广东省自然科学基金(10717)
- 作品数：19 被引量：345H指数：7
- 相关作者：侯凡凡许顶立高天明黄巧冰赖文岩更多>>
- 相关机构：中国人民解放军第一军医大学南方医科大学南方医院南方医科大学更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人可溶性晚期糖基化终产物受体的原核表达及活性鉴定被引量：3
- 2005年
- 目的构建人可溶性晚期糖基化终产物受体(hsRAGE)His融合蛋白表达载体并在原核细胞表达与纯化。方法PCR扩增hRAGE基因编码区的胞质外段,利用分子克隆技术将其重组于pET-14b载体中。利用酶切、序列分析鉴定克隆正确性。转化大肠杆菌BL21(DE)3,用异丙基b-D硫代半乳糖(IPTG)诱导融合蛋白表达。以尿素对获得的包涵体进行处理,用金属螯合亲和层析的方法纯化融合蛋白并进行复性。以Western印迹和ELISA法对融合蛋白的免疫原性及与AGE的结合活性进行鉴定。结果克隆的hsRAGE完全正确,经过表达与纯化,获得了相对分子质量约45000的融合蛋白。纯化得到的变性蛋白经复性后可被相应抗体识别。所得到的hsRAGE具有与AGE相互结合的活性,并能够抑制AGE诱导的内皮细胞NF-kB的表达。结论成功地构建了hsRAGE融合蛋白原核表达载体且获得高效表达,得到大量的复性蛋白;该蛋白具有特异的免疫原性,保持与AGE的结合活性,并能够有效阻断AGE-RAGE相互作用。
- 赵善超姜勇刘靖华李志杰邓鹏张桂林刘志强张训侯凡凡郑少斌
- 关键词：晚期糖基化终产物
- 晚期糖基化终产物受体的结构和功能被引量：31
- 2003年
- 晚期糖基化终产物受体 (RAGE)是一种膜蛋白 ,属于免疫球蛋白家族 ,由 4 0 0多个氨基酸组成 ,分子量为 35kD ,分胞外段、跨膜段和胞内段 ,在单核巨噬细胞、血管内皮细胞、肾系膜细胞、神经细胞及平滑肌细胞等细胞中普遍表达。RAGE作为信号转导受体介导晚期糖基化终产物 (AGE)和其配体在细胞表面结合 ,激活细胞内多种信号转导机制 ,在糖尿病慢性并发症、透析相关性淀粉样变 (DRA)、阿尔采末病 (AD)、动脉粥样硬化等疾病发生中起重要作用。对RAGE结构和功能的认识可能为这些疾病的防治提供新的靶位 。
- 赵善超侯凡凡姜勇
- 关键词：晚期糖基化终产物受体信号转导
- MAPK通路在晚期糖基化终产物诱导人脐静脉内皮细胞骨架结构改变中的作用被引量：2
- 2006年
- 目的:探讨晚期糖基化终产物通过MAPK信号转导通路引起人脐静脉内皮细胞骨架结构改变的作用机制。方法:用胰酶消化法分离培养人脐静脉内皮细胞,以不同浓度的晚期糖基化终产物修饰的人血清白蛋白(AGE-HSA)与之作用不同时间,并选用不同的试剂以及主导激活或抑制的腺病毒突变体以阻断或激活MAPK通路,与对照组进行比较,采用免疫荧光染色法显示细胞骨架肌动蛋白F-actin的结构改变。结果:AGE-HSA以剂量和时间依赖的方式引起内皮细胞骨架蛋白F-actin结构的改变,未经修饰的HSA无此作用;p38通路的特异性抑制剂SB203580和ERK通路的特异性抑制剂PD98059均可抑制AGEs对细胞骨架的作用,而JNK通路抑制剂SP600125则无此作用;MKK6b、MEK1结构活性型突变体的重组腺病毒可明显诱导细胞骨架改变,MKK7活性型则无此作用;且MKK6b、MEK1无活性型突变体可明显抑制AGEs对细胞骨架的作用;p38α亚型的无活性突变体可阻断MKK6b结构活性型突变体诱导的细胞骨架改变。结论:AGE修饰蛋白通过MAPK家族中的p38和ERK信号转导通路引起内皮细胞骨架肌动蛋白F-actin的重组和再分布。
- 郭晓华黄巧冰陈波李强朱艳军侯凡凡赵明
- 关键词：有丝分裂素激活蛋白激酶类糖基化终产物肌动蛋白类
- 晚期糖基化终产物对心肌细胞细胞周期和凋亡的影响
- ＜正＞ 目的:晚期糖基化终产物（advanced glycation end-products,AGEs）是一组在蛋白质的氨基的醛基之间非酶性糖基化反应终产物的总称。目前国内外研究已证实AGEs参与了糖尿病、尿毒症、冠状...
