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北京市自然科学基金(6092004): 作品数：11 被引量：39H指数：4; 相关作者：吴国娟张中文李华伟陆彦庄英华更多>>; 相关机构：北京农学院新疆农业大学北京大学第一医院更多>>; 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金北京市属高等学校人才强教计划资助项目更多>>; 相关领域：农业科学生物学更多>>

鸡干扰素α受体Ⅱ胞外域的克隆及GST融合蛋白原核表达: 2010年; 应用RT-PCR技术扩增鸡干扰素α受体Ⅱ胞外域(CHIFNAR2 EC)基因片段,将扩增产物克隆至pMD-18T,转化J M109感受态。重组质粒与表达载体pGEX-6P-1经双酶切后构建重组表达质粒pGEX-6P-CHIF-NAR2EC,转入BL21,提取质粒酶切和测序鉴定。测序结果与参考序列比较,核苷酸同源性为99%。用IPTG诱导表达,对诱导条件进行初步优化,表达蛋白主要以包涵体的形式存在。通过切胶的方法进行纯化,获取具有较高纯度的融合蛋白。表达产物经SDS-PAGE和Western Blot检测显示融合蛋白分子量大小约为50 KD,采用抗GST抗体进行Western Blot,成功检测到特异性目的条带。; 牛金鹏王惠川吴国娟; 关键词：克隆融合蛋白原核表达

连翘酯苷对人工感染传染性支气管炎病毒雏鸡肺组织JAK/STAT信号通路的调节作用被引量：8: 2011年; 探讨连翘酯苷对人工感染传染性支气管炎病毒雏鸡的肺组织JAK/STAT信号通路的调节作用,分别设连翘酯苷预防组高、中、低和治疗组高、中、低6个剂量组,并设利巴韦林阳性对照组、空白对照组和病毒对照组。提取雏鸡肺组织总RNA,用相对荧光定量RT-PCR的方法测定雏鸡体内干扰素-α,JAK,STAT-1mRNA的相对表达量。结果表明连翘酯苷预防组高剂量100 mg/kg、中剂量50 mg/kg和治疗组中剂量100 mg/kg对雏鸡体内干扰素-α的mRNA水平表达有诱生作用(P<0.01),治疗组中剂量显著上调JAK及STAT-1的表达,与JAK/STAT信号通路一些因子的上调相关,其机制部分与肺组织的JAK/STAT信号通路激活和相关信号的表达有关,这是连翘酯苷发生抗病毒作用的机制之一。; 张羽璐李华伟庄英华高飞苑嗣纯王惠川吴国娟; 关键词：连翘酯苷鸡传染性支气管炎病毒干扰素-Α JAK/STAT信号通路

鸡干扰素α受体Ⅱ胞外域多克隆抗体的制备被引量：1: 2011年; 干扰素（IFN）是机体免疫细胞在诱导剂激发下产生的一种细胞因子。自身IFN对感染性疾病尤其是病毒性疾病具有良好的治疗作用,甚至非自身IFN在治疗感染性疾病过程中也能发挥重要作用。研究表明,IFN-β和IFN-γ受体缺损的小鼠对病毒的感染特别敏感。; 牛金鹏庄英华许承洋王惠川吴国娟; 关键词：干扰素Α 多克隆抗体 IFN-Γ 病毒性疾病

连翘酯苷对体外培养细胞的毒性研究被引量：1: 2009年; 探讨了连翘酯苷对体外培养细胞的毒性,以期为人们更好地研究利用连翘酯苷提供实验依据。实验采用细胞病变法观察连翘酯苷对猪肾细胞(PK-15)、猴肾细胞(Marc-145)、鸡胚肾细胞(CEK)、鸡外周血淋巴细胞(PBL)等4种细胞的形态损伤;用MTT法检测连翘酯苷作用这4种细胞后的细胞活性和细胞数量的变化。根据这两种方法的结果计算出连翘酯苷对这4种细胞的半数致死量。实验结果显示高剂量的连翘酯苷可致细胞发生病变,而低剂量组的细胞形态优于对照组。经SPSS16.0统计,连翘酯苷对PK-15、Marc-145、CEK3种细胞的半数致死量分别为137.8、87.1、384.4μg/mL,对PBL应用到中华人民共和国兽药典(2000年版)规定药量的10倍剂量,结果未发现致死性。因此,适当合理的连翘酯苷用量对体外培养的细胞没有毒性,反而有一定的维持细胞形态的营养作用和刺激细胞增殖的作用。; 武聚富张中文况玲沈红陆彦吴国娟; 关键词：连翘酯苷细胞培养毒性

Forsythiaside A Induced IFN-α and Up-regulated the Correlated Factors in JAK-STAT Signaling Pathway in vitro被引量：1: 2012年; [Objective] This study was to investigate the effect of forsythiaside A added in chick embryo kidney cells (CEKs), on the changes in expression of interferon α(IFN-α) and mRNA expression level of correlated factors in JAK-STAT pathway. [Methods] Three levels of forsythiaside (100, 200, 400 μg/ml) were adopted to treat the experimental materials, then the expression levels of IFN-α and correlated factors in JAK-STAT pathway were detected by real-time RT-PCR at the transcriptional level (mRNA) and by Western blot at the translation level(IFN-α protein). [Result] Compared with the control group (untreated group), Application of forsythiaside A not only significantly increased the expression of IFN-α in treated CEKs (P<0.05) , but also up-regulated the expression of STAT1, JAK1, IFNAR1, IFNAR2, IRF1 and IRF7, the correlated factors in JAK-STAT pathway. [Conclusion] Forsythiaside A induced the expression of IFN-α in CEKs, and can positively regulate the JAK-STAT signaling pathway significantly.; 李华伟张中文陆彦马元元张禹吴国娟; 关键词：IFN-Α JAK-STAT

