国家自然科学基金(30972791)
- 作品数：8 被引量：20H指数：3
- 相关作者：黄保军胡梅琮张梅黄大可胡春松更多>>
- 相关机构：安徽医科大学杭州医学院南京军区杭州疗养院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 高迁移率族蛋白1对奥沙利铂诱导的SGC-7901胃癌细胞凋亡的影响被引量：1
- 2011年
- 目的构建pDsRED2-HMGB1重组质粒,探讨转染高迁移率族蛋白1(HMGB1)基因对奥沙利铂诱导的SGC-7901细胞凋亡的影响。方法用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增HMGB1 mRNA全编码序列,将PCR产物插入到pD-sRED2-N1载体的Xho I和EcoR I位点,构建pDsRED2-HMGB1重组质粒;通过脂质体法转染SGC-7901胃癌细胞,荧光显微镜检测HMGB1红色荧光融合蛋白表达。Westernblot鉴定HMGB1蛋白表达。应用流式细胞仪(Annexin-V/PI标记)分析HMGB1过表达对奥沙利铂诱导胃癌细胞凋亡的影响。结果成功构建真核表达质粒pDsRED2-HMGB1,转染SGC-7901细胞后,荧光显微镜下可见细胞内有HMGB1红色荧光融合蛋白的表达;流式细胞术检测发现转染pD-sRED2-HMGB1后SGC-7901细胞凋亡水平较转染pDsRED2-N1组下降22.4%。结论 HMGB1过表达可抑制奥沙利铂诱导的SGC-7901胃癌细胞凋亡。
- 沈磊胡梅琮吴亚欧张梅李群桂丽胡春松张林杰黄保军
- 关键词：细胞凋亡质粒重组融合蛋白质类
- 高迁移率族蛋白1与无菌性炎症被引量：3
- 2012年
- 高迁移率族蛋白1(HMGB1)是一种重要的损伤相关分子模式(DAMP)分子,胞外HMGB1可通过激活其高亲和力受体—晚期糖化终产物受体(RAGE)介导多种细胞损伤以及应激状态反应,参与某些急、慢性无菌炎症过程包括:急性肺损伤、关节炎、慢性肾脏疾病、肠炎等。现就HMGB1-RAGE轴诱导无菌性炎症发生的作用机制作一综述。
- 张梅黄保军
- 关键词：高迁移率族蛋白1无菌性炎症晚期糖化终产物受体
- 辛伐他汀对oxLDL诱导的巨噬细胞活性氧及IL-1β分泌的影响被引量：2
- 2014年
- 目的探讨辛伐他汀对氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,oxLDL)诱导的巨噬细胞内活性氧(ROS)的水平及IL-1β分泌的影响。方法将oxLDL 0、50、100、200 mg·L-1作用于巨噬细胞J774A.1后,采用油红O染色观察脂滴在巨噬细胞内的聚集情况;用辛伐他汀0.5、1.0μmol·L-1作用于oxLDL处理的巨噬细胞,流式细胞仪检测辛伐他汀作用前后细胞内ROS的水平;Western blot检测pro-caspase-1、cleaved caspase-1和成熟IL-1β的表达情况。结果油红O染色结果表明,oxLDL可导致巨噬细胞内明显的脂质聚集,并于100 mg·L-1作用剂量达到摄取脂质的饱和状态;流式细胞仪结果表明,oxLDL可以诱导脂质聚集巨噬细胞内ROS的水平增加,辛伐他汀作用后,ROS水平由(167±0.47)%下降到(139±0.97)%,并呈明显的剂量依赖;Western blot结果表明,辛伐他汀可抑制oxLDL诱导的caspase-1活化及IL-1β的分泌,辛伐他汀处理组与oxLDL实验组相比,cleaved caspase-1及成熟IL-1β的表达呈下降趋势,灰度值差异有统计学意义(P<0.05)。结论在oxLDL诱导的巨噬细胞脂质聚集模型中,辛伐他汀可以抑制巨噬细胞内ROS的产生及caspase-1的活化,并减少IL-1β的分泌。
- 靳梦醒闫海程艳伟桂丽胡春松张林杰黄保军
- 关键词：辛伐他汀巨噬细胞活性氧IL-1ΒCASPASE-1
- 辛伐他汀抑制oxLDL诱导的巨噬细胞焦亡
- 2017年
