国家自然科学基金(30971363)
- 作品数：10 被引量：26H指数：3
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- 激活蛋白激酶A信号减轻阿霉素肾病小鼠白蛋白尿并促进肾小球壁层上皮细胞向足细胞分化
- 背景：肾小球血管上皮细胞（足细胞）与肾小球基底膜（GBM）、毛细血管内皮细胞一起构成肾小球滤过屏障。各种因素导致的足细胞损伤和丢失都可能导致大量蛋白尿,也与肾脏病进展相关。成熟的足细胞是一种终末分化的上皮细胞，缺乏分裂增...
- 向芃
- 关键词：肾小球病细胞调控蛋白激酶A
- 文献传递
- 3,5-二羟基苯甘氨酸对体外氨基核苷嘌呤霉素诱导的足细胞凋亡的影响被引量：1
- 2013年
- 目的研究代谢型谷氨酸受体1(mGluR1)和mGluR5的激动剂3,5-二羟基苯甘氨酸(DHPG)在体外对由氨基核苷嘌呤霉素(PAN)诱导的足细胞凋亡的影响,探讨可能的作用途径。方法体外培养小鼠条件永生型足细胞株5P12,根据添加干预药物的不同进行分组。采用CCK-8法、Western blotting、EIA法、JC-1单标法流式细胞术、免疫荧光法和TUNEL染色激光共聚焦显微镜观察等方法,对足细胞的细胞活力、mGluR1/5和活化的胱冬肽酶-3(cleaved caspase-3)的表达、环磷酸腺苷(cAMP)水平、线粒体膜电位变化、磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(CREB)及细胞凋亡等指标进行检测。结果 DHPG诱导足细胞使cAMP生成和CREB表达增加,DHPG可防止PAN诱导的足细胞活力降低、cleaved caspase-3表达升高、线粒体膜电位下降以及晚期凋亡,而这些作用可被mGluR1和mGluR5的选择性拮抗剂(AIDA)、腺苷酸环化酶抑制剂(SQ22536)及mGluR1和mGluR5的RNA干扰加以抑制。结论 mGluR1和mGluR5的选择性激动剂DHPG可防止体外PAN诱导的足细胞凋亡,其作用可能与mGluR/cAMP信号途径有关。
- 李肖瑛顾乐怡倪兆慧梁馨月严玉澄钱家麒
- 关键词：代谢型谷氨酸受体1代谢型谷氨酸受体5足细胞环磷酸腺苷
- 白藜芦醇通过Sirtuin1激活足细胞Notch1信号被引量：1
- 2015年
- 目的探索白藜芦醇是否影响足细胞中的Notch1信号通路及其可能的机制。方法分别使用RNA干扰（RNAi）技术和盐酸多西环素（doxycycline，Dox）诱导野生型（WT）和可诱导的Sirtuin1（SIRT1）短发夹RNA（shRNA）转基因（CAGGS）足细胞SIRT1表达下降，重组小鼠Notch信号的Delta配体4（Delta—like ligand4，DLL4）诱导激活Notch1通路。实时荧光定量PCR法检测SIRT1、Notch1通路关键γ分泌酶mRNA及Notch1靶基因Hesl、Hey2的表达。Western印迹法检测足细胞内Notch1胞内段结构域（intracellular domain of Notch1，ICD1）、SIRT1、解聚素金属蛋白酶（ADAM）10以及γ分泌酶复合物Presenilin1和Nicastrin的表达。结果白藜芦醇剂量依赖地诱导野生型小鼠足细胞Notch1信号胞内段ICDl表达以及下游产物Hesl和Hey2 mRNA表达增高。白藜芦醇可诱导Notch1蛋白水解酶1分泌酶组分Nicastrin的mRNA和蛋白表达上升以及ADAM10蛋白的表达下降（P〈0．05），而这些变化在使用SIRTIRNAi后均被减弱（P〈0．05）。重组小鼠DLL4可以增加Notch1通路靶基因Hes1和Hey2的mRNA水平，同时增加细胞核内ICD1的表达，盐酸多西环素孵育CAGGS足细胞显著降低SIRT1mRNA水平（P〈0．05），48h后SIRT1蛋白表达明显下降（P〈0．05），并且显著减弱DLIA的作用（P〈0．05）。结论白藜芦醇可以通过高表达分泌酶Nicastrin诱导足细胞中Notch1信号活化，SIRT1介导了白藜芦醇和DLL4诱导Notch1信号活化的作用。
