培养
- 乌骨鸡早期胚胎发育的研究被引量：7
- 2002年
- 在鸡产蛋后 ,不同时间获取受精卵 ,观察早期胚胎发育变化规律。依据胚盘形态的变化 ,可将鸡胚在体内发育过程分为两个时期 :(1)距前一个蛋产出后 5 5h(0～ 1h子宫龄 )至 15 5h(10～ 10 5h子宫龄 )为鸡胚的卵裂期 ,卵裂的结果形成厚约 6～ 7层细胞的胚盘。 (2 )距前一个蛋产出后 17 5h(12～ 12 5h子宫龄 )至明区形成期 ,即鸟类的囊胚期晚期 ,结果在胚盘中央形成透明的明区和周围不透明的暗区。乌骨鸡受精卵第一次分裂发生在产蛋后 5h(0～ 0 5h子宫龄 ) ,桑椹期在产蛋后 11 5h(6～ 6 5h子宫龄 ) ,囊胚期在产蛋后 15 5h(10～ 10 5h子宫龄 )。
- 李碧春陈国宏丁家桐王克华
- 关键词：乌骨鸡早期胚胎发育受精卵
- 鸡胚盘细胞的研究进展
- 2005年
- 鸡胚盘细胞存在于未孵化的新鲜种蛋中,是一种具有多潜能性的胚胎干细胞。通过胚盘细胞移植法可制备体细胞或种系细胞嵌合体。如果将外源基因转入受体胚盘,受体胚后代则可能成为转基因鸡。利用胚盘细胞作为转基因载体,生产转基因鸡是研究禽类转基因的一种理想方法。作者就胚盘细胞及其研究进展给予综述。
- 蔡琳琳肖小珺秦洁李碧春
- 关键词：胚盘细胞体外培养嵌合体转基因
- 鸡胚原始生殖细胞定向诱导分化成骨细胞的研究
- 2007年
- 探讨体外培养的鸡胚胎原始生殖细胞(EPGCs)的多向分化潜能。分别从发育至19期和28期的鸡胚胎性腺中获取EPGCs,体外培养传代。通过地塞米松、β-甘油磷酸钠和维生素C诱导EPGCs向成骨细胞分化,分别进行碱性磷酸酶改良钙钴法染色鉴定、钙结节Von Kossa's染色鉴定和免疫组化鉴定。结果表明:EPGCs被诱导21 d后,定向分化成成骨细胞,诱导率达到80%,碱性磷酸酶改良钙钴法染色、钙结节Von Kossa's染色和免疫组化鉴定均呈阳性,阳性率为75%-85%。由此可得出在诱导条件下,EPGCs体外可定向诱导分化为成骨细胞。
- 葛剑辉孙国波魏彩霞孙鹏翔李碧春
- 关键词：成骨细胞分化
- 第28期鸡胚原始生殖细胞的冷冻保存与体外培养研究被引量：2
- 2005年
- 利用Ficoll密度梯度离心,提取鸡胚第28期(孵化132h)性腺中的原始生殖细胞(PGCs),用不同的冷冻保护液,对PGCs采用分离后直接冷冻保存和体外培养24h后冷冻保存2种方法,以筛选合适的冷冻保护体系。结果发现,分离提纯后直接进行冷冻保存的PGCs,存活率最高为(87.07±1.29)%;体外培养24h后进行冷冻的PGCs,存活率最高为(44.08±1.19)%。对复苏后的PGCs进行体外培养结果发现,分离提纯后直接进行冷冻的PGCs,在体外培养过程中具有形成细胞克隆的能力,且可传代和进行体外分化;而体外培养24h后进行冷冻的PGCs,复苏后在体外培养过程中不能形成细胞克隆,且在体外培养40h左右死亡。
- 肖小珺蔡琳琳秦洁李碧春
- 关键词：原始生殖细胞冷冻保存体外培养
- 牛体外受精胚胎衍生干细胞能力影响因素的研究被引量：3
- 2006年
