浙江省自然科学基金(Y204156)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- 重组人肝再生增强因子的克隆、表达及纯化
- 2005年
- 目的通过构建原核表达系统,在大肠埃希菌中表达重组人肝再生增强因子(hALR)蛋白,为各种急慢性肝损伤及肝衰竭的治疗提供新的治疗方法奠定基础。方法利用正常人肝组织提取总RNA,经一步法逆转录聚合酶链反应(RTPCR)获取hALRcDNA全序列,构建原核表达载体hALRpET28a(+)转化大肠埃希菌(BL21),诱导表达重组hALR蛋白,以组氨酸为标签进行蛋白纯化。十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)和WesternBlot鉴定重组蛋白。结果经双酶切和DNA测序证实hALRcDNA正确插入表达载体pET28a(+),成功表达并纯化得相对分子质量为23000的重组蛋白,低温诱导表达使可溶蛋白明显增加,与预期结果相符。结论成功表达和纯化获重组hALR蛋白。
- 盛吉芳俞海英李君周林福李兰娟
- 关键词：肝细胞生长因子重组蛋白质类重组人肝再生增强因子蛋白纯化逆转录聚合酶链反应原核表达载体
- 人肝再生增强子原核表达系统的构建与筛选
- 2007年
- 目的构建多个人肝再生增强子(hALR)的原核表达系统进行原核表达、鉴定及筛选,得出理想的系统用于进一步的研究。方法构建4个重组表达质粒pET28a(+)/hALR、pET23a/hALR、pGEX-5x-1/hALR、pGEX-5x-2/hALR,分别转化3种宿主菌,诱导表达重组hALR蛋白,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Westem blotting鉴定重组蛋白。结果双酶切和DNA测序证实hALR cDNA正确插入4种表达载体并成功转化宿主菌,仅pET28a(+)/hALR的BL21(DE3)菌株成功表达相对分子质量为23kDa的重组蛋白。结论筛选得出人肝再生增强子的原核表达系统,成功表达并鉴定重组hALR蛋白。
- 俞海英刘骏李君盛吉芳
- 关键词：原核表达系统
