国家自然科学基金(30772040)
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
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- 相关机构：华中科技大学江汉大学更多>>
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- 病毒肽/HLA-A2复合物与抗转铁蛋白受体单链抗体融合蛋白的构建、表达及鉴定
- 2010年
- 目的制备抗转铁蛋白受体单链抗体与病毒肽/HLA-A2的融合蛋白。方法利用重组DNA技术将HLA-A2基因和转铁蛋白受体单链抗体(TfRscFv)基因,用柔性的linker(Gly-4-Ser)3连接并克隆到原核表达载体pET28a(+)上,转化大肠埃希菌BL21(λDE3)菌株,获取重组子,经IPTG诱导表达目的蛋白。将纯化的目的蛋白和β2微球蛋白(β2m)与HLA-A2限制性的乙肝病毒(HBV)核心抗原肽HBcAg18-27在体外进行稀释复性,形成HBcAg18-27/HLA-A2/TfRscFv融合蛋白。利用ELISA和微球结合试验检测融合蛋白的空间构象。结果构建的融合蛋白基因具有正确的序列,经IPTG诱导后以包涵体形式表达的蛋白分子量正确,体外稀释复性后的融合蛋白具有正确的HLA-A2空间构象。结论成功构建了HBcAg18-27/HLA-A2/TfRscFv融合蛋白,为进一步将该融合蛋白通过其单链抗体加载到肿瘤细胞表面从而诱导乙肝病毒肽特异性细胞毒性T淋巴细胞杀伤肿瘤细胞奠定了物质基础。
- 李佳楠孙伟吴雄
- 关键词：HLA-A2转铁蛋白受体单链抗体
- 可溶性HLA-G-肽复合物的体外制备与纯化被引量：1
- 2008年
- 目的探讨可溶性HLA-G-肽复合物的体外制备与纯化。方法原核高效表达的HLA-G重链及轻链(β2m)在抗原肽(人工合成九肽NH2-KGPPAALTL-COOH)的存在下,通过稀释复性折叠成HLA-G-肽复合物,采用凝胶过滤层析对折叠复合物进行纯化。利用特异性抗体(mAb W6/32和兔抗人β2m抗体)进行ELISA和Western blot对纯化产物进行鉴定。结果折叠复合物中,主要含有HLA-G重链聚合体、HLA-G-肽复合物及β2m3种成分,纯化后主要为HLA-G-肽复合物。结论成功地获得纯度较高的可溶性HLA-G-肽复合物单体,为进一步研究HLA-G的生物学功能奠定了基础。
- 钟茂华翁秀芳梁智辉夏芳珍李佳楠陈雪玲吴雄文
- 关键词：稀释复性凝胶过滤层析
- 共价连接β2m的HLA-A2/IgG1二聚体的构建、表达与纯化
- 2009年
- 目的HLA-A2/IgG1二聚体经蛋白A(SPA)亲合层析柱浓缩纯化时容易发生β2 m解离,为了解决这个问题,研究构建与表达β2 m-HLA-A2/IgG1融合蛋白。方法利用基因重组技术构建β2 m-HLA-A2/IgG1融合基因真核表达载体pcDNA3.1(+)-[β2 m-HLA-A2/IgG1],将其转染721.221细胞系,筛选高表达β2 m-HLA-A2/IgG1融合蛋白的细胞株;收集细胞培养上清,SPA亲合层析柱浓缩纯化,检测该蛋白的纯化效率。结果β2 m-HLA-A2/IgG1融合基因转染721.221细胞后可表达正确构象的β2 m-HLA-A2/IgG1二聚体,Western blot显示β2 m-HLA-A2/IgG1融合蛋白的分子量与预期大小一致;经SPA亲合层析柱纯化后,β2 m-HLA-A2/IgG1融合蛋白较HLA-A2/IgG1融合蛋白的纯化效率约高5倍。结论共价连接β2 m的HLA-A2二聚体有助于HLA-A2二聚体在低pH值的环境下保持构象完整。
- 郝娟段红霞李庆孙伟钟茂华翁秀芳吴雄文
- 关键词：真核表达