PRRSV和PCV-2共感染小鼠疾病模型的建立被引量：1: 2010年; 45只6周龄昆明小鼠,随机分为3组:单次攻毒组(A组)、连续攻毒组(B组)和正常对照组(C组)各15只。A组于试验1 d先后接种PRRSV和PCV-2,B组于1,3,5 d接种PRRSV和PCV-2,C组于1 d接种MEM细胞培养液,各组于试验后7,14,21,28,35 d随机选3只采血后处死,采用体质量测定、抗体ELISA、荧光定量PCR、肉眼和显微病理观察等4项检测指标进行模型鉴定。结果显示,与C组相比,A组和B组小鼠体质量增率减慢;肺脏出现典型的间质性肺炎病变;腹股沟淋巴结肿大,淋巴细胞坏死;脾脏淋巴细胞缺失,被膜散在出血;肝静脉淤血;抗体检测均呈阳性;荧光定量PCR检测证实,C组不存在病毒复制,A、B组小鼠被检组织均存在病毒复制,相对病毒含量在淋巴结中较其他组织差异显著(P<0.01)。结果表明,试验已成功建立PRRSV和PCV-2共感染昆明小鼠疾病模型。; 马元元张中文周旭平裴兆柱刘钧许承扬吴国娟; 关键词：小鼠 PRRSV 共感染

鸡传染性支气管炎病毒M41型的扩繁及在鸡胚肾细胞上的适应性研究被引量：4: 2011年; 探明鸡传染性支气管炎病毒(Avian Infectious Bronchitis Virus,IBV)感染鸡胚肾细胞(Chicken Embry-o Kidney Cells,CEK cell),并且实现其增殖为目的。将IBV稀释液注射到SPF鸡胚尿囊腔内,培养鸡胚扩繁,观察记录结果;并培养CEK细胞,采用100倍半数组织培养感染量的IBV进行染毒实验;应用Reed-Muench法计算半数鸡胚感染量为10-6.68/0.1 mL;用Real time PCR检测IBV在感染细胞中的含量,以确定IBV在CEKcells中已经感染且增殖成功。结果表明,接种10日龄的SPF鸡胚可以收集更多的、约8 mL的尿囊液毒;反复盲传至7代的IBV可使CEK cells产生明显的细胞病变效应;通过实时荧光定量PCR和RT-PCR检测,最终确定IBV-M41型扩繁成功并且能够在CEK细胞上繁殖,为下一步实验提供了参考。; 李华伟武聚富庄英华高飞吴国娟; 关键词：传染性支气管炎病毒 PCR 适应性

连翘酯苷对鸡IFN-α和JAK-STAT信号通路相关因子的影响被引量：4: 2011年; 【目的】探讨连翘酯苷作用于鸡胚肾(CEK)细胞后,IFN-α的表达变化及JAK-STAT通路相关因子mRNA的表达变化,及连翘酯苷对IFN-α和JAK-STAT信号通路的影响。【方法】将连翘酯苷设为3个浓度(100、200和400μg.mL-1),采用荧光定量RT-PCR,检测IFN-α和JAK-STAT通路相关因子的mRNA表达变化;用western blotting检测IFN-α的蛋白表达情况。【结果】与正常组相比,连翘酯苷不仅显著提高了IFN-α的表达量(P<0.05);而且明显上调了STAT1、JAK1、IFNAR1、IFNAR2、IRF1、IRF7的表达。【结论】连翘酯苷能够在鸡胚肾细胞(chicken embryo kidney cells,CEKs)上诱导IFN-α的表达,且能够正向调节JAK-STAT信号通路传导。; 李华伟张羽璐张中文夏楠郭玮吴国娟; 关键词：连翘酯苷 IFN-Α JAK-STAT WESTERN BLOTTING

血浆中连翘酯苷高效液相色谱检测方法的建立被引量：3: 2009年; 为建立测定血浆中连翘酯苷含量的高效液相色谱方法,将血浆样品经去蛋白处理,以乙腈-水-醋酸（18∶82∶0.41）为流动相,流速为1 mL/min,检测波长为332 nm,柱温为25℃,进样量为10μL,经Angilent ZORBAX SB-C18（5μm×4.6mm×250 mm）色谱柱分离,进行色谱分析。结果表明,本方法连翘酯苷的血浆浓度在0.05-200μg/mL内线性关系良好,精密度和重复性试验RSD均小于5%。本方法简便、灵敏、重现性高,可用于连翘酯苷的药动学和相对生物利用度的研究。; 周旭平陆彦张中文沈红吴国娟; 关键词：连翘酯苷高效液相色谱血浆

鸡传染性支气管炎病毒荧光定量PCR标准曲线的建立被引量：6: 2009年; 笔者针对传染性支气管炎病毒(IBV)M41株中编码核衣壳蛋白的N基因设计并合成一对引物,通过构建重组阳性标准质粒的方法,成功建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法检测IBV的标准曲线。该方法所建立的曲线可检测到初始模板中5×102copies/μL的病毒核酸,与常规PCR相比敏感性大大提高。笔者建立的荧光定量PCR检测方法具有灵敏度高、特异性强、重复性好等特点,可用于传染性支气管炎的临床诊断和健康带毒鸡群的检测。; 武聚富张中文毛东有沈红陆彦况玲吴国娟; 关键词：传染性支气管炎病毒荧光定量PCR 病毒检测

北京市自然科学基金(6092004)

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