- 谢可炜魏凯顾明颖向芃顾乐怡
- 关键词：足细胞受体NOTCHLSIRTUINΓ-分泌酶
- 足细胞骨架相关蛋白的调节及其在细胞生物学中的作用被引量：8
- 2011年
- 肾小球血管上皮细胞,也称足细胞,是一种特殊终末分化细胞。足细胞可分为：细胞体,初级突起,足突。微管和中间丝构成足细胞体和初级突起的支架。微丝则是足突的细胞骨架。微丝在同一个足细胞的相邻足突间形成一个高的拱状袢,在袢的弯曲处,微丝连接于初级突起的中间丝和微管上[1]。
- 陶花顾乐怡
- 关键词：细胞生物学足细胞上皮细胞分化细胞中间丝肾小球
- 环磷酸腺苷信号在足细胞生物学中的作用被引量：1
- 2011年
- 肾小球血管上皮细胞（足细胞）是高度分化、具有特异性分枝结构（足突）并且增生有限的特殊细胞,大量的足突是足细胞的一个显著特点。足细胞位于肾小球基底膜的尿腔侧,细胞相互交错的足突以及足突间的裂隙膜结构防止血液中大分子物质渗漏入原尿,是最关键的肾小球分子滤过屏障。各种致病因素或者遗传因素引起足细胞受损,裂隙膜分子减少,足细胞死亡或凋亡,最终都导致大量蛋白尿。足细胞数量减少也被认为是局灶节段肾小球硬化的最关键致病因素之一,而局灶节段肾小球硬化是各种肾小球疾病进展到肾小球硬化的共同途径。因此,足细胞细胞生物学的改变和肾小球疾病的发生发展密切相关。
- 李肖瑛顾乐怡
- 关键词：环磷酸腺苷局灶节段肾小球硬化肾小球基底膜大量蛋白尿大分子物质信号
- 代谢型谷氨酸受体1和5激动剂改善阿霉素诱导的小鼠肾损伤被引量：2
- 2012年
- 目的研究选择性代谢型谷氨酸受体1和5(mGluR1/5)激动剂3,5-二羟基苯甘氨酸(DHPG)对阿霉素(ADR)肾病小鼠模型的作用。方法 18只6周龄BALB/c小鼠随机分为对照组、ADR组(经尾静脉注射阿霉素建立阿霉素肾病小鼠模型)和ADR+DHPG组(建模前预先注射DHPG),每组6只。应用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测小鼠24 h尿白蛋白水平,透射电子显微镜观察足细胞足突形态和宽度;免疫荧光染色激光共聚焦显微镜观察足细胞标志蛋白nephrin和损伤标志蛋白desmin的表达,免疫组织化学法检测肾小球WT-1表达;TUNEL染色检测足细胞凋亡情况。结果在对照组、ADR组和ADR+DHPG组24 h尿白蛋白分别为(1.67±0.22)、(22.55±2.34)和(8.23±2.74)mg,组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。与ADR组比较,ADR+DHPG组小鼠足细胞的足突宽度缩短,desmin表达减少,而nephrin表达增加。肾小球中WT-1阳性细胞数与凋亡细胞数呈显著负相关(R2=0.8 482,P<0.05);ADR+DHPG组足细胞凋亡数显著少于ADR组(P<0.01)。结论选择性mGluR1/5激动剂DHPG可抑制ADR诱导的足细胞足突融合、nephrin表达减少和细胞凋亡,减少阿霉素肾病小鼠的白蛋白尿。
- 陶花顾乐怡王丽华严玉澄倪兆慧钱家麒
- 关键词：白蛋白尿足细胞
- 琥珀酸堆积导致活性氧簇生成参与缺血再灌注肾损伤
- 背景:缺血再灌注（I/R）是急性肾损伤的主要病因之一,它引起一系列病理生理事件。活性氧簇（ROS）在I/R肾损伤中发挥重要作用,但其来源并不清楚。组织缺血诱导细胞内琥珀酸堆积参与了再灌注期间ROS的生成。因此我们假设,琥...
