国家自然科学基金(30600224)
- 作品数：9 被引量：17H指数：3
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- 大鼠坐骨神经损伤早期NF-κB和Bcl-2在脊髓运动神经元的诱导激活被引量：2
- 2008年
- 目的:探讨大鼠坐骨神经损伤早期NF-κB和Bcl-2在脊髓中的表达变化。方法:健康成年SD大鼠48只,随机分为正常组、假手术组和右侧坐骨神经压榨组,动物存活不同时间(6,12,24和72h)获取L4￣6脊髓段,用免疫组织化学方法检测脊髓内NF-κB和Bcl-2的表达变化。结果:(1)正常L4￣6脊髓内,NF-κB和Bcl-2免疫阳性产物主要位于前角运动神经元胞浆内,NF-κB活化少,Bcl-2表达低;(2)损伤后双侧脊髓中NF-κB免疫阳性产物则主要位于胞核内,呈活化状态,损伤侧活化起始时间(6h)早于损伤对照侧(12h),且6、12、24hNF-κB活化细胞数明显高于对照侧(P<0.05),72h双侧比较无明显差异(P>0.05)。(3)损伤后6h损伤侧脊髓中Bcl-2免疫阳性反应即增强,12h达到高峰,24h下降,72h又增高;其中6、12、72h损伤侧Bcl-2免疫阳性反应灰度值与对照侧和正常组相比差别具有统计学意义(P<0.05),而24h损伤侧与对照侧和正常组比较无统计学差异(P>0.05)。结论:坐骨神经损伤后脊髓前角细胞中NF-κB的活化,激活了其下游抗凋亡基因Bcl-2的转录,两者可能在损伤早期参与抑制细胞凋亡,促进细胞存活和神经再生。
- 王岐本谢乐斯邝满元蒙艳斌黄河曾志成
- 关键词：坐骨神经损伤BCL-2脊髓
- LRRC4通过MAPK信号通路阻滞U251细胞于G_0/G_1期
- 2007年
- 目的:探讨脑胶质瘤抑瘤基因LRRC4通过MAPK信号通路阻滞U251细胞于G0/G1的机制。方法:通过脂质体转染法将LRRC4基因转染至U251细胞,G418筛选构建稳定转染的LRRC4/U251细胞株并验证LRRC4的阳性表达;通过Western-blot检测LRRC4对MAPK信号通路的关键分子ERK,JNK及P38的表达影响;流式细胞仪、荧光素酶活性检测分析LRRC4对U251细胞周期及细胞周期素(cyclinD1)的影响。结果:LRRC4能够下调磷酸化ERK的表达,上调总蛋白JNK2和磷酸化c-Jun的表达。LRRC4下调了U251细胞中突变型P53的表达,以及cyclinD1的启动子活性和它的表达。LRRC4的重表达将U251细胞阻滞于G0/G1期。结论:LRRC4主要通过MAPK通路的关键分子JNK2上调磷酸化的c-Jun,抑制突变型的P53的表达,进而下调cyclinD1的启动子活性和cyclinD1的表达,将U251细胞阻滞于G0/G1期。
- 武明花黄琛李小玲周鸣周艳宏张祖平李桂源
- 关键词：胶质瘤LRRC4MAPK信号通路U251细胞
- LRRC4基因在脑胶质瘤细胞系中表达缺失被引量：2
- 2007年
- 目的:研究LRRC4基因在恶性脑胶质瘤细胞系中的表达情况。方法:采用RT-PCR结合Northern-blot检测LRRC4基因在U251,U87,SF126,SF767,BT325及M17等6种恶性脑胶质瘤细胞系中的表达;并应用聚合酶链反应结合DNA直接测序法检测LRRC4基因在恶性胶质瘤细胞系中的突变情况;进一步结合生物信息学分析研究LRRC4基因在U251细胞系中表达缺失的原因。结果:LRRC4基因在6种恶性胶质瘤细胞系中均表达缺失。通过对胶质瘤细胞系基因组DNA中LRRC4的ORF序列的PCR扩增和测序分析,发现SF126,SF767,M17细胞中,ORF序列第279位氨基酸的第3个密码子存在同义点突变(3/5),而U251和U87细胞基因组DNA中发生了LRRC4基因的缺失突变(2/5)。结论:LRRC4基因在恶性胶质瘤细胞中表达缺失,染色体7q32-ter的纯合性缺失是LRRC4基因在U251细胞中表达缺失的原因。
- 武明花李小玲黄琛唐运莲张祖平李桂源
- 关键词：脑胶质瘤细胞基因突变