- 目的探讨辛伐他汀在氧化低密度脂蛋白(ox LDL)诱导巨噬细胞焦亡中的作用及机制。方法 ox LDL作用于J774A.1小鼠巨噬细胞,采用乳酸脱氢酶(LDH)释放试剂盒检测LDH的释放,荧光显微镜观察吖啶橙(AO)、溴化乙锭(EB)的染色情况来判断焦亡细胞膜的完整性;Western blot检测LC3-Ⅱ/Ⅰ、caspase-1与白介素-1β(IL-1β)的蛋白表达情况;分别加入辛伐他汀、3-甲基腺嘌呤(3-MA)自噬阻断剂等药物后,检测上述实验结果的变化情况。结果在ox LDL诱导的巨噬细胞脂质聚集的过程中,辛伐他汀药物有保护膜完整性的作用,并且显著减少LDH的释放,AO/EB荧光染色结果可观察到橘红色荧光(EB)所占比例显著降低,并抑制caspase-1的激活和IL-1β的分泌。然而,当巨噬细胞的自噬过程被3-MA所阻断时,Western blot结果显示LC3-Ⅱ/Ⅰ的表达下调,caspase-1的活性和成熟的IL-1β分泌增加;同时LDH实验和染色实验结果也显示,LDH释放增多、AO/EB染色中橘红色荧光增加,表明ox LDL诱导的巨噬细胞膜的损伤进一步加重。结论辛伐他汀可抑制ox LDL诱导的巨噬细胞焦亡,可能与增强ox LDL诱导的巨噬细胞自噬有关。
- 彭雪李允允靳梦醒黄大可黄保军
- 关键词：辛伐他汀氧化低密度脂蛋白自噬
- 脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞parkin表达及线粒体自噬形成被引量：4
- 2014年
- 目的:探讨巨噬细胞在脂多糖(LPS)处理后parkin表达及对线粒体自噬的影响。方法:无菌分离并原代培养小鼠腹腔巨噬细胞;200 ng/ml LPS作用巨噬细胞,JC-1标记线粒体,流式细胞仪检测线粒体膜电位变化;RT-PCR检测巨噬细胞parkin mRNA水平;Western blot检测parkin及自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达水平;激光共聚焦显微镜分别检测巨噬细胞在LPS处理前后parkin在细胞内的分布及与LC3和线粒体三者的共定位情况。结果:JC-1染色流式细胞仪检测结果显示,LPS处理后,巨噬细胞线粒体膜电位降低,并随LPS作用时间延长呈持续下降趋势;parkin mRNA在LPS处理6 h内仅有少量的增加,但parkin蛋白水平在LPS刺激6 h后增加明显;parkin在巨噬细胞定位结果表明,未受LPS处理时parkin呈弥散均匀分布,而LPS刺激后parkin呈明显的点状聚集;Western blot检测结果显示巨噬细胞在LPS刺激后,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比例增大,表明巨噬细胞发生明显的自噬;激光共聚焦显微镜结果显示,巨噬细胞在LPS刺激后,parkin、LC3和线粒体三者存在共定位关系。结论:巨噬细胞在LPS刺激后,parkin表达增加并介导线粒体自噬形成,参与对损伤线粒体的清除,可能在巨噬细胞参与的炎症反应中发挥一定的调控作用。
- 程艳伟靳梦醒闫海黄大可黄保军张林杰
- 关键词：巨噬细胞脂多糖PARKIN
- 胞外ATP在小鼠急性肝损伤中的表达及意义被引量：6
- 2014年
- 目的探讨胞外三磷酸腺苷(eATP)在刀豆蛋白A(ConA)诱导小鼠急性肝损伤中的表达及意义。方法将72只昆明种小鼠随机分为对照组(36只)、ConA组(36只)。ConA组由尾静脉处注射20 mg/kg ConA,对照组注射同体积的无致热原生理盐水。2组分别于注射后2、6、12、18、24、48 h留取血液标本和肝脏标本。采用赖氏法检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性,苏木素-伊红(HE)染色法检查肝组织病理学改变,化学发光技术检测血清eATP水平,免疫印迹法检测肝组织嘌呤受体P2(P2X7)蛋白的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清白细胞介素1β(IL-1β)水平。结果成功构建ConA诱导小鼠肝损伤模型。ConA注射2 h后,ConA组血清eATP水平出现增高,并于注射后18 h达峰值(700 nmol/L);同时在小鼠肝组织中检测到P2X7受体的表达。ConA组各时间点血清IL-1β水平均明显高于对照组(P<0.01)。结论在ConA诱导的小鼠急性肝损伤模型中,损伤肝组织出现明显的eATP释放,并可能通过P2X7受体途径影响炎症细胞因子IL-1β的合成和分泌,从而参与急性肝损伤的进程。
