山西省青年科技研究基金(2010021036-2)
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
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- 相关机构：山西医科大学第二医院山西医科大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 烟曲霉Bem46基因敲除株构建及其功能初步研究被引量：3
- 2017年
- 目的构建烟曲霉Bem46基因敲除株,初步明确Bem46基因在烟曲霉生长出芽和各种压力传导中的作用,以及对细胞壁形成的影响。方法采用生物信息学方法查找烟曲霉中Bem46基因,设计引物,并以pyrG作为筛选标记构建烟曲霉Bem46基因敲除株(ΔBem46)。观察含不同压力物质培养基上对照菌株和ΔBem46径向生长速度,观察两菌株发芽状况以及在含有细胞壁抑制剂培养基上的生长状况。结果通过序列比对在烟曲霉基因组中找到了Bem46基因,其编号为Afu7g04660,由1 116bp碱基组成,编码311个氨基酸。使用原生质体法得到烟曲霉ΔBem46并经PCR和Southernblot确认。经观察在含有山梨醇作为渗透压力来源的培养基上ΔBem46生长明显较对照菌株快。显微镜下观察到在GMM液体培养基中,ΔBem46发芽速度慢于对照株。结论烟曲霉Bem46基因涉及由山梨醇引起的渗透压压力传导,并且该基因对促进孢子发芽可能有作用。
- 李雯李佳娟冯文莉马彦
- 关键词：烟曲霉发芽率信号传导
- 含PxIxIT模序烟曲霉KpsF基因作用初探被引量：1
- 2017年
- 目的构建烟曲霉KpsF基因缺陷株,初步了解KpsF基因在烟曲霉生长及与钙调磷酸酶相互作用关系。方法PCR扩增烟曲霉KpsF基因及其上、下游各约1.0kb的DNA片段,以pyrG为筛选标记,原生质体法构建KpsF基因缺陷株ΔKpsF;观察ΔKpsF一般生长状况;实时荧光定量PCR方法检测Ku80(对照组)和ΔKpsF(实验组)在含有不同浓度CaCl_2的液体GMM培养基中钙调磷酸酶催化亚基(CnaA)相对表达水平。结果烟曲霉ΔKpsF和Ku80径向生长差异无统计学意义(P>0.05);表型未见明显差别;ΔKpsF在10mmol/L CaCl_2GMM液体培养基的CnaA相对表达量显著高于对照组Ku80(P<0.01),而100mmol/L CaCl_2的CnaA相对表达量却没有明显变化(P>0.05)。结论 KpsF基因缺陷对烟曲霉的径向和表型生长没有明显影响,对CnaA表达量的影响与Ca^(2+)浓度有关。在低浓度Ca^(2+)条件下,KpsF可能参与对钙调磷酸酶的负反馈调节作用,而在高浓度的Ca^(2+)条件下,这种负反馈调节作用受到抑制。
- 李佳娟李雯马彦
- 关键词：烟曲霉钙调磷酸酶
- 两步融合PCR法构建烟曲霉ssk1基因敲除株被引量：2
- 2014年
- 目的通过两步融合PCR法构建烟曲霉ssk1基因敲除株。方法通过在ssk1基因上下游的侧翼序列设计引物时引入15 bp的融合片段的互补的同源区,使用两步融合PCR的方法将长度约为4.3 kb的目的片段融合扩增,并直接使用PCR产物通过传统的原生质体法进行烟曲霉的转化,得到转化子运用PCR和Southern blot进行相应的验证。结果通过融合PCR法较快的得到大约4.3 kb的融合的目的基因片段,运用原生质体法成功进行了烟曲霉的转化,得到5个转化子。经过PCR和Southern blot经验证有4株是正确的转化子。结论在合适的引物设计及适当的融合PCR反应条件下,两步融合PCR法是一种简单高效的构建烟曲霉基因敲除株的方法,值得推广。
- 马彦岑雯刘昕冯文莉
- 关键词：烟曲霉融合PCR基因敲除
