湖南省自然科学基金(01JJY2071)
- 作品数：10 被引量：58H指数：5
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- 相关机构：中南大学湘雅二医院中南大学更多>>
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- 黄芪对TGF-β1致人腹膜间皮细胞分泌细胞外基质的影响被引量：17
- 2003年
- 目的 :探讨黄芪对腹膜纤维化的作用及可能机制。方法 :人腹膜间皮细胞 (HPMC)作体外培养 ,在第三代 ,将细胞转板至细胞融合后 ,将其分为对照组 (F12 ) ,TGF β1组 (F12 +TGF β15ng/ml) ,TGF β1加黄芪 1组(F12加TGF β1加黄芪 ,黄芪终浓度为 10 0 μg/ml,TGF β1加黄芪 2组 (F12加TGF β1加黄芪 ,黄芪终浓度为 1mg/ml) ,分别在 2 4,48h采用ELISA法检测上清液中纤维连接蛋白 (FN)和纤溶酶原抑制剂 (PAI 1)的含量 ;FNmRNA ,PAI 1mRNA和碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)mRNA的表达采用半定量逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)检测。结果 :①HPMC表达FN ,PAI 1和bFGF ;②HPMC在 5ng/mlTGF β1刺激下分泌FN及PAI 1明显的增加 ,与对照组比较差异有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ;③HPMC在TGF β1和不同浓度的黄芪刺激后 ,在 2 4h内可使FN及PAI 1减少 ,尤其是PAI 1与TGF β1组比差异有显著性意义 (P <0 .0 5 )。④HPMC经TGF β1作用 12h后 ,FNmRNA ,PAI 1mRNA和bFGFmRNA半定量结果与对照组相比 ,其表达量分别上调 18.5 4%,8.6 %和 6 6 .9%,HPMC经 10 0μg/ml和 1mg/ml黄芪作用 12h后FN ,PAI 1和bFGFmRNA的表达与TGF β1组比较均下调 ,其结果分别为5 .3 %,1.3%,3 .8%和 5 .4%,74.3 %,2 3 .7%。结论 :TGF β1可促进HPMC合成?
- 刘映红刘伏友段绍斌肖平袁芳彭佑铭成枚初夏家辉
- 关键词：TGF-Β1腹膜间皮细胞分泌细胞外基质
- TGF-β1对人腹膜间皮细胞分泌细胞外基质和bFGF的影响被引量：16
- 2002年
- 目的 :研究TGF - β1对人腹膜间皮细胞分泌细胞外基质和bFGF的影响。方法 :人腹膜间皮细胞(HPMC)作体外培养 ,在第三代 ,将细胞转板至细胞融合后 ,将其分为对照组 (F12 )和TGF - β1刺激组两组(F12 +TGF - β15ng/ml) ,分别在 2 4 ,4 8h采用ELISA法检测上清液中纤维连接蛋白 (FN)和纤溶酶原激活物抑制剂 (PAI- 1)的含量 ;采用半定量逆转录多原酶链反应 (RT -PCR)检测HPMC细胞内FN ,PAI - 1和碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)mRNA的表达。结果 :HPMC表达FN ,PAI - 1和bFGF ;HPMC在 5ng/mlTGF - β1刺激下分泌FN及PAI - 1明显的增加 ,与对照组比较差异有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ;HPMC经TGF- β1作用 12h后 ,FNmRNA ,PAI- 1mRNA和bFGFmRNA半定量结果与对照组相比 ,其表达量分别上调18.5 4 % ,8.6 %和 6 6 .9%。结论 :TGF - β1可促进HPMC合成与分泌细胞外基质和bFGF。
- 刘映红袁芳肖平李一宁段绍斌彭佑铭李军夏家辉刘伏友
- 关键词：TGF-Β1间皮细胞细胞外基质BFGF碱性成纤维细胞生长因子
- TGFβ_1反义RNA对腹膜间皮细胞分泌细胞外基质的影响
- 2004年
- 目的 :研究转化生长因子 β1(TGFβ1)反义RNA对体外培养的人腹膜间皮细胞 (HPMC)细胞外基质合成与分泌的影响。方法 :将反义TGFβ1基因真核表达载体转染HPMC ,用ELISA法检测转染细胞上清液中纤维连接蛋白 (FN)和Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂 (PAI 1)的蛋白质水平 ;用半定量逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)法检测转染细胞内FN ,PAI 1和胶原Ⅰ (ColⅠ )的mRNA表达 ,并与未转染HPMC对照组和转染空载体组比较其变化。结果 :TGFβ1反义RNA转染HPMC后 ,与对照组相比 ,转染 2 4h后 ,FN ,ColⅠ ,PAI 1mRNA分别下调 17% ,2 6 % ,9.6 % ;转染 4 8h后FN ,PAI 1蛋白含量亦明显下降 (P <0 .0 5 )。结论 :人反义TGFβ1基因真核表达载体可抑制HPMC合成细胞外基质 。