- 胡梅琮邹玲莉黄保军王磊
- 关键词：三磷酸腺苷刀豆蛋白A肝损伤白细胞介素1Β
- 脂多糖诱导巨噬细胞自噬相关LC3B-GFP荧光聚集体的形成被引量：1
- 2012年
- 目的构建pEGFP-C1/LC3B重组质粒并转染小鼠巨噬细胞RAW264.7,观察脂多糖(LPS)诱导其自噬相关LC3B-GFP荧光聚集体形成的过程。方法根据编码小鼠微管相关蛋白1轻链3β(LC3B)的开放读码框(ORF)设计引物,RT-PCR扩增小鼠LC3B的ORF,构建pEGFP-C1/LC3B重组质粒;脂质体法转染并筛选稳定表达RAW264.7细胞株,荧光显微镜观察及Western blot鉴定LC3B-GFP融合蛋白表达;LPS刺激稳定转染的RAW264.7细胞株,激光共聚焦显微镜检测不同时间绿色荧光聚集体的分布。结果成功构建真核表达质粒pEGFP-C1/LC3B,并获得稳定表达LC3B-GFP融合蛋白的RAW264.7细胞株,荧光显微镜下可见细胞内有绿色荧光蛋白分布,Western blot鉴定表达LC3B-GFP融合蛋白,激光共聚焦结果显示LPS刺激前融合蛋白呈弥散性分布在胞浆中,而LPS刺激后细胞内有明显绿色荧光聚集体形成并呈时间依赖性逐渐增加。结论成功构建pEGFP-C1/LC3B,转染RAW264.7细胞可正确表达LC3B-GFP融合蛋白,LPS刺激后显示绿色荧光聚集体形成。
- 张梅黄保军胡梅琮程艳伟宋蔚黄大可李群胡春松
- 关键词：绿色荧光蛋白
- 晚期糖化终产物受体在小鼠急性肝损伤中的表达及意义被引量：3
- 2012年
- 目的探讨晚期糖化终产物受体(RAGE)在刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠急性肝损伤中的表达及意义。方法将72只昆明种小鼠随机分为对照(NS)组、ConA组,分别于注射后2、6、12、18、24、48 h眼球取血并留取肝脏标本,用赖氏法检测血清中谷氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)活力;HE染色法检查肝组织病理学改变;RT-PCR技术检测肝组织高迁移率族蛋白1(HMGB1)、RAGE、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-1β(IL-lβ)mRNA的表达;免疫组化法检测肝组织HMGB1蛋白的表达;Westernblot法检测肝组织RAGE蛋白的表达;ELISA法检测血清中TNF-α、IL-lβ含量。结果成功构建ConA诱导小鼠肝损伤模型;注射ConA 2 h肝组织中HMGB1 mRNA表达即增加,至18 h达峰值(P<0.01);HMGB1蛋白表达明显聚集于坏死区域;肝组织RAGE mRNA于12 h表达上调;RAGE蛋白的表达于24 h达到峰值,与NS组相比差异有统计学意义(P<0.01);肝组织TNF-αmRNA表达分别在6、24 h出现2个峰值,血清TNF-α含量在注射ConA 2 h达峰值(455.25 ng/L),随后逐渐减低,至48 h与NS组相比无明显差异;注射ConA各时间点小鼠肝组织与血清中IL-1β水平均显著高于NS组(P<0.01)。结论在ConA诱导小鼠急性肝损伤模型中,损伤肝组织RAGE的表达显著增加,这可能与诱导肝组织损伤中炎症因子的进一步产生有关。
- 胡梅琮胡涛靳小可黄大可张梅李群胡春松黄保军
- 关键词：刀豆蛋白A肝损伤高迁移率族蛋白1晚期糖化终产物受体肿瘤坏死因子Α白介素-1Β
