浙江省科技厅项目(2010C12005-2)
- 作品数：5 被引量：27H指数：4
- 相关作者：鲁兴萌李光才蔡顺风邱海洪何祥康更多>>
- 相关机构：浙江大学浙江省农业厅浙江中医药大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：浙江省科技厅项目国家现代农业产业技术体系建设项目国家质检总局科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 蚕病检测中免疫学技术的研究与应用被引量：5
- 2011年
- 本文介绍了有关应用免疫学技术蚕病进行检测的研究。根据已有研究和养蚕业的特点,认为家蚕微粒子病的检测是一项非常值得研究的技术。家蚕微粒子病检测的技术根本是解决基于实际应用条件下的灵敏度和特异性问题。
- 鲁兴萌蔡顺风邱海洪孙文静何永强
- 关键词：蚕病免疫学技术灵敏度特异性
- 破碎法提取家蚕微孢子虫孢子核酸的PCR检测灵敏度试验被引量：3
- 2011年
- 蚕微粒子病检测技术是该病防治中的一项重要技术,本文在通过破碎法提高模板核酸获取量的基础上,对纯化家蚕微粒子虫孢子的PCR检测灵敏度进行了测试。提取核酸-模板稀释测试12对引物的灵敏度中有4对引物达到0.05粒(102粒/mL)、4对引物5粒(104粒/mL)、1对引物50粒(105粒/mL)、2对引物500粒(106粒/mL)和1对引物5000粒(107粒/mL)。两对灵敏度较高的引物(NbZS004F/NbZS004R和NbZS007F/NbZS007R)灵敏度临界值(0.05粒和0.005粒)的PCR重复检测率均为90%。纯化家蚕微粒子虫孢子稀释后提取核酸再进行PCR检测试验中,NbZS004F/NbZS004R和NbZS007F/NbZS007R的灵敏度分别为:5粒(104粒/mL)和0.5粒(103粒/mL)。
- 李光才蔡顺风何祥康何欣怡马焕艳孟祥坤邱海洪何永强鲁兴萌
- 关键词：家蚕微粒子病孢子聚合酶链式反应
- 单管多重荧光定量RT-PCR方法鉴别新甲型H1N1及甲型和乙型流行性感冒病毒被引量：6
- 2012年
- 目的建立和评价鉴别新甲型H1N1、甲型和乙型流行性感冒（简称流感）病毒的单管多重荧光定量RT-PCR方法。方法2010年10月至2011年4月，采集流感样患者咽拭子样本213份。分别选用新甲型H1N1流感病毒HA基因、甲型流感病毒M基因和乙型流感病毒NP基因中的152、128和107bp片段作为荧光定量PCR检测的靶片段，设计特异性引物和不同发光基团标记的TaqMan探针，采用体外转录构建标准品，绘制标准曲线，评价检测方法的重复性、特异度和灵敏度，并对213份流感样患者咽拭子样本进行检测及测序验证。结果3种病毒对应的标准曲线分别为：新甲型H1N1流感病毒：Y=-3．461gX＋46．985；甲型流感病毒：Y=-3．491gX＋37．709；乙型流感病毒：Y=-3．51lgX＋38．889，Y为Ct值，lgX为病毒RNA拷贝数的对数值。质粒标准曲线的方差系数为0．998，灵敏度达到每个反应10^2拷贝／μl，特异度强。213份样本中检出新甲型H1N1流感病毒核酸39份（18．3％），甲型流感病毒核酸阳性63份（29．6％），乙型流感病毒核酸阳性23份（10．8％），阳性样品经过测序验证。结论为鉴别新甲型H1N1、甲型和乙型流感病毒建立的单管多重荧光定量RT-PCR方法快速、特异且灵敏。
- 张弘何永强张严峻王真李榛
- 关键词：流感病毒A型流感病毒B型
- 一种快速高效制备家蚕微孢子虫基因组DNA和总蛋白的方法被引量：13
- 2011年
- 家蚕微孢子虫孢子壁坚厚不易破碎,并对许多化学物质有很强的抵抗性,使用常规的核酸和蛋白抽提方法效果不够理想。研究建立玻璃珠破碎法快速制备家蚕微孢子虫基因组DNA和总蛋白的方法,采用琼脂糖凝胶电泳和SDS-PAGE分析所得DNA的完整性和所得总蛋白的差异性,并对提取蛋白进行双向电泳试验。结果表明:使用玻璃珠破碎法对微孢子虫孢子壁的破碎率可达到90%以上,基因组DNA得率约为7.65 fg/粒,总蛋白得率约为788.3 fg/粒,均显著高于常用的发芽法和液氮冻融研磨法的得率。双向电泳结果显示玻璃珠破碎法能有效提取家蚕微孢子虫总蛋白,经考马斯亮蓝染色可检测到约350个蛋白点,蛋白信息丰富,可进一步用于质谱分析。
- 蔡顺风何欣怡何祥康邱海洪李光才何永强鲁兴萌
- 关键词：家蚕微孢子虫核酸蛋白双向电泳
- 家蚕微粒子病的PCR检测技术研究与应用被引量：7
- 2011年
- 家蚕微粒子病检测技术是该病防治中的一项关键性技术,随着PCR技术的发展,使该项技术在家蚕微粒子病的检测中应用成为可能。综述了有关应用PCR技术检测家蚕微粒子病的研究,从模板核酸制备和引物设计等方面分析提高灵敏度和解决特异性问题的途径。提出蚕种生产单位承担母蛾的微粒子病检验,省级检验检疫机构承担蚕种(成品卵)的家蚕微粒子病的监督检验检疫,是PCR技术在蚕种生产质量检验中实用化的重要前提。
- 鲁兴萌李光才孟祥坤马焕艳林宝义楼霞何永强
- 关键词：家蚕微粒子病PCR灵敏度特异性
