广西壮族自治区自然科学基金(0991047)
- 作品数：5 被引量：14H指数：2
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- 相关机构：广西大学解放军第181医院中国科学院更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区自然科学基金国家自然科学基金广西科技基础条件平台建设项目更多>>
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- 高畸形率水牛精子与正常水牛精子差异表达蛋白的分离和鉴定被引量：1
- 2012年
- 旨在分析高畸形率和正常水牛精子的差异表达蛋白。运用双向凝胶电泳以及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS/MS)分析鉴定出高畸形率和正常的水牛精子的差异表达蛋白,并对部分蛋白进行生物信息学分析。结果显示,高畸形率和正常水牛精子之间存在16个表达差异明显的蛋白点,与正常水牛精子相比,5个蛋白斑点表达量上调,6个蛋白斑点下调,3个蛋白斑点缺失,2个蛋白斑点在畸形率高的水牛精子特有。质谱鉴定16个差异蛋白,成功鉴定出6个差异蛋白斑点,对应4种蛋白:左旋天冬酰胺酶、热应激蛋白β-9、半乳糖激酶、β-微管蛋白-2C。研究表明,高畸形率和正常水牛精子蛋白质表达存在一定的差异。
- 杨丽付强黄愉淋蒋丽张明卢克焕
- 关键词：水牛正常精子差异蛋白质组学双向电泳
- 水牛精子蛋白质组双向电泳体系的建立和优化被引量：5
- 2012年
- 建立和优化一种适合水牛精子蛋白质组学研究的双向电泳技术。以水牛精子为研究对象,比较两种不同配方的裂解液,以及不同上样量对其2-DE图谱质量的影响。结果显示,以7 mol/L尿素、2 mol/L硫脲、4%CHAPS、1%DTT、0.5%Cocktail of protease inhibitors为裂解液,24 cm胶条上样量200μg时,可获得较好的精子总蛋白质2-DE图谱。运用ImageMaster 2-Dplatinum分析软件检测出约500个蛋白质点,蛋白质大部分分布在等电点5-7之间,分子量范围约40-90 kD。
- 薛雯杨丽付强刘振方张明卢克焕
- 关键词：水牛精子双向电泳蛋白质组学
- 人和哺乳动物精液的蛋白质组学研究进展被引量：1
- 2012年
- 蛋白质组学技术是21世纪研究生命科学最有价值的技术之一,将其应用到精子和精浆蛋白质的研究后,已取得了许多成果。对蛋白质组、蛋白质组学、双向电泳、质谱、生物信息学等进行了简要介绍,并重点阐述了蛋白质组学技术在精子蛋白和精浆蛋白上的研究进展。
- 杨丽付强薛雯张明
- 关键词：蛋白质组学精液精子精浆
- 多重PCR鉴定水牛胚胎性别的研究被引量：1
- 2011年
- 【目的】建立多重PCR鉴定水牛胚胎性别的技术体系,为下一步优化多重巢式PCR方法奠定基础。【方法】采用热裂解法、蛋白酶K+二硫苏糖醇(DTT)法和吐温-20+DTT法分别提取水牛卵裂球DNA,比较3种方法对G3PDH基因的扩增效果;同时设计1对检测引物和1对内标引物用于胚胎性别鉴定,提取胚胎DNA后进行多重PCR检测。【结果】吐温-20+DTT法具有良好的裂解效果,其有效检出率为97.1%;而经吐温-20+DTT法抽提的DNA用于多重PCR检测,其胚胎鉴定率达到100.0%。【结论】采用吐温-20+DTT法处理水牛胚胎样品后再进行多重PCR性别鉴定可以简化操作步骤、提高鉴定效率,但样品数量不宜太少。
- 付强郑海英陈焕华张明卢克焕
- 关键词：水牛胚胎性别鉴定多重PCR
- 用于质谱鉴定蛋白质胶内酶解方法的优化被引量：6
- 2011年
- 【目的】提高蛋白质胶内酶解效率,减少萃取过程中肽段的损失,增加质谱鉴定的成功率。【方法】在常规胶内酶解方法的基础上,优化脱色、酶解、萃取等步骤,包括:用铁氰化钾和硫代硫酸钠对银染胶块脱色,酶解温度提高至55℃,以40mmol/L碳酸氢铵作为酶切缓冲液,使用50%乙腈(ACN)水溶液3步萃取;并使用一步法胶内酶解探索快速胶内酶解方法。【结果】使用铁氰化钾和硫代硫酸钠可在短时间内将银染胶块完全脱色,55℃温浴可使酶切时间由20h减少为2h,以40mmol/L碳酸氢铵作为酶切缓冲液,可省去ZipTip脱盐步骤。优化后,质谱鉴定率提高30.0%(绝对值),且能明显高酶切效率,使目标肽段更高丰度地呈现出来。【结论】优化后的胶内酶解法可显著提高蛋白质胶内酶解的质谱鉴定成功率和肽段覆盖率,其中一步法胶内酶解法有效减少了胶内酶解时间和步骤,可用于高丰度蛋白质的快速质谱检测。
- 胡炜付强朱平川杨丽刘振方张明
- 关键词：质谱鉴定成功率
