兰州军区医药卫生科研基金(LXH2007014)
- 作品数：6 被引量：12H指数：3
- 相关作者：滕勇胡蕴玉王臻李旭升关玉成更多>>
- 相关机构：第四军医大学西京医院兰州军区乌鲁木齐总医院第四军医大学口腔医院更多>>
- 发文基金：兰州军区医药卫生科研基金国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
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- 人骨髓基质干细胞的单细胞克隆培养与鉴定被引量：3
- 2012年
- 背景:骨髓基质干细胞缺乏特异的表面识别分子,其鉴定一直是研究中的难题。目的:探索人骨髓基质干细胞培养条件,获得体外克隆化培养的成人骨髓基质干细胞,并对其进行表型分析及分化潜能鉴定。方法:外科手术取髂骨术中抽取骨髓,采用密度梯度离心法初步分离骨髓基质干细胞,用极限稀释法进行克隆化培养;流式细胞仪对克隆化培养的骨髓基质干细胞进行细胞表面标志检测,并进行体外成软骨、成骨及心肌细胞诱导,免疫组织化学及RT-PCR检测成软骨、成骨及心肌细胞表达,确定其表型及分化潜能。结果与结论:单个细胞来源骨髓基质干细胞在体外1:3传代一般可以传28代左右,24代以前生长状态良好;经流式细胞仪检测,骨髓基质干细胞表达CD29,CD44,CD106,不表达CD14,CD34,CD45,HLA-DR;骨髓基质干细胞体外可向成骨、成软骨及心肌细胞分化,提示体外克隆化培养的骨髓基质干细胞能维持良好的成体干细胞生物学特性。
- 滕勇徐建丽李旭升胡蕴玉王臻
- 关键词：骨髓基质干细胞分化
- hTERT激活人骨髓间充质干细胞端粒酶活性被引量：3
- 2007年
- [目的]明确外源性人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)能否激活人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchyme stem cell,hBMSC)的端粒酶活性。[方法]培养人骨髓间充质干细胞,采用脂质体转染法,将编码hTERT基因的真核表达质粒pCIneo-hTERT导入单克隆培养的人骨髓间充质干细胞。利用G418加压筛选,稳定后,用RT-PCR检测hTERT mRNA的表达,Western Blot检测其蛋白质表达,专用检测盒RT-PCR法检测端粒酶的活性。[结果]骨髓间充质干细胞转染质粒pCIneo-hTERT后,生长状态良好。加G418后第2d,细胞开始悬浮,逐渐死亡。第10d,未转染组细胞在G418作用下全部死亡,转染组细胞开始克隆增殖。G418浓度降至100μg/ml维持筛选,20d左右开始出现明显抗G418细胞克隆。转染后细胞,表达hTERT的 mRNA及其蛋白,同时端粒酶活性显著增高。[结论]将外源性hTERT导入人骨髓间充质干细胞可以激活细胞的端粒酶活性,为建立永生化细胞系奠定了基础。
- 滕勇胡蕴玉王捍国宿学家王臻关玉成高杰
- 关键词：人端粒酶逆转录酶端粒酶人骨髓间充质干细胞基因
- 人hTERT基因的pCIneo真核表达载体的构建
- 2011年
- 目的:构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)片段的基因的pCIneo真核表达载体。方法:根据hTERT mRNA序列设计引物,人胚肾转化细胞系293总RNA反转录得到的cDNA为模板,PCR扩增后克隆到载体pCIneo上,并进行酶切鉴定及测序。结果:酶切结果表明hTERT基因已经插入pCIneo真核表达载体,测序结果显示,核苷酸序列的同源性为99.89%,氨基酸序列的同源性为100%。结论:成功构建hTERT基因的pCIneo真核表达载体,为其下一步的研究奠定了基础。
- 滕勇李旭升关玉成李雁军
- 关键词：人端粒酶逆转录酶基因转染
- 永生化人骨髓基质干细胞株MSCxj的转化特征
- 2011年
- 我们通过转染外源性人端粒酶催化亚单位（hTERT）基因建立永生化人骨髓基质干细胞株MSCxj。我们已报告了MSCxj细胞形态学和生长增殖等两个方面的生物学特征。本实验旨在观察该细胞株是否具有其他转化特征。
- 滕勇胡蕴玉李旭升王臻白建萍
- 关键词：骨髓基质永生化人端粒酶催化亚单位细胞形态学生长增殖
- 端粒酶反转录酶基因介导的人骨髓基质干细胞永生化研究被引量：6
- 2010年
- 目的建立永生化人骨髓基质干细胞系,为组织工程提供种子细胞库及标准化细胞系。方法取单克隆培养的人骨髓基质干细胞,采用脂质体转染法将人端粒酶反转录酶(hTERT)基因导入细胞,G418筛选后获得阳性克隆,体外连续扩增培养,RT-PCR检测转染细胞内hTERT基因的整合与表达。取转染后第100代细胞,用成骨诱导条件培养基(普通培养基加地塞米松、β-甘油磷酸、维生素C)、软骨诱导条件培养基(普通培养基加地塞米松、TGF-β、维生素C)、心肌细胞诱导条件培养基(普通培养基加5-氮胞苷)分别向成骨、软骨、心肌细胞诱导培养。于培养后第7、14、21、28天,采用免疫细胞化学染色观察成骨细胞诱导Ⅰ型胶原、骨钙素的表达;采用茜素红染色观察钙结节形成;采用免疫细胞化学染色观察软骨细胞诱导Ⅱ型胶原的表达,同时进行甲苯胺蓝染色;采用免疫细胞化学染色观察心肌细胞诱导横纹肌肌动蛋白的表达,分析细胞系向成骨、软骨及心肌细胞分化的能力。结果 hTERT稳定转染入人骨髓基质干细胞,转化细胞端粒酶表达阳性。转化细胞在体外长期连续培养下生长良好,已传至136代。取第100代细胞进行诱导分化,结果显示其能向成骨、软骨及心肌细胞分化。结论外源性hTERT的导入可致人骨髓基质干细胞永生化,并维持成体干细胞的多向分化特性,可为组织工程提供种子细胞库并为组织工程种子细胞研究提供标准化细胞。
- 滕勇胡蕴玉王捍国王臻关玉成高杰
- 关键词：基因细胞永生化骨髓基质干细胞
- 永生化人骨髓基质干细胞系MSCxj的转化特征
- 2011年
- 目的明确永生化人骨髓基质干细胞系MSCxj是否具有转化特征。方法复苏已建立的永生化人骨髓基质干细胞系MSCxj,扩大培养,从致瘤性、血清依赖性、悬浮生长能力和接触抑制性等方面观察细胞的转化特征。结果细胞无裸鼠致瘤性,在软琼脂内不能生长,血清依赖性无显著降低,仍具有接触抑制性。结论 MSCxj基本上为正常细胞而无明显转化特征。
- 滕勇胡蕴玉王臻李旭升
- 关键词：骨髓基质干细胞细胞系
