吉林省科技发展计划基金(20106044)
- 作品数：5 被引量：6H指数：2
- 相关作者：李建华宫鹏涛张西臣杨举左绍志更多>>
- 相关机构：吉林大学军事医学科学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 旋毛虫与A549肺癌相关抗原筛选及其抗体抗肿瘤效应
- 本试验首先应用ELISA和Western blotting方法,鉴定旋毛虫和A549肺癌细胞间是否存在相关抗原,后通过对旋毛虫cDNA表达文库的免疫筛选获取旋毛虫和A549肺癌细胞相关抗原基因。旋毛虫的相关抗原基因经原核...
- 高江明宫鹏涛李建华张国才李赫张西臣
- 关键词：旋毛虫A549肺癌原核表达抗肿瘤效应
- 文献传递
- 旋毛虫7TR蛋白人源单链抗体抗A549肿瘤作用研究
- 本实验首先对旋毛虫与肺癌A549细胞相关抗原旋毛虫7TR蛋白进行原核表达,重组蛋白经纯化、复性后,进行了Tomlinson(I+J)人源单链抗体库的的筛选,并用ELISA验证筛选所得阳性抗体分泌菌株。对阳性抗体分泌株所分...
- 王金鹏宫鹏涛李建华杨举杨正涛张西臣
- 关键词：旋毛虫肿瘤相关抗原A549单链抗体
- 文献传递
- 抗旋毛虫硒蛋白T单克隆抗体的制备及其对裸鼠肝癌H7402细胞的抑制效果
- 2020年
- 目的制备抗旋毛虫与肝癌H7402细胞相关抗原硒蛋白T单克隆抗体,并观察其对裸鼠肝癌H7402细胞的抑制效果。方法用纯化的旋毛虫硒蛋白T重组蛋白常规免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤细胞技术制备其单克隆抗体;将肝癌H7402细胞经大腿内侧皮下接种BALB/c裸鼠,1×10^7个细胞/只,采用制备的高效价单抗,按20、50及100μg/只剂量接种裸鼠,隔日1次,共5次,评价单抗对裸鼠肝癌H7402细胞的抑制效果。结果成功获得了3株稳定分泌抗旋毛虫硒蛋白T的单抗的细胞株:4D4、4H2及4F1,效价均达1∶204800以上,其中4H2抗体效价最高;20、50及100μg/只剂量组的抑瘤率分别为51.6%、56.2%和80.3%。结论制备的抗旋毛虫与肝癌H7402细胞相关抗原硒蛋白T单克隆抗体对裸鼠体内肝癌H7402细胞具有明显的抑制效果。
- 张桐嘉逄大欣张楠宫鹏涛李建华杨举张西臣
- 关键词：旋毛虫单克隆抗体肝癌
- 旋毛虫与肝癌细胞相关基因CK-1的原核表达及鉴定被引量：4
- 2014年
- 目的原核表达旋毛虫与肝癌细胞相关基因CK-1,并进行鉴定。方法以旋毛虫cDNA为模板,PCR扩增CK-1基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a-CK-1,转化感受态大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3),IPTG分别诱导表达3、4、5 h,表达产物进行12%SDS-PAGE分析。以纯化的旋毛虫肌幼虫免疫小鼠制备鼠抗旋毛虫肌幼虫阳性血清,以H7402细胞免疫小鼠制备鼠抗H7402全细胞蛋白阳性血清,以重组CK-1蛋白免疫小鼠制备鼠抗CK-1蛋白阳性血清,分别以其作为一抗,进行Western blot鉴定。结果重组表达质粒pET-28a(+)-CK-1经双酶切及测序鉴定证明构建正确;IPTG最佳诱导时间为4 h,表达的重组CK-1蛋白以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的37.5%;重组CK-1蛋白可被鼠抗旋毛虫肌幼虫阳性血清和鼠抗H7402全细胞蛋白阳性血清识别,鼠抗CK-1蛋白阳性血清可识别旋毛虫肌幼虫蛋白和H7402全细胞蛋白,在相对分子质量38 500处均可见特异性条带,表明重组CK-1蛋白是一个交叉抗原,且具有良好的反应原性。结论原核表达了旋毛虫CK-1基因,为进一步研究旋毛虫的抗肿瘤效应奠定了基础。
- 左绍志张桐嘉常乐杨滨僮宫鹏涛李建华杨举李赫张国才张西臣
- 关键词：旋毛虫肝癌细胞原核细胞
- 旋毛虫与Hela细胞相关抗原抗体抗肿瘤作用的研究
- 本试验先在体外利用MTT和细胞凋亡的检测的方法初步确定了旋毛虫可溶性抗原可以使Hela细胞发生凋亡,在用ELISA方法初步确定了旋毛虫与Hela细胞间存在共同抗原,并利用SDS-PAGE和Western-blotting...