- 袁芳刘伏友刘映红段绍斌彭佑铭黄亮群
- 关键词：TGFΒ1HPMC反义RNA腹膜间皮细胞分泌细胞
- 人正、反义转化生长因子beta1基因真核表达载体的构建被引量：2
- 2003年
- 目的 :构建人转化生长因子beta 1(TGFβ1)正、反义基因真核表达载体。方法 :从人胎脑的cDNA文库中扩增出TGFβ1共 12 84bp长的DNA片段后 ,与T载体直接进行高效连接 ,并测序证实无突变。接着利用TGFβ1引物两端所设计的酶切位点将目的片段定向亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1( )。构建的正反义表达重组体 (pcDNA3.1 TGFβ1和pcDNA3.1 antiTGFβ1)经限制性内切酶消化证实其中有目的片段完整插入。结果 :本实验成功构建了人正、反义TGFβ1基因真核表达载体。结论 :人正、反义TGFβ1基因真核表达载体的构建 ,为今后研究腹膜纤维化的防治奠定了实验基础。
- 袁芳段绍斌刘伏友彭佑铭刘映红李军黄亮群夏家辉
- 关键词：转化生长因子Β基因疗法
- 胰岛素对人腹膜间皮细胞增殖、损伤及凋亡的影响被引量：2
- 2004年
- 目的 明确胰岛素是否对人腹膜间皮细胞具有毒性或者保护作用。方法 使用人腹膜间皮细胞细胞株 ,传代培养。用四甲基偶氮唑盐比色法 (MTT)测定HPMC的增殖程度。采用全自动生化分析仪测定培养液中乳酸脱氢酶LDH水平示细胞损伤 ,Hoechst332 5 8染色观察细胞凋亡形态学变化及计算凋亡细胞百分比。分为单纯培养基对照组 ,4 .2 5 %葡萄糖组 ,不同浓度胰岛素组和不同浓度的胰岛素加 4 .2 5 %葡萄糖组。结果 与对照组相比 ,4 .2 5 %葡萄糖致LDH水平明显增高 ,并显著降低MTT渗入量 ,明显增加凋亡细胞百分比 ;不同浓度的胰岛素对HPMC增殖无影响 ,不同浓度胰岛素 2 4h后可明显升高LDH水平(P <0 .0 5 ) ,不同浓度胰岛素作用 12h均后导致凋亡细胞百分比显著升高 (P <0 .0 5 ) ;不同浓度葡萄糖胰岛素组 12h、2 4hMMT渗入量较葡萄糖组明显升高 (P <0 .0 5 ) ,组间差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,浓度大于2 5U/L胰岛素加葡萄糖组作用 2 4h后与葡萄糖组相比显著降低LDH水平 (P <0 .0 5 ) ;不同浓度胰岛素加葡萄糖组作用 12h后与葡萄糖组相比凋亡细胞百分比明显下降 (P <0 .0 5 )。结论 胰岛素能导致HPMC损伤、诱导凋亡 ,同时在一定范围内可缓解高糖对HPMC的毒性作用。
- 刘映红黄昭刘伏友彭佑铭卓莉
- 关键词：胰岛素高糖人腹膜间皮细胞增殖凋亡
- 载体质粒介导的TGF-β1短发夹RNA及TGF-β1反义RNA对人腹膜纤维化的影响被引量：7
- 2004年
- 目的研究pcDU6载体质粒介导的转化生长因子β1(TGF-β1)短发夹RNA(shRNA)对体外培养的人腹膜间皮细胞(HPMC)TGF-β1表达的影响,并与TGF-β1反义RNA对HPMC的作用比较。方法针对TGF-β1的以ggcc开始的21碱基大小的片段,分别设计2对寡核苷酸,形成双链后将其依次连入带有U6启动子的pcDNA3.1(-)载体(命名为pcDU6)。2.对DNA双链通过BamHI酶切位点连接后形成中间由6碱基序列间隔的反向互补序列,构建成TGF-β1短发夹RNA的产生质粒。并构建反义TGF-β1基因真核表达载体。采用胰蛋白酶消化法从人大网膜组织中分离间皮细胞,建立稳定的体外培养模型。用脂质体转染表达TGF-β1shRNA的pcDU6载体质粒和表达反义TGF-β1RNA的pcDNA3.1(-)的载体质粒导入高糖(4.25%D-葡萄糖)和细菌脂多糖(LPS)刺激下人腹膜间皮细胞。采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)半定量分析HPMC中TGF-β1mRNA的表达以及纤连蛋白(FN)、Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)和胶原Ⅰ(ColⅠ)的mRNA表达。采用双抗夹心法酶联免疫吸附实验检测HPMC培养液中TGF-β1蛋白质水平以及FN和PAI-1的蛋白质水平。结果HPMC在高糖和LPS的刺激下可明显上调TGF-β1的表达(P<0.01)。TGF-β1反义RNA转染HPMC24h后,与对照组相比,FN、ColⅠ、PAI-1mRNA分别下调17%、26%、9.6%;转?