- 姜金星
- 关键词：琥珀酸ROS内质网应激琥珀酸脱氢酶
- 文献传递
- 特发性膜性肾病动物模型及发病原因的研究进展被引量：6
- 2013年
- 膜性肾病（membranous nephropathy,MN）是一个病理学诊断,其病理特征为肾小球上皮细胞下免疫复合物沉积伴基底膜弥漫增厚,不伴有肾小球固有细胞增殖及局部炎症反应为特征的一组疾病。根据其病因分为特发性、继发性及家族性三大类。原因未明的特发性膜性肾病约占三分之二,其他大部分则是继发于各种病因的继发性膜性肾病。
- 顾明颖顾乐怡
- 关键词：特发性膜性肾病发病原因动物模型肾小球上皮细胞免疫复合物沉积局部炎症反应
- 激活环磷酸腺苷／蛋白激酶信号对药物诱导足细胞损伤的影响被引量：1
- 2013年
- 目的研究激活环磷酸腺苷（cAMP）信号对药物诱导的足细胞损伤的影响。方法8周龄雄性BalB／C小鼠被随机分为对照组、阿霉素（ADR）组和腺苷酸环化酶激动剂（Forskolin）＋ADR组，采用ADR尾静脉注射的方法制备肾病模型，Forskolin＋ADR组小鼠给予腹腔内注射Forskolin。用免疫荧光激光共聚焦法检测小鼠肾组织环磷酸腺苷反应元件结合蛋白（CREB）磷酸化水平，透射电子显微镜观察足细胞形态改变，免疫组织化学法检测肾小球WT一1的表达。分别用嘌呤霉素氨基核苷（PAN），环磷酸腺苷直接激活的交换蛋白（Epac）信号激动剂8一pCPT．2．O—Me．cAMP（2Me），蛋白激酶A（PKA）信号激动剂pCPT．cAMP（pCPT）及其阻断剂H89处理条件永生化的足细胞，Western印迹法检测足细胞Epac、caspase3及cleavedcaspase3的表达水平，蛋白激酶检测系统检测足细胞PKA活性，CCK-8试剂盒法检测足细胞毒性，TUNEL法检测足细胞凋亡，JC-1染色法检测线粒体膜电位。结果（1）与ADR组比较，Forskolin＋ADR组小鼠尿白蛋白排泄量减少（P〈0．05），。肾小球wT-1阳性细胞数增加（P〈0．05）。（2）PAN刺激可致足细胞数量减少，作用呈时间依赖性（均P〈0．05）；pCPT可减轻PAN诱导的足细胞数量减少（P〈0．05）；PKA信号抑制剂H89有阻断pCPT的作用，并呈剂量依赖性（均P〈0．05）。（3）对照组，PAN组和pCPT＋PAN组绿色荧光细胞数所占比率分别是（12．67±2．15）％，（31．35±4．60）％和（16．96＋2．51）％，P〈0．05。H89预处理有阻断pCPT的作用（P〈0．05）。（4）PAN刺激足细胞凋亡细胞数和cleavedcaspase3表达水平较对照组显著升高（均P〈0．05），pCPT预处理后足细胞凋亡细胞数和cleavedcaspase3表达水平较PAN组显著下降（均P〈0．05）。结论激活cAMP信号可减轻ADR肾病小鼠足细胞损伤及PAN诱导的足细胞凋亡，cAMP／PKA�
- 魏凯李肖瑛倪兆慧陶花顾乐怡
- 关键词：足细胞凋亡环磷酸腺苷蛋白激酶A
- 激活足细胞环腺苷酸信号调节细胞磷酸化ERM和CLIC5的表达被引量：1
- 2014年
- 目的研究足细胞内环腺苷酸(c AMP)信号对足细胞标志蛋白Podocalyxin、细胞内氯离子通道蛋白5(CLIC5)及相关的埃兹蛋白-根蛋白-膜突蛋白(ERM)表达的影响。方法构建阿霉素(ADR)肾病小鼠模型,部分小鼠使用腺苷酸环化酶激活剂Forskolin治疗(ADR组和ADR+Forskolin组)。考马斯亮蓝染色法测定尿液中蛋白质含量;电子显微镜观察足突宽度;免疫荧光染色和Western blotting检测足细胞中磷酸化ERM(P-ERM)、CLIC5和Podocalyxin的表达。结果与ADR组比较,ADR+Forskolin组小鼠尿白蛋白含量明显减少,足突增宽显著改善(P<0.05)。Western blotting和免疫荧光染色结果显示:与ADR组比较,ADR+Forskolin组小鼠足细胞内P-ERM、Podocalyxin和CLIC5蛋白表达及共定位均显著增加。Western blotting检测结果显示:体外以嘌呤霉素氨基核苷(PAN)孵育足细胞72 h,可使P-ERM和CLIC5的表达显著减少(P<0.01);Epac信号激动剂2Me-c AMP预处理可防止PAN诱导的足细胞P-ERM低表达,而PKA信号激动剂p CPT-c AMP预处理可防止PAN诱导的CLIC5表达减少。结论 Forskolin可减轻ADR肾炎小鼠的白蛋白尿,改善足突融合,缓解Podocalyxin/CLIC5/ERM蛋白复合体低表达。c AMP分别通过PKA和Epac信号通路防止PAN诱导的CLIC5和P-ERM表达降低。
- 陈晓欢阿依加肯·卡司木马力陶花李肖瑛魏凯顾乐怡
- 关键词：蛋白尿足细胞环腺苷酸细胞骨架
