国家自然科学基金(30500491)
- 作品数：12 被引量：23H指数：3
- 相关作者：石欣汤永辉高乃荣杨正平肖志更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 胰腺癌的早期诊断被引量：3
- 2007年
- 胰腙癌是一种恶性程度高、预后较差的消化系统肿瘤。如果胰腙癌患者早期能够得到外科治疗，其生存状况将会明显改善。早期发现、早期诊断和早期治疗是提高存活率的关键。人们一直在努力寻找早期诊断胰腺癌的标记物如肿瘤血清学标记物、基因标记物，其中血清学标记物中有MUC基因、CA199、CA242和TSGF、CAM17．1；基因诊断标记物有癌基因、抑癌基因和端粒酶。同时影像学的发展也在早期诊断胰腺癌方面发挥了一定作用。
- 张齐石欣范健
- 关键词：胰腺肿瘤
- Cyclin/Cdks复合物相关调控分子与肿瘤关系的研究进展被引量：7
- 2008年
- 杨正平石欣
- 关键词：细胞周期素细胞周期依赖性激酶肿瘤细胞周期细胞周期调控
- 慢病毒导入的CDC25B2 siRNA对胰腺癌细胞CFPAC-1生物学行为的影响
- 2008年
- 目的利用已构建成功的、在人胰腺癌细胞株CFPAC-1中稳定抑制细胞分裂周期25同源体B（CDC2582）的重组慢病毒，建立CDC2582表达降低的细胞株，以研究该基因的作用。方法将产生CDC2582小干扰RNA（siRNA）分子的、携带绿色荧光蛋白的重组慢病毒感染CFPAC-1细胞后，用流式细胞仪筛选稳定表达的细胞株。应用RT—PCR和Westernblot分别对细胞中CDC2582的mRNA和蛋白表达水平进行分析。应用MTT法、流式细胞仪、平板克隆形成和Transwell小室法分别检测其对细胞增殖、周期、细胞克隆形成能力和迁移侵袭能力的影响。结果CDC2582 siRNA显著下调CFPAC-1细胞中CDC2582的表达，所构建的重组慢病毒导入的siRNA有较高的沉默效率，CFPAC-1细胞的增殖能力、克隆形成能力以及迁移侵袭能力显著增强，细胞周期无明显改变。结论CDC2582基因可显著影响胰腺癌CFPAC-1细胞的增殖、克隆形成和迁移能力，为利用CDC2582所介导的信号通路进行肿瘤基因治疗提供了实验依据。
- 杨正平石欣肖志张齐孔波严伟葛梓
- 关键词：慢病毒属
- CDC25B_3基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定
- 2009年
- 目的构建CDC25B3基因RNAi慢病毒载体。方法合成CDC25B3基因RNAi有效靶序列的OligoDNA,退火形成双链DNA,与双酶切后的pGCL-GFP载体(含有U6启动子和GFP基因)连接产生LV-shCDC25B3慢病毒载体,挑选阳性克隆经PCR和测序鉴定。用脂质体转染法将LV-shCDC25B3、pHelper1.0和pHelper2.0质粒共转染293T细胞,产生慢病毒,以293T细胞绿色荧光蛋白的表达水平测定病毒滴度。结果PCR和测序证实,成功地构建了CDC25B3shRNA的慢病毒载体LV-shCDC25B3。浓缩病毒悬液的滴度为1×108TU/ml。结论成功构建人CDC25B3基因RNAi慢病毒载体。
- 张齐范健石欣孔波肖志杨正平
- 关键词：RNA干扰CDC25B胰腺癌慢病毒
- CDC25B1对人胰腺癌细胞株Patu8988的生物学行为的影响
- 2008年
- 目的探讨CDC25B1基因在人胰腺癌细胞株Patu8988中的表达情况,并将真核表达重组载体pcDNA-CDC25B1转染至细胞中,观察CDC25B1基因对细胞生物学行为的影响,以了解它在细胞周期及胰腺肿瘤细胞恶性转化方面的作用,为研究胰腺癌的发病机制与治疗提供理论依据。方法利用Lipofectamine2000将CDC25B1转染至人胰腺癌细胞株Patu8988中,通过RT-PCR和Westernblot在mRNA和蛋白水平验证质粒转染成功,通过MTT实验、侵袭实验和细胞周期检测,观察CDC25B1对细胞生物学行为的影响。结果RT-PCR发现在胰腺癌细胞株Patu8988和转染空质粒的细胞株中,CDC25B1在mRNA水平表达很弱;转染pcDNA-CDC25B1组中CDC25B1高表达。Westernblot发现在胰腺癌细胞株Patu8988中,CDC25B蛋白有少量表达;转染pcDNA-CDC25B1组CDC25B蛋白高表达。MTT实验显示,转染pcDNA-CDC25B1组的细胞生长在72h受到明显抑制(P(0.05)。侵袭实验显示,转染pcDNA-CDC25B1的细胞其穿透Matrigel胶的能力明显增强(P(0.05)。流式细胞计量术显示,转染了pcDNA-CDC25B1组中,G1期的细胞明显增多(P(0.05);同时转染了pcDNA-CDC25B1组中,G2期的细胞明显减少,与未处理组比较有统计学意义(P(0.05)。结论在胰腺癌细胞株Patu8988中的CDC25B1转录水平很弱,存在少量CDC25B蛋白表达。转染的CDC25B1基因提高CDC25B1蛋白的表达,使细胞停滞在G1期,对细胞的生长有抑制作用,但能够增强细胞的侵袭能力;CDC25B1可能不是通过单一的调控细胞周期而实现其对细胞的影响,还存在其它多种途径。
