公共文化服务平台

国家自然科学基金(30600343): 作品数：20 被引量：37H指数：4; 相关作者：李芬吴秀丽田树娟孔艳张帅更多>>; 相关机构：河南师范大学平原大学河北农业大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金河南省高校科技创新团队支持计划河南省教育厅自然科学基金更多>>; 相关领域：生物学医药卫生理学更多>>

人Elp3在毕赤酵母中的分泌表达及HAT活性测定: 2012年; 人Elp3蛋白(human Elongator protein 3,hElp3)是组蛋白乙酰转移酶(Histone acetyltranferase,HAT)Elongator复合物的催化亚基,可参与组蛋白乙酰化修饰与基因转录延伸,其功能异常与人类多种疾病相关.目前对其羧基末端高度保守的第二功能域研究较少.以pYES2hElp3质粒为模板,PCR获hElp3基因全长,插入改造的毕赤酵母表达载体pPIC9KH,转化巴斯德毕赤酵母菌GS115菌株.经表型鉴定、PCR分析和G418筛选得到Mut+型多拷贝整合菌.0.5%的甲醇诱导hElp3高效分泌表达,Ni-NTA纯化及Western印迹证实获目的蛋白.OPA法测得其拥有良好的HAT活性,为体外测定其第二结构域是否拥有催化活性奠定了基础,对筛选抑制其HAT活性的小分子药物用于疾病治疗研究至关重要.; 胡岩岩李玉会白雪陈百宝刘鸣宇李芬; 关键词：ELP3 毕赤酵母分泌表达活性测定

延蛋白复合体的生物学功能: 2007年; 延蛋白(elongator)是具有组蛋白乙酰转移酶活性的六亚基复合体,目前已在几种真核生物中发现其同源物,延蛋白在真核生物中高度保守。已有的研究结果表明,延蛋白与基因转录延伸、胞外分泌以及tRNA修饰等生物学功能相关。新近发现延蛋白还有一个Fe4S4活性中心,预示延蛋白还有一些其他的未知功能。; 刘洪梅李芬张卫林; 关键词：生物学功能

不同裂解液对血管蛋白提取和磷酸化蛋白免疫印迹的影响被引量：4: 2015年; 为寻找一种适合血管组织蛋白提取的裂解液配方以及用于磷酸化蛋白的免疫印迹分析,运用3种不同的细胞裂解液A,B和C,分别对经预处理的等量猪冠状动脉血管样品进行总蛋白的提取,BCA法测蛋白含量,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对蛋白进行分离,免疫印迹法检测pERK,p-AKT,p-MLC和p-MYPT1 4种磷酸化蛋白表达以比较3种裂解液的裂解效果.结果表明,3种裂解液均可以满足一般免疫印迹分析的要求,其中C液提取的蛋白浓度最低,B液提取的蛋白含量最高,但不适于低含量的小分子磷酸化蛋白p-MLC的检测,A液用于免疫印迹检测大、中、小3种分子量的磷酸化蛋白效果最佳.即细胞裂解液A(50mmol·L-1 pH 7.4Tris-HCl,150mmol·L-1 NaCl,0.1%SDS,1%NP-40,1mmol·L-1 EDTA,1mmol·L-1 EGTA,临用前加入蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂)可作为提取血管组织总蛋白进一步用于Western检测的一种理想配方.; 任向波吴秀丽李芬; 关键词：血管免疫印迹

表观遗传修饰与干细胞分化调控被引量：1: 2007年; 干细胞具有自我更新和多种分化潜能的特性。干细胞向分化细胞的转变涉及到基因表达模式的改变,与自我更新有关的基因关闭,与细胞特化有关的基因激活。表观遗传调控机制,包括DNA甲基化、组蛋白修饰和微RNA(microRNA)介导的基因调控,在多个层面上控制发育过程中基因表达。近年研究表明,动态的表观遗传调控机制在干细胞自我更新和分化中起关键作用。; 马克学席兴字李芬; 关键词：干细胞 DNA甲基化组蛋白修饰微RNA

不同肝切除方式对HSP70表达的影响被引量：1: 2011年; 热休克蛋白70(Heat shock protein 70,HSP70)是热休克蛋白家族中的重要成员,在保护机体免受环境胁迫、组织创伤以及病原体感染中发挥作用.本文研究了不同肝切除方式对大鼠HSP70表达的影响,结果发现与一次性2/3肝切除方式相比,短间隔连续肝切除(short interval successive partial hepatectomy,SISPH)显著提高HSP70的表达.特别是0-4-8-12和0-36-40-44肝切除方式,短时间连续肝切除对HSP70的表达有累加效应.本文为短间隔连续肝切除模型的推广和应用提供基础资料.; 席兴字; 关键词：肝切除热休克蛋白70