- 刘伏友刘虹袁芳彭佑铭刘映红段绍斌
- 关键词：TGF-Β1短发夹RNATGF-Β1反义RNA腹膜纤维化基因疗法
- 丝裂素活化蛋白激酶信号通路在人腹膜纤维化的作用被引量：8
- 2003年
- 目的 探讨丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号通路对转化生长因子(TGF)β1致人腹膜间皮细胞(HPMC)高表达纤连蛋白(FN)、纤溶酶原激活物抑制物(PAI)1的调控作用。方法 采用胰蛋白酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞,建立稳定的体外培养模型。用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)评估TGF-β1和细胞外信号调节激素(ERK)及p38阻断剂对HPMC的增殖作用。采用酶联免疫双抗夹心法检测HPMC培养液中FN、PAI-1的蛋白质水平。采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测HPMC细胞内FN、PAI-1mRNA的表达。结果 (1)TGF-β1能刺激HPMC增殖(P<0.05),且呈剂量时间依赖性,加ERK阻断剂组或p38阻断剂组较TGF-β1组有明显抑制作用(P<0.01)。(2)TGF-β1能引起HPMC FN、PAI-1蛋白水平显著增高(P<0.01);加ERK阻断剂组或p38阻断剂组能使上述高表达受到抑制(P<0.01)。(3)TGF-β1能使HPMC FN、PAI-1mRNA表达上调,加ERK阻断剂组或p38阻断剂组能使上调水平受到抑制。结论 MAPK对TGF-β1致人腹膜间皮细胞高表达FN和PAI-1起调控作用,为临床防治腹膜纤维化提供新的思路。
- 樊敏段绍斌彭佑铭李军刘伏友
- 关键词：丝裂素活化蛋白激酶信号通路腹膜纤维化转化生长因子Β1腹膜透析
- 黄芪液拮抗乳酸盐腹透液对人腹膜间皮细胞的损伤作用被引量：12
- 2002年
- 目的 :研究黄芪液对乳酸盐腹透液致腹膜间皮细胞增殖及损伤作用的影响。方法 :采用胰蛋白酶 -ED TA消化法 ,从人腹膜组织中分离间皮细胞 ,并建立体外人腹膜间皮细胞 (HPMC)培养模型。以MTT法测定HPMC增殖程度 ,采用自动生化分析仪检测 ,培养液中乳酸脱氢酶 (LDH)水平示细胞损伤程度。结果 :2 .5 %乳酸盐腹透液中加用黄芪液 (1mg/ml)与HPMC作用 4 5min ,其培养液中LDH水平较腹透液对照组明显降低(P <0 .0 1) ,HPMC增殖能力明显增强 (P <0 .0 1)。结论 :黄芪液能拮抗乳酸盐腹透液致HPMC的损伤。
- 刘映红刘伏友段绍斌彭佑铭肖平李军卓莉袁芳樊敏
- 关键词：间皮细胞乳酸盐类
- TGFβ1反义寡核苷酸对人腹膜间皮细胞增殖和纤维连接蛋白的影响被引量：1
- 2005年
- 目的探讨阳离子脂质体介导的TGFβ1反义寡核苷酸(antisenseoligonucleotides,ASON)对人腹膜间皮细胞(HPMC)体外增殖及其分泌纤维连接蛋白(FN)的影响,初步探索腹膜间皮细胞对腹膜纤维化影响和TGFβ1反义寡核苷酸对其的干预作用,为临床防治腹膜纤维化寻找有效途径。方法①人腹膜间皮细胞原代培养,第三代用于实验;②合成特异性针对TGFβ1mRNA转译起始区ASON及正义、错义寡核苷酸,并和阳离子脂质体形成复合物;③将合成的寡核苷酸与第三代腹膜间皮细胞共同孵育24、48h,分为对照组(F12培养基组)、TGFβ1反义寡核苷酸组、TGFβ1正义寡核苷酸组和TGFβ1错义寡核苷酸组,采用MMT法观察细胞增殖,ELISA法测定细胞上清液内FN蛋白含量以及RT-PCR测定FNmRNA表达。结果①TGFβ1反义寡核苷酸作用人腹膜间皮细胞24、48h后,其细胞增殖率明显低于其它各组(P均<0.05);②TGFβ1反义寡核苷酸作用人腹膜间皮细胞24、48h后其上清液中FN蛋白质的含量明显降低;TGFβ1正义寡核苷酸组明显升高(P<0.05);③正义、反义和错义各组寡核苷酸作用人腹膜间皮细胞24h时FNmRNA表达与对照组比较,正义组上调22%,而反义组和错义组分别下调22%和11%。结论TGFβ1反义寡核苷酸能够抑制人腹膜间皮细胞增殖和FN的过度表达。
- 刘映红刘伏友彭佑铭袁芳段绍斌刘虹
- 关键词：人腹膜间皮细胞细胞增殖纤维连接蛋白
- 转化生长因子β与腹膜纤维化:基因治疗的靶点被引量：3
- 2003年
- 袁芳刘伏友段绍斌
- 关键词：转化生长因子ΒTGF-Β腹膜纤维化基因治疗细胞因子
