中国博士后科学基金(00001149)
- 作品数：6 被引量：2H指数：1
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- 相关机构：第四军医大学第四军医大学西京医院陕西省疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金国家自然科学基金更多>>
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- RNA干扰对过表达Hlrg的Hep G2细胞的影响
- 2006年
- 为观察RNA干扰对过表达Hlrg蛋白的Hep G2细胞的影响,构建了封闭Hlrg基因表达的shRNA表达载体pAVU6+27-Hlrg,将pAVU6+27-Hlrg稳定转染到过表达Hlrg蛋白的Hep G2细胞中;分别用相差倒置显微镜、FCM、SABC-FITC、RT-PCR、Western blot等观察细胞改变。测序结果表明pAVU6+27-Hlrg构建成功;针对Hlrg的RNA干扰已完成;相差倒置显微镜发现细胞突起增加;FCM显示干扰组G1期明显缩短。针对Hlrg的RNA干扰能促进过表达Hlrg蛋白的Hep G2细胞的生长。
- 杜可军常文辉侯立朝骆文静陈苏民刘承利陈景元柴玉波
- 关键词：RNA干扰过表达HEP
- 人Lrg在真核细胞内亚细胞定位的检测被引量：1
- 2006年
- 在真核细胞内,进行人Lrg蛋白亚细胞定位的检测。采用绿色荧光蛋白载体pIRES2-EGFP,构建pIRES2-EGFP-Lrg重组载体,稳定转染到真核细胞内,荧光显微镜进行人Lrg蛋白亚细胞定位的检测;同时利用间接免疫方法,检测人Lrg蛋白在几种细胞内的亚细胞定位。发现与EGFP融合的人Lrg蛋白表达于胞浆;间接免疫荧光实验同样表明Lrg是一种胞浆蛋白。说明人Lrg蛋白可能定位于胞浆。上述结果为阐明人Lrg的功能奠定了初步基础。
- 杜可军常文辉侯立朝骆文静刘承利陈苏民陈景元柴玉波
- 关键词：EGFP间接免疫荧光
- Hlrg基因定点突变体的构建及其对HepG2细胞的影响
- 2006年
- 构建Hlrg基因的定点突变体,研究突变Hlrg基因表达的蛋白对HepG2细胞的影响。首先利用数据库对Hlrg基因的结构特点进行分析,在此基础上用PCR法构建Hlrg基因的定点突变体。将突变的Hlrg基因克隆到pcDNA3.1(+)载体中,并稳定转染到HepG2细胞中。流式细胞仪和透射电镜观察突变基因表达的蛋白对HepG2细胞的影响。结果获得了针对Hlrg基因的定点突变体,亮氨酸拉链中的第二个亮氨酸被突变成丝氨酸。发现稳定表达HLrgm蛋白的HepG2细胞中出现一定比例的凋亡细胞。表明构建了Hlrg基因定点突变体,为进一步的功能研究奠定了基础。
- 杜可军常文辉侯立朝宋庆贺刘承利陈苏民陈景元柴玉波
- 关键词：定点突变HEPG2细胞
- 稳定过表达的HLrg蛋白对HepG2细胞周期和细胞形态的影响
- 2006年
- 目的在肝癌细胞系HepG2中稳定过表达HLrg,观察过表达的HLrg蛋白对HepG2的细胞周期和细胞形态等生物学影响。方法构建真核重组表达质粒pcDNA3.1(+)-hlrg,转染到HepG2细胞并进行稳定筛选;对稳定过表达pcDNA3.1(+)空载体的对照组、pcDNA3.1(+)-hlrg的实验组进行观察。Westernblot进行HLrg蛋白的鉴定。流式细胞仪测定细胞周期、MTT法测定生长曲线、透射电子显微镜观测细胞形态的改变。结果获得了稳定过表达pcDNA3.1(+)-hlrg的HepG2细胞株。与对照组相比,过表达HLrg蛋白的细胞株出现G1阻滞,微绒毛减少,分裂相减少,生长趋缓。结论稳定过表达的HLrg蛋白对细胞周期有调节作用,对肝癌细胞HepG2具有生长阻滞的作用。
- 杜可军常文辉侯立朝骆文静刘承利陈苏民陈景元柴玉波
- 关键词：细胞周期细胞形态HEPG2细胞
- 环境内毒素相关新基因的克隆测序及生物信息学分析被引量：1
- 2006年
- 目的克隆表达环境内毒素相关新基因——人lrg基因(简称Hlrg),并进行生物信息学分析。方法采用RT-PCR扩增Hlrg基因,对扩增产物进行序列的测定,利用Internet和GenBank数据库对测序结果正确的Hlrg基因进行生物信息学分析。结果克隆表达了Hlrg基因,测序结果正确;生物信息学分析表明,该序列编码186个氨基酸,GenBank中不含有同源序列。预测相对分子量为21×103,该序列包含有亮氨酸拉链结构,可能具有重要的功能。结论成功扩增、克隆表达了Hlrg基因,对其功能进行了初步预测,为进一步的功能研究打下基础。
- 杜可军常文辉侯立朝刘承利宋庆贺陈苏民柴玉波陈景元
- 关键词：基因克隆分子
- 脂多糖应激新分子融合蛋白的高表达及纯化
- 2006年
- 目的在原核表达系统中表达脂多糖应激新分子编码的蛋白质。方法PCR扩增HlrgcDNA编码区,克隆入表达载体pcTAT中,构建成融合6His的表达载体pcTAT-lrg,转化E.coli BL21(DE3),以IPTG诱导。表达产物用SDS-PAGE及凝胶光密度扫描分析,用Ni-NTA亲和层析柱纯化。结果经过IPTG诱导4 h,表达出相对分子质量(Mr)约25 000的蛋白,占菌体总蛋白的51%。表达产物为可溶性的,用Ni-NTA亲和层析柱纯化的表达蛋白达到电泳纯。加入培养液中的纯化蛋白,可在30 min内进入HEK293细胞。结论在E.coli中成功地高表达人Lrg融合蛋白,并对其进行初步纯化,为人Lrg功能的研究打下基础。
- 杜可军常文辉侯立朝骆文静刘承利陈苏民陈景元柴玉波
- 关键词：克隆纯化
