国家自然科学基金(30872359)
- 作品数：6 被引量：32H指数：4
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- 相关机构：第四军医大学西北工业大学第四军医大学唐都医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 自噬在结核分枝杆菌感染中的作用及相关基因的表达被引量：8
- 2009年
- 目的:探讨自噬在结核分枝杆菌(MTB)感染中的作用及相关基因的表达。方法:透射电镜观察在雷帕霉素诱导下自噬体的形成,通过克隆形成单位(CFU)检测自噬形成后对胞内感染的MTBH37Rv菌株的清除作用,以实时定量PCR方法检测自噬相关基因atg5、atg7、atg8、atg12mRNA表达水平。结果:在雷帕霉素诱导下,RAW264.7细胞可形成自噬体,自噬体产生后对胞内感染的H37Rv菌株具有一定的清除作用。在MTB感染过程中参与自噬形成的atg5、atg8、atg12mRNA表达量上调,而atg7表达量无变化。结论:自噬参与抗MTB免疫应答过程,而atg5、atg8、atg12是MTB感染形成自噬体的重要调控分子。
- 张海师长宏黄庆生缪珊赵勇张彩勤
- 关键词：自噬结核分枝杆菌
- 小鼠结核分枝杆菌感染模型用于评价重组HBHA疫苗免疫效果的实验研究
- 2010年
- 目的通过复制小鼠结核病模型评价重组HBHA疫苗的免疫效果。方法将重组肝素结合血凝素(HBHA)疫苗接种BALB/c小鼠,观察其诱导的细胞免疫应答水平,并以MTB H37Rv毒株攻击免疫小鼠,研究重组疫苗诱导的保护力。结果重组HBHA免疫BALB/c小鼠后可诱发细胞毒作用,将体内MTB裂解。重组疫苗不仅能刺激CD4+T,CD8+T增殖、活化,还可诱导脾细胞分泌IFN-γ、IL-2等细胞因子。H37Rv毒株攻击后,被免疫小鼠的组织病理学症状减轻。结论本研究通过检测小鼠体内细胞免疫应答和肺脏组织病理学改变等指标,客观的反映了重组疫苗免疫小鼠结核模型的保护效果。
- 赵勇师长宏伍静毛峰峰张彩勤白冰张海
- 关键词：结核分枝杆菌动物模型免疫应答
- 自噬相关基因LC3-I的基因表达及单克隆抗体的制备
- 2013年
- 目的：通过克隆LC3．I基因，体外原核表达LC3-I蛋白后制备抗LC3单克隆抗体，作为自噬研究中的标记分子检测自噬的发生和发展过程。方法：RT．PCR方法从RAW264．7细胞基因组中克隆LC3基因，亚克隆至pQE80L原核表达载体后转化E．cobDH5a进行诱导表达，SDS—PAGE电泳及Westemblot鉴定表达蛋白。蛋白纯化后免疫BALB／c小鼠。采用淋巴细胞杂交瘤技术，制备分泌抗LC3．I杂交瘤细胞株，体内诱生腹水制备mAb，间接ELISA法测定其效价，辛酸一硫酸铵沉淀法及亲和层析法纯化mAb。结果：成功克隆了LC3一I基因，并对其在E．coilDH5a进行诱导表达，SDS-PAGE分析表明在相对分子量Mr为20×10^3有特异条带，Westernblot验证表达产物具有一定的生物学活性。建立了3株稳定分泌特异性抗LC3-ImAb的杂交瘤细胞株，诱导产生的腹水获得的抗体效价在10^5-10^7之间，结论：在E．coli中对LC3-I进行表达，并制备特异性较强抗LC3-I蛋白的单克隆抗体。为自噬研究提供了良好的标记分子，可对自噬形成和发展进行有效的检测。
- 赵勇李羽伍静张彩勤白冰毛峰峰师长宏张海
- 关键词：原核表达抗体单克隆
- 自噬相关基因Atg5的原核表达及多克隆抗体制备被引量：5
- 2009年
- 目的:克隆自噬相关基因Atg5,在大肠杆菌中重组表达后制备抗Atg5多克隆抗体。方法:用RT-PCR方法从RAW264.7细胞基因组中克隆Atg5基因,连接至pQE80L原核表达载体后转化大肠杆菌DH5α进行诱导表达,SDS-PAGE及Western blot鉴定表达蛋白;目的蛋白纯化后,以100μg/kg纯化的蛋白免疫新西兰兔,制备抗Atg5多克隆抗体;提取RAW264.7细胞总蛋白,以制备的抗Atg5多抗进行Western blot反应,检测多抗的生物学活性。结果:克隆了Atg5基因,在大肠杆菌中表达了重组Atg5,SDS-PAGE分析显示表达产物相对分子质量与预期值一致,Western blot结果证明该产物具有较高的生物学活性,纯化蛋白免疫动物后制备了抗Atg5多克隆抗体。结论:在大肠杆菌中表达了重组Atg5,制备了抗Atg5多克隆抗体,为自噬的检测和研究提供了工具。
- 赵勇栗文彬师长宏张彩勤缪珊白冰张海
- 关键词：原核表达自噬多克隆抗体
- 结核分枝杆菌ESAT6-CFP10融合蛋白对小鼠巨噬细胞自噬功能的影响被引量：5
- 2010年
- 目的研究结核分枝杆菌(MTB)ESAT6-CFP10融合蛋白对小鼠巨噬细胞自噬功能的影响。方法H37Rv菌株感染小鼠巨噬细胞后加入纯化的重组ESAT6-CFP10融合蛋白,通过透射电镜检测自噬体的形成。提取细胞总RNA和蛋白,以实时定量RT-PCR及Western blot方法检测自噬相关基因(atg)分子水平和蛋白表达水平。结果ESAT6-CFP10融合蛋白可抑制小鼠巨噬细胞自噬体的形成,并导致atg分子表达水平下降,其中atg8表达量下降最为明显。结论MTB ESAT6-CFP10融合蛋白通过调控atg分子表达水平影响小鼠巨噬细胞自噬功能。
- 赵勇师长宏张彩勤毛峰峰白冰伍静张海
- 关键词：结核分枝杆菌自噬
- 自噬的形态特征及分子调控被引量：15
- 2010年
- 自噬过程是生物进化过程中保留下来的一种细胞蛋白和细胞器的循环利用机制,一般认为自噬过程对于细胞在恶劣环境下生存具有重要意义。而细胞的发育和凋亡与自噬有着密切的关系。本文通过自噬体的形成方式综述了三种自噬形式的形态特征以及自噬的分子调控对细胞的影响。
- 伍静赵勇师长宏张海
- 关键词：自噬细胞生存细胞凋亡