Elp3基因缺失对酿酒酵母咖啡因耐受性的影响被引量：1: 2022年; 过量咖啡因(Caffeine,CAF)对真核细胞有毒害作用.Elp3是组蛋白乙酰转移酶Elongator复合物的催化亚基,其缺失会影响Elongator的功能,进而使酵母产生对CAF敏感表型.为研究酿酒酵母CAF耐受性,以不同浓度CAF处理野生型、elp3⊿及转入完整和部分缺失Elp3的elp3⊿菌株,检测其敏感性,并通过RT-qPCR和ChIP实验研究了热激胁迫下SSA3的表达.结果发现常温下各菌株生长均随CAF浓度的增加而减缓,且elp3⊿细胞CAF耐受性下降更显著;高温处理使elp3⊿菌株对CAF更加敏感;在elp3⊿菌株中转入两保守功能域缺失的Elp3,其咖啡因耐受性并无明显变化;无论热激与否,elp3⊿菌株SSA3表达均显著低于野生型对照,Elp3直接参与热激胁迫下SSA3的转录延伸.研究表明Elp3基因缺失和高温处理均可使酿酒酵母的CAF耐受性降低;Elp3两保守功能域为其参与CAF胁迫反应所必需;高温协同处理下elp3⊿菌株CAF耐受性的显著降低可能与此条件下SSA3等应激基因表达受阻有关.; 胡孟可吴秀丽李芬; 关键词：酿酒酵母 ELP3 保守结构域

酵母组蛋白乙酰转移酶Elp3多克隆抗体的制备、鉴定及应用被引量：5: 2009年; 酵母Elp3（Yeast elongation protein 3,yElp3）是组蛋白乙酰转移酶复合物Elongator的催化亚基,通过组蛋白乙酰化参与基因转录延伸。近来证实胞质中也存在的Elp3还参与胞外分泌、tRNA修饰等重要生物学过程。为深入研究Elp3的复杂功能,PCR法克隆pYES2-yElp3质粒中编码yElp3N末端亲水区段（22~94aa）,构建原核表达载体pMXB10-yElp3-219,经IPTG诱导表达和几丁质柱纯化后免疫兔制备多克隆抗体。ELISA检测显示该抗体有较高的效价（不低于1：2500）,免疫印迹结果表明该抗体可特异性识别表达纯化及酵母细胞中的Elp3蛋白,运用该抗体进行的染色质免疫沉淀揭示转入elp3？菌株的酵母/人融合的yhElp3之所以可补偿突变株的基因表达延迟缺陷,是因其直接参与SSA3基因的转录延伸。; 李芬田树娟张帅孔艳王艳芳; 关键词：ELP3 原核表达多克隆抗体

烟草新驱动蛋白NtTKR过表达对酵母生长的影响被引量：3: 2014年; 为了解烟草新驱动蛋白NtTKR功能信息,构建了EGFP融合的NtTKR基因酵母表达载体并转入酿酒酵母W303诱导表达,荧光显微镜观察结果表明,诱导条件下的转化细胞发出明亮的绿色荧光,表明转入的NtTKR得到了高效表达.转化株在诱导和非诱导条件下培养3d,可见NtTKR过表达菌落比对照小的多;但通过绘制8h内生长曲线发现二者细胞数目无显著差别;表明NtTKR过表达对酵母细胞生长的抑制可能更多的是因为抑制其体积增大,而非分裂速度减慢引起的细胞数目降低.已知NtTKR在烟草受精卵、发育各个时期的胚、幼叶、根尖及茎尖等细胞分裂旺盛部位均优势表达,推测该基因在烟草中可能与上述各部位新生细胞的体积增大相关.; 李芬任向波腾飞吴秀丽田树娟; 关键词：驱动蛋白细胞分裂

猪冠状动脉平滑肌细胞的分离、培养及鉴定被引量：2: 2014年; 目的，建立体外分离培养猪冠状动脉血平滑肌细胞（PCASMC）的技术方法并观察其生长特征．方法：酶联合消化法原代分离猪冠状动脉来源的CASMC，利用倒置显微镜观察细胞生长情况；免疫荧光染色法鉴定细胞；台盼蓝法、绘制生长曲线法测定冠状动脉PCASMC传代细胞的成活率和生长特征．结果：分离培养的细胞3d后呈梭形生长，7～8d后生长迅速可传代；第2代细胞在显微镜下观察3～5d即可见典型“峰-谷”状生长；免疫荧光染色显示胞浆内α-平滑肌肌动蛋白表达阳性，细胞成活率为97．5％；细胞生长曲线近似“s”形．结论：本研究建立了高效分离和培养PCASMC的方法，细胞均稳定地表达α-平滑肌肌动蛋白，为血管疾病的研究提供了理想的细胞模型．; 杨敬辉吴秀丽王冠峰陈文伟李芬; 关键词：冠状动脉平滑肌细胞原代培养

冰浴时间对氯化钙转化法转化效率的影响被引量：3: 2007年; 确定大肠杆菌DH5α氯化钙转化法时感受态细胞与质粒混合物的最佳冰浴时间。方法:在保证其他条件一致的情况下,设置大肠杆菌感受态细胞和质粒混合物的冰浴时间梯度并建立阴性对照进行研究。结果:冰浴20 min时转化效率最高。结论:与其他冰浴时间相比,冰浴20 min时的转化效率最高,实验重复性好,成本低廉,而且操作简便,值得推广使用。; 张卫林赵晶李芬; 关键词：感受态细胞

国家自然科学基金(30600343)

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

国家自然科学基金(30600343)

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