- 王艳春张西臣宫鹏涛李建华杨举李赫张国才
- 关键词：旋毛虫HELA细胞抗肿瘤
- 旋毛虫与人骨肉瘤细胞MG-63相关抗原基因TCTP的原核表达与鉴定
- 2021年
- 目的对旋毛虫(Trichinella spiralis)与人骨肉瘤细胞MG-63相关抗原基因TCTP进行原核表达,对表达产物进行鉴定及反应原性分析。方法利用抗MG-63细胞全蛋白抗血清筛选旋毛虫肌幼虫cDNA表达文库得到旋毛虫TCTP基因。PCR扩增TCTP基因,连接至pET-32a(+)载体,构建重组质粒pET-32a(+)-TCTP,转化入感受态细胞BL21(DE3)后用IPTG诱导表达,利用His标签镍离子蛋白纯化柱对表达产物进行纯化,采用SDS-PAGE和Western blot鉴定重组蛋白的表达及反应原性。结果经酶切鉴定和测序鉴定,重组质粒pET-32a(+)-TCTP构建正确。SDS-PAGE检测重组蛋白TCTP在原核表达系统中主要以可溶性形式表达,融合蛋白的相对分子质量约为43×10^(3)。Wetern blot检测重组蛋白TCTP可被抗MG-63细胞多抗血清识别。结论成功构建了重组质粒pET-32a(+)-TCTP,表达的重组蛋白TCTP具有反应原性,为该蛋白生物学功能的研究奠定了基础。
- 岳涛涛张楠鹿香云张洪波王晓岑宫鹏涛李建华李新张西臣
- 关键词：旋毛虫TCTP原核表达蛋白纯化
- 小鼠Lewis肺癌细胞与旋毛虫相关抗原基因sHSPs的原核表达及鉴定被引量：1
- 2019年
- 目的对小鼠Lewis肺癌(LLC)细胞与旋毛虫(Trichinella spiralis)相关抗原基因sHSPs进行原核表达,对表达产物进行抗原性鉴定。方法利用噬菌体文库展示技术筛选旋毛虫与LLC细胞相关抗原基因并分析,获得sHSPs(DQ 986457)基因。以旋毛虫cDNA为模板,PCR扩增sHSPs基因,连接至表达载体pET-32a(+)后转化入感受态BL21(DE3),以IPTG诱导表达,采用SDS-PAGE和Western blot鉴定重组蛋白的表达及其反应原性。结果重组表达质粒pET-32a(+)-sHSPs经双酶切及测序鉴定证明克隆载体构建正确,SDS-PAGE检测其表达重组蛋白相对分子质量约为36×10~3。Western blot检测重组蛋白可被抗LLC细胞多抗血清识别。结论成功构建了pET-32a(+)-sHSPs克隆载体,其表达的重组蛋白可与抗LLC细胞多抗血清反应即具有反应原性,为该蛋白的研究奠定了基础。
- 鹿香云张西臣李姗张洪波宫鹏涛李建华杨举
- 关键词：旋毛虫原核表达
- 与A549细胞相关的旋毛虫抗原蛋白7TR单链抗体的筛选被引量：2
- 2017年
- 目的筛选可与A549细胞相互作用的抗旋毛虫7TR单链抗体。方法 PCR法克隆旋毛虫7TR基因,连接至表达载体p ET-32a,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导后,将表达的7TR蛋白进行复性及亲合层析纯化;以纯化后的旋毛虫7TR蛋白为抗原,筛选Tomlinson(I+J)人源噬菌体单链抗体库,筛选并纯化阳性抗体,免疫荧光试验检测抗体与A549细胞的结合活性。结果重组表达质粒p ET-32a-7TR经双酶切及测序鉴定证明构建正确;表达的旋毛虫7TR蛋白相对分子质量约50 000。共获得2株稳定分泌抗旋毛虫7TR蛋白单链抗体的E.coli HB2151菌株,命名为4C7和8G5;8G5可与重组7TR蛋白发生特异性结合,具有良好的反应原性,也可与A549细胞发生特异性结合。结论筛选出了与A549细胞具有结合活性的抗7TR单链抗体,为后续的临床应用奠定了基础。
- 王金鹏张国利张海英鹿香云宫鹏涛李建华张西臣
- 关键词：旋毛虫A549细胞单链抗体
- 旋毛虫与小鼠Lewis肺癌细胞相关抗原筛选及其抗血清抗肿瘤效应的研究
- 肺癌是发病率和死亡率增长最快、对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。肿瘤生物治疗被认为是癌症新兴疗法,包括靶向治疗、免疫疗法、基因疗法等,随着生物技术发展,研究发现一些寄生虫感染也具有抗肿瘤作用,其中在20世纪70年代...
- 鹿香云
- 关键词：旋毛虫免疫筛选肿瘤相关抗原
- 文献传递