- 肖志石欣杨正平张齐孔波严伟葛梓
- 关键词：基因转染
- 影响胰腺癌病人预后的因素研究进展被引量：6
- 2008年
- 肖志石欣
- 关键词：胰腺癌预后
- 胰腺癌相关基因研究进展被引量：1
- 2006年
- 汤永辉高乃荣石欣
- 关键词：基因研究进展胰腺癌以手术为主姑息性手术新发病例
- 胰腺癌组织中CDC25B表达及临床意义的初步探讨
- 2007年
- 目的研究CDC25B基因在胰腺癌组织中的表达,探讨其在胰腺癌发病机制中的作用。方法利用实时荧光定量-PCR技术检测24例胰腺癌组织和4例正常胰腺组织中CDC25B基因的表达,PCR产物的定量方法采用比较Ct法,应用western blot检测其蛋白的表达水平。用Kaplan-Meier生存率曲线分析CDC25BmRNA与预后的关系。结果实时荧光定量-PCR发现CDC25B基因平均模板量在正常胰腺组织中为0.000635±0.000210,胰腺癌组织中为0.001988±0.000650;与正常胰腺组织相比,胰腺癌组织中CDC25B mRNA表达上调3.13倍(P<0.05),CDC25B mRNA升高5倍以上者生存时间缩短。胰腺癌组织中CDC25B蛋白也过度表达,正常胰腺组织CDC25B蛋白表达为1.22±0.33,胰腺癌组织为5.56±1.57,上调4.56倍(P<0.01)。结论CDC25B在胰腺癌组织中表达明显上调,CDC25B mRNA升高者预后差。
- 石欣卫文俊高乃荣程张军汤永辉
- 关键词：胰腺肿瘤
- 胰腺癌相关基因寡核苷酸芯片的制备和初步应用被引量：1
- 2007年
- 目的探讨胰腺癌相关基因寡核苷酸芯片的构建,初步验证其在检测胰腺癌基因表达谱方面的应用。方法有目的地筛选胰腺癌相关基因,采用合成后点样的方法,制成寡核苷酸基因芯片。TRIzol 法抽提组织总 RNA,在 cDNA 第一链合成过程中,通过反转录酶将 CyDye 标记核苷酸直接掺入到 cDNA 中制备荧光探针,其中用 Cy3-dCTP 标记胰腺癌组织,Cy5-dCTP 标记正常胰腺组织。将荧光标记探针与芯片杂交16～18 h。用 Agilent 扫描仪进行扫描,Imagene3.0软件进行图像分析,计算两种荧光 Cy3与 Cy5信号强度的比值。挑选差异基因 CDC25B 和 TUSC3进行荧光定量 PCR(sybrgreen 方法)验证,PCR 产物的定量方法采用比较 Ct 法。结果芯片杂交扫描图像信号清晰,具有较低的整体背景和较高的信噪比,各阳性质控点信号均匀一致,阴性质控点和空白点信号低。与正常组织相比,胰腺癌组织中差异表达基因24条,占全部基因的25.5%,其中上调基因17条(18.1%),下调基因7条(7.4%)。荧光定量 PCR 验证,CDC25B 和 TUSC3基因在胰腺癌中的表达趋势与芯片实验的结果一致。结论本研究制备的胰腺癌相关基因芯片可同时、并行检测多种胰腺癌相关基因的表达改变,具有一定的特异性和敏感性。胰腺癌组织与正常胰腺组织相比,基因表达谱具有明显差异。
- 石欣卫文俊高乃荣程张军汤永辉
- 关键词：胰腺肿瘤基因寡核苷酸芯片基因表达
- 胰腺癌组织中BRAF表达的初步研究
- 2006年
- 目的:了解BRAF基因在正常胰腺和胰腺癌组织中的表达水平。方法:6例胰腺癌标本取自胰腺癌手术患者,3例正常胰腺组织取自外伤性胰腺损伤需切除部分胰腺者。用Trizol法抽提每份组织的总RNA,分别进行紫外分光光度计测定、琼脂糖凝胶电泳及Lab on ch ip检测,对总RNA进行质控;应用实时定量PCR技术检测正常胰腺和胰腺癌组织BRAF的mRNA水平;应用W estern b lot检测BRAF的蛋白表达水平。结果:BRAF mRNA水平在正常胰腺组织中为0.001 016 7±0.000 25,胰腺癌组织中为0.002 606 2±0.001 09,上调2.56倍;W estern b lot显示,正常胰腺组织BRAF蛋白表达为6.70±2.50,胰腺癌组织为21.23±5.60,上调3.17倍。结论:胰腺癌组织中BRAF mRNA和蛋白表达水平均明显上调,其可能的调控机制及生物学效应还有待进一步研究。
- 程张军石欣卫文俊汤永辉高乃荣
- 关键词：胰腺癌BRAF实时定量聚合酶链反应WESTERNBLOT