- 曾平许顶立李针任昊赖文岩
- 文献传递
- 晚期糖基化终产物对心肌细胞p57、p27、p21及hhLIM蛋白表达的影响被引量：6
- 2004年
- 目的 探讨晚期糖基化终产物 (advancedglycationendproducts ,AGEs)对体外培养乳鼠心肌细胞p5 7、p2 7、p2 1及hhLIM蛋白表达的影响。方法 采用酶消化法体外培养乳鼠心肌细胞 ,实验前换用含 1%胎牛血清的DMEM培养液饥饿培养 2 4h。应用Western蛋白印迹法检测不同浓度AGEs(5 0mg L、10 0mg L)对心肌细胞刺激 12、2 4、4 8h后细胞中p5 7、p2 7、p2 1及hhLIM蛋白表达情况。结果 不同浓度的AGEs刺激心肌细胞 12h均可使p2 7蛋白表达增加 ,以 5 0mg L浓度作用更为明显 ,刺激 2 4、4 8h无影响。AGEs对p5 7蛋白的表达呈动态变化 :刺激 12h时表达下降 ,2 4、4 8h呈增加趋势。p2 1蛋白在心肌细胞表达较弱 ,AGEs对其表达无显著影响。AGEs增加hhLIM蛋白的表达 ,以 5 0mg L浓度作用 12h最为显著。结论 AGEs通过增加心肌细胞细胞周期素依赖性激酶抑制因子p5 7和p2 7蛋白及hhLIM蛋白的表达 ,参与心室重塑的发生和发展。
- 曾平许顶立李针赖文岩任昊
- 中国五省市自治区慢性肾脏病患者心血管疾病的患病率调查被引量：197
- 2005年
- 目的了解中国慢性肾脏病(CKD)患者心血管疾病(CVD)的发病规律和发病因素。方法对我国5个省市、自治区7家三级甲等医院2002年至2003年收治的1239例慢性肾脏病患者进行流行病学调查。结果(1)慢性肾脏病患者冠状动脉疾病(CAD)的患病率为16 5%,左心室肥厚(LVH)为58 5%,充血性心力衰竭(CHF) 27 7%,脑卒中(CVA) 5 6%,大血管动脉粥样硬化性病变31 5%。(2)第2~3期轻度慢性肾脏病患者的CAD(5 9% )和CVA(1 0% )患病率已明显高于同地区一般人群;高达41 2%的轻度肾功能减退患者合并LVH, 13 8%有充血性心衰的临床证据;CAD、LVH和CHF的患病率随肾功能恶化而增高。(3)本组透析患者CAD的患病率(20 0% )低于欧美国家,而脑卒中患病率(5 4% )显著高于国外报告;不同年龄组、不同地区和糖尿病与非糖尿病慢性肾脏病之间CAD的患病率存在差异;但男、女两性之间无明显差异,女性LVH的患病率甚至高于男性。结论慢性肾脏病患者是心血管疾病的高发人群,轻度慢性肾脏病患者心血管疾病的危险性已明显增加。本组透析病人CAD的患病率低于欧美国家,发病规律也与一般人群有别,故有必要深入研究慢性肾脏病患病人群心血管疾病的发病机制和危险因素。
- 侯凡凡马志刚梅长林戎殳黄颂敏刘先蓉袁伟杰郭云珊王莉何强王秀玲桑晓红栗霄立
- 关键词：慢性肾脏病患病率心血管疾病LVH轻度
- P38 MAPK激活在高血糖致大鼠微血管通透性增高过程中的作用被引量：4
- 2006年
- 目的研究P38 MAPK信号传导通路在糖尿病大鼠微血管内皮细胞通透性增高中的作用机制。方法SD雄性大鼠,腹腔注射链脲佐菌素(STZ 55 mg/kg)制备糖尿病模型。分正常组、糖尿病组、溶剂对照组、MKK6b(A)组和MKK6b(E)组。溶剂组:给予相同容量的柠檬酸缓冲液;MKK6b(A)组:在糖尿病模型基础上,实验前24 h尾静脉注射MKK6b(A)2.5 mL/kg;MKK6b(E)组:在实验前24 h给正常大鼠尾静脉注射MKK6b(E)2.5 mL/kg。用荧光强度检测微血管通透性;用荧光染色法观察微血管内皮细胞骨架蛋白的形态。结果糖尿病大鼠的微血管通透性明显高于正常组;注射MKK6b(E)可以增高大鼠微血管的通透性,而注射MKK6b(A)后微静脉的高通透性则被抑制。结论P38 MAPK信号转导系统参与介导了糖尿病微血管通透性增高的反应过程。
- 朱艳军李强陈波黄绪亮黄巧冰