- 胚胎干细胞联合碱性成纤维细胞生长因子移植对大鼠急性心肌梗死的影响被引量：3
- 2008年
- 目的探讨胚胎干细胞-D3株(ES-D3)联合碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)移植治疗大鼠急性心肌梗死,是否有利于心脏结构的恢复和心功能的改善。方法Wistar大鼠40只随机均分成5组,分别为正常对照组(组1)、梗死未治疗组(组2)、培养基注射组(组3)、ES-D3移植组(组4)、ES-D3+bFGF移植组(组5)。大鼠急性心肌梗死造模后1周移植体外分化并经标记的ES-D3,4周后进行心功能及组织学检测。结果ES-D3体外能分化为心肌样细胞。梗死后4周检测表明,移植细胞在大鼠体内稳定存活。心功能及组织学检测表明,组2与组3大鼠无显著差异(P>0.05)。与组2比较,组4和组5大鼠心肌梗死面积均显著减小,左心室重量减轻(P<0.01);毛细血管密度显著增高(P<0.01);左心室功能显著改善。结论急性心肌梗死后移植ES-D3可以促进大鼠心血管新生、阻止心室重构、减少瘢痕面积、显著改善心功能,联合应用bFGF可进一步获益。
- 蒙艳斌潘爱华贺莉萍钱海燕谢应桂曹秋生黄河罗学港
- 关键词：胚胎干细胞碱性成纤维细胞生长因子急性心肌梗死心功能组织化学
- LRRN3对大鼠小脑出生后发育的调控
- 2011年
- 目的:探讨神经系统富亮氨酸重复蛋白3(neuronal leucine rich repeat 3,LRRN3)蛋白对大鼠小脑出生后发育的影响及可能机制。方法:新生大鼠随机分为实验组和对照组,各组分别设3个不同时间点亚组。采用行为学实验、HE染色和免疫组织化学等方法观察抗体注射对大鼠小脑发育的影响。结果:实验组动物平衡能力较对照组差,相同时间点两组动物静态平衡时间(balance latency,BL)差异具有统计学意义(P<0.05);HE染色显示2组动物从第7天到第21天皮质逐渐增厚,结构出现动态改变;囊泡膜谷氨酸转运体1(vesicular glutamate transporter 1,VGluT1)在对照组和实验组大鼠出生后第7天、第14天和第21天的小脑中均有表达,从出生后第7天到第21天VGluT1阳性分子层随发育进行而不断增厚;对照组和实验组VGluT1阳性分子层厚度在出生后第7天差异无统计学意义(P>0.05);在出生后第14天和第21天,对照组明显厚于实验组,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:LRRN3蛋白对小脑出生后发育过程有重要作用,腹腔注射抗LRRN3抗体能降低小脑VGluT1的表达,减少分子层突触形成,降低分子层厚度,从而抑制小脑皮层的生长和功能性神经回路的形成。
- 杨静李芳邱力罗学港黄河
- 关键词：小脑发育
- IGF-1抑制妊娠合并糖尿病诱导的鼠胚胎细胞凋亡被引量：3
- 2009年
- 为研究妊娠合并糖尿病对孕妇及胎儿产生危害的机制,构建妊娠合并糖尿病的昆明小鼠动物模型,检测不同浓度葡萄糖对体外培养胚泡细胞生长的影响.观察不同浓度胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)对体外高糖环境胚泡细胞发育的影响,利用细胞核DNA双染实验观察不同浓度IGF-1作用下胚泡细胞的凋亡.采用实时定量PCR(RT-PCR)分析不同凋亡相关基因在体外培养胚泡中的表达情况.结果显示,随着葡萄糖浓度的增加,胚泡细胞总数减少,高浓度葡萄糖(≥30mmol/L)则能显著性抑制胚泡细胞的生长(P<0.01).RT-PCR检测发现妊娠合并糖尿病小鼠的胚泡igf-1表达下调,且与葡萄糖的浓度成正相关.凋亡相关基因bcl-2和bcl-xl的表达随着体外IGF-1培养浓度的增加而表达上调,而p53基因和凋亡相关基因Bax的表达则下调.细胞凋亡实验显示,随着IGF-1浓度的增加,体外培养胚泡细胞的凋亡逐渐降低,当IGF-1浓度达到100μg/L时,几乎未发现细胞凋亡.因此,高血糖能抑制胚泡细胞的生长发育,导致igf-1的表达下调,而IGF-1能抑制胚泡细胞的凋亡,有利于胚泡细胞的生长发育.
