国家自然科学基金(30971466)
- 作品数：3 被引量：6H指数：1
- 相关作者：孙奋勇马纪陈迪余守和时宿妹更多>>
- 相关机构：暨南大学同济大学上海市第十人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 过表达Runx2促进C2C12细胞成骨分化被引量：5
- 2010年
- 利用Tet-on(Tetracycline-on)基因表达系统,通过强力霉素(doxycycline,DOX)诱导Runx2基因在C2C12细胞中的表达,探究Runx2促成骨分化功能,为其分子机制的研究提供一个理想的实验平台.先后将调控质粒pTet-on和反应质粒pTRE-Flag-Runx2转染入C2C12细胞,并用G418和潮霉素分别进行2轮筛选,运用实时荧光定量PCR选择对强力霉素诱导敏感的细胞克隆.用不同浓度DOX诱导C2C12/Tet/pTRE-Flag-Runx2细胞,蛋白免疫印迹检测Runx2的表达,确定DOX的最佳诱导浓度与时间,并检测C2C12细胞的成骨分化能力.结果表明,诱导细胞最佳DOX浓度为10μg/ml;最佳诱导时间为12h;诱导后Runx2基因高表达,C2C12细胞向成骨方向分化(P<0.05).成功建立Tet调控Runx2基因表达C2C12细胞系,为进一步研究Runx2基因功能分子机制提供理想的细胞模型.
- 李萍余守和陈迪高忠平申健时宿妹孙奋勇
- 关键词：RUNX2C2C12细胞成骨分化
- MicroRNA-122过表达转基因小鼠的建立
- 2012年
- 目的:建立microRNA-122(mir-122)过表达转基因小鼠模型,为今后研究肝脏发育,分化及肝癌预防、诊断及治疗等提供实验模型。方法:构建mir-122过表达载体,利用受精卵前核显微注射法将mir-122过表达载体导入小鼠受精卵中,获得mir-122过表达转基因小鼠。PCR法检测转基因小鼠的整合情况,实时定量PCR法检测mir-122过表达转基因小鼠肝脏及其主要器官mir-122及其确定靶基因高亲和性阳离子氨基酸转运体-1(CAT-1),切割同源物1(CUTL-1),血清反应因子(SRF)的表达情况。结果:mir-122过表达转基因小鼠,与同窝阴性鼠相比,mir-122在过表达转基因小鼠肝脏及主要器官中的表达升高,mir-122靶基因表达水平下降。结论:成功构建mir-122过表达转基因小鼠。
- 张越马纪安靓贾俊双李振林孙奋勇
- 关键词：过表达转基因小鼠
- 基因Wip1低表达与椎间盘退行性病变的关系被引量：1
- 2013年
- 目的探讨基因Wip1异常表达与椎间盘退行性疾病(intervertebral disc degeneration,IDD)的关系。方法选取62例患者退行性病变的椎间盘组织,通过实时定量PCR测定Wip1基因表达量;siRNA干扰人髓核(nucleus pulposus,NP)细胞Wip1的表达后,通过SA-β-ga1染色检测细胞衰老情况;通过MTT检测NP细胞的增殖能力;通过实时定量PCR检测NP细胞衰老分子标记的表达水平;γ射线照射siRNA转染后的NP P3细胞,分别于不同时间点行SA-β-gal染色检查。结果 62例病变椎间盘组织中,18例Wip1基因的表达明显下降(P<0.01);siRNA干扰人NP细胞Wip1表达后,衰老细胞数量明显增加;MTT结果表明,干扰Wip1的表达能够显著抑制人NP细胞的增殖;P3细胞培养8 d,实时定量PCR检测发现,Col2a1、Agc、Ver的表达水平显著下调,MMP3的表达水平明显增高。y射线照射NP细胞后,SA-β-gal染色显示,Wip1表达组出现明显的衰老现象。结论 Wip1的低表达与椎间盘退行性病变的发生相关,干扰Wip1的表达能够促进NP细胞衰老,而过表达Wip1可以有效抑制细胞衰老的发生。
- 俞蕾马纪王勤婉于永春潘秋辉李晶华
- 关键词：椎间盘退行性疾病细胞衰老