- 关键词：高血糖微血管通透性细胞骨架P38MAPK
- 成年大鼠海马CA1区锥体神经元外向整流氯离子单通道特性被引量：7
- 2003年
- 采用膜片钳内面向外式技术 ,在急性分离成年大鼠海马CAl区锥体细胞上记录到了外向整流氯离子通道(outwardlyrectifyingchloridechannel ,ORCC) .长时间去极化 (≥ 60mV)刺激后 ,在 3 0 %的游离膜片上记录到有外向整流特性的单通道氯电流 ,膜电位在 -60mV到 0mV之间的单通道电导为 (16 58± 1 54) pS (n =10 ) ,而在 0mV到 + 60mV之间电导为 (40 92± 3 17)pS .通道开放概率有明显的电压依赖性 (膜电位 -60mV时 ,Po=0 44± 0 12 ;膜电位为 + 60mV时 ,Po=0 86± 0 0 6,n =10 ) .在对称Cl- 浓度 (150mmol/L)时 ,通道翻转电位为 (-4 17± 1 84)mV .当溶液中部分NaCl被葡萄糖酸钠替代后 ,翻转电位为 :(-3 4 2 3± 4 86)mV ([Cl- ] i/ [Cl- ] o=(3 0mmol/L) / (150mmol/L) ) ,接近氯离子通道的理论值 ,这表明通道具有氯离子选择性 .浴槽液中分别加入氯通道阻断剂DIDS和SITS可以使 + 4 0mV的通道开放概率从 (0 83± 0 0 6)和(0 86± 0 0 6)分别降低到 (0 12± 0 0 5)和 (0 13± 0 0 4) (n =5) ,冲洗后可使开放概率基本恢复 .上述研究结果显示 。
- 李建国李晓明胡平王颖李晓文乔健天高天明
- 关键词：氯离子通道膜片钳海马锥体神经元
- 短暂脑缺血大鼠海马CA1区锥体细胞大电导Ca^(2+)依赖K^+通道活动降低(英文)被引量：6
- 2002年
- 短暂脑缺血可对随后的损伤性脑缺血表现出明显的耐受 .有研究表明大电导Ca2 + 依赖K+ (BKCa)通道活动增强参与了缺血性脑损伤 .采用膜片钳的内面向外式 ,观察了 3min短暂脑缺血后 6h、 2 4h以及 4 8h大鼠海马CA1区锥体细胞上BKCa通道活动的动态变化 .短暂脑缺血后BKCa通道的单通道电导和翻转电位均未见明显变化 ,但通道的开放概率则在缺血预处理后的前 2 4h内显著降低 .通道动力学分析显示通道关闭时间变长是短暂脑缺血后通道活动降低的主要原因 ,因为通道的开放时间未发生明显变化 .
- 胡平李晓明李建国王颖黄巧冰高天明
- 关键词：短暂脑缺血CA1区锥体细胞
- 晚期糖基化终产物诱导血管内皮细胞骨架形态改变的机制被引量：10
- 2005年
- 目的研究晚期糖基化终产物修饰蛋白对内皮细胞细胞骨架肌动蛋白的形态学影响及特异的糖基化终产物受体和氧化应激在此病理过程中的作用。方法用不同浓度的糖基化终产物修饰人血清白蛋白与人脐静脉内皮细胞株ECV304在体外共同培养不同时间,并设立对照组进行比较,采用免疫荧光染色法显示细胞骨架的形态学改变。结果与对照组相比,糖基化终产物修饰人血清白蛋白以时间和剂量依赖的方式影响内皮细胞骨架肌动蛋白聚合丝状和可溶性单体(或球状)形态的改变。随着糖基化终产物修饰人血清白蛋白作用浓度和时间的增加,丝状肌动蛋白所形成的外周致密带边缘出现锯齿样断裂,趋于变细崩解消散,最终形成由非极性单行排列的肌动蛋白丝组成的应力纤维。可溶性单体表现为向细胞浆和胞膜移位,胞浆区出现点状和丝状染色,细胞间距离明显增大。可溶性糖基化终产物受体的抗体和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸盐氧化酶抑制剂均可阻断糖基化终产物对细胞骨架的影响。结论糖基化终产物修饰蛋白对细胞骨架的影响是通过与内皮细胞上的糖基化终产物受体结合并引起细胞内的氧化应激所介导的,这一作用可能与糖基化终产物所致血管通透性升高有关。
- 郭晓华陈波王述昀黄巧冰侯凡凡
- 关键词：病理学与病理生理学晚期糖基化终产物细胞骨架动脉粥样硬化