- 罗晓敏邹海燕张喆潘爱华尹芳魏苗杨静黄河
- 关键词：妊娠合并糖尿病鼠胚胎体外培养IGF-1凋亡
- LRRC4多抗制备及在构建不同级别脑胶质瘤差异表达中的应用被引量：1
- 2007年
- 目的:制备兔抗脑瘤候选抑瘤基因LRRC4(leucine-rich repeats containing 4)的多克隆抗体,应用该抗体检测LRRC4表达与脑胶质瘤病理分级的相关性。方法:应用DSGene1.1软件分析LRRC4全长蛋白,避开跨膜结构域,选取亲水性及抗原性均好的蛋白序列。构建相应的融合表达载体pGEX-4T-2/276bp,转入E.coliJM109中IPTG诱导表达。融合蛋白经纯化后免疫新西兰兔,收集并纯化抗血清,获得兔抗人LRRC4多抗,应用该抗体通过Western印迹和免疫组织化学检测LRRC4在正常人胚胎各器官组织中的表达及其在正常脑组织与各级脑胶质瘤中的表达差异。结果:制备了效价高、特异性好的兔抗人LRRC4多抗,进一步证实了LRRC4在正常人脑组织中相对特异高表达,在脑胶质瘤中表达下调(22例/37例)或缺失(15例/37例),其表达水平与脑胶质瘤的病理分级相关。结论:兔抗人LRRC4多抗效价高、特异性好,应用该抗体检测到LRRC4的表达水平与脑胶质瘤病理分级密切相关,为LRRC4后续的研究工作奠定了基础。
- 李丹武明花陈琼黄河黄琛李伟松李小玲李桂源
- 关键词：LRRC4多克隆抗体脑胶质瘤病理分级
- 高浓度葡萄糖对昆明小鼠早期胚胎发育的影响被引量：7
- 2008年
- 建立昆明小鼠受孕模型,分离并体外培养胚胎细胞.检测了各培养浓度下的细胞增殖、分化与凋亡.胚胎细胞在0.2mmol/L和5.56mmol/L葡萄糖浓度的KSOM培养基中能正常发育和孵化;而在浓度为15.56mmol/L和25.56mmol/L葡萄糖培养基中胚胎发育和孵化均受到损害(P<0.005),且总细胞数和内细胞团细胞数也明显减少(P<0.01),但其细胞凋亡率与0.2mmol/L和5.56mmol/L葡萄糖浓度下胚胎细胞凋亡率无显著性差异(P>0.05).随着葡萄糖浓度的增高,胚泡总的表面积无明显变化,但胚胎细胞密度呈增加趋势.高血糖对早期胚胎的发育具有毒性作用,提示高糖可能导致妊娠合并糖尿病患者的流产和胎儿畸形率升高.
- 罗晓敏邹海燕尹芳陈宴张五湖袁衡张晓东祝继明黄河
- 关键词：高血糖鼠胚胎体外培养
- 坐骨神经压榨后早期iNOS在大鼠脊髓中的表达变化
- 2007年
- 目的:研究坐骨神经压榨损伤后早期iNOS在大鼠脊髓内的表达变化情况。方法:健康成年SD大鼠随机分为正常组、假手术组和坐骨神经压榨组,存活不同时间(6,12,24和72h)后获取L4～6脊髓节段,用免疫组织化学方法结合图像分析技术检测脊髓内iNOS的表达。结果:正常组及假手术组脊髓内iNOS呈低表达,两者比较差异无统计学意义(P>0.05);坐骨神经压榨后损伤侧前、后角iNOS免疫阳性染色随损伤时间逐渐增加,各时间点损伤侧前、后角分别与对侧和正常组相比有统计学意义(P<0.05)。结论:坐骨神经压榨后iNOS在脊髓内的表达上调,可能与神经损伤后的再生过程及伤后神经性痛有关。
- 王岐本谢乐斯谢应桂黄庆红郑林丰黄河曾志成
- 关键词：坐骨神经损伤INOS脊髓