- 以牛卵巢卵母细胞体外受精获取囊胚期胚胎，比较体外受精牛胚胎不同获取内细胞团的方法和不同培养液对体外培养胚胎干细胞能力的影响。结果表明，囊胚期胚胎不除去透明带而直接培养产生胚胎干细胞，初次克隆率为55％；胰酶法去透明带分离的内细胞团（ICM）培养产生胚胎干细胞，初次克隆率为90％。免疫外科法去透明带分离的ICM在4种不同的培养液中，初次克隆率分别为16．4％、11．5％、21．8％、18．2％，但是其分离的ICM经传代后形成的衍生细胞不易发生分化，经过4～6代的传代，仍然保持其完整的形态，说明免疫外科法是一种理想的牛ICM分离法，培养液为D20＋LIF（40ng／mL）可用于牛胚胎干细胞培养。
- 李碧春陈国宏吴信生徐琪吴圣龙蔡中涛Hassan Hussein Musa
- 关键词：卵母细胞体外受精胚胎干细胞
- 鸡胚盘内转染外源基因的研究被引量：2
- 2004年
- 采用显微注射法,分别将人生长激素(hGH)基因和人组织激肽释放酶基因(KLK1)直接注射到孵化24h的鸡胚中,继续孵化。在注射的320枚鸡胚中,孵化前7d死亡194枚,8～18d死亡108枚,孵出雏鸡18只,孵出率为5.6%(18/320)。8只雏鸡分别于出壳后的第1、2、3、5天死亡。7只于3月龄死亡。3只鸡(1公2母)存活至今,并开始产蛋。死亡雏鸡具有脚瘫、体弱、斜颈、站立不稳等异常表现,存活鸡无外观异常,但有产蛋紊乱现象。从孵化4d后死亡的150枚鸡胚和18只出壳雏鸡的组织提取基因组DNA,并用DNA杂交试验进行基因整合检测,结果发现其中的3枚鸡胚和3只雏鸡为人生长激素基因整合阳性,基因整合率为12.5%(6/48);18枚鸡胚和6枚雏鸡为KLK1整合阳性,整合率为22.2%(24/108)。结果表明:鸡胚盘内细胞通过显微注射法可以转染外源基因。
- 李碧春孙怀昌陈国宏何光余肖小君吴圣龙冀得君
- 关键词：胚盘转基因显微注射
- 鸡胚不同发育时期原始生殖细胞的分离方法被引量：22
- 2003年
- 采用Ficoll密度梯度离心法和EDTA 胰酶酶解法两种方法 ,分别提取第 14期 (孵化 5 3h)血液、第 19期 (孵化 72h)和第 2 8期 (孵化 132h)生殖腺中的PGCs,以比较两种分离方法对 3个发育时期的鸡胚原始生殖细胞在相同体外培养条件下存活时间的差异。结果发现 ,两种分离方法均能分离到一定数量的原始生殖细胞 ,但是酶解法分离到的原始生殖细胞的相对数量较Ficoll密度梯度离心法的多 ,存活时间较长 ,是一种适宜的分离方法 ;对鸡胚发育第 14、 19、 2 8期 3个时期提取的原始生殖细胞进行体外培养 ,存活时间分别为 :72h、 88h和 80h ,三者之间差异显著。结果表明 :在鸡胚孵化的第 19期 ,因原始生殖细胞大量聚集在肢体后端的生殖嵴原基处 ,因而较容易收集 ,体外培养较为适宜 。
- 李碧春秦洁肖小珺陈国宏吴信生吴圣龙
- 关键词：原始生殖细胞存活时间
- 不同时期鸡胚体外培养及其影响因素的研究被引量：4
- 2002年
- 采用代用蛋壳体外培养方法 ,对不同时期鸡胚胎换蛋壳培养进行了研究。结果表明 :体外受精卵体外培养发育率为 1 0 %。X期胚胎体外培养的出雏率为 1 .2 % ;孵化 1日龄胚胎体外培养的出雏率为 7.9% ;去 1 /4壳的鸡胚出雏率为 3 .7% ;鸡胚胎换蛋壳以后 ,添加 6～ 8m
- 陈阮敬李碧春陈国宏王克华成荣窦涛存何光余
- 关键词：体外培养影响因素胚胎代用蛋壳孵化
