国家科技支撑计划(2008BAK41B01)
- 作品数：13 被引量：94H指数：5
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- 相关机构：中国计量科学研究院中国计量学院广州市计量检测技术研究院更多>>
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- 转基因番茄及其核酸检测技术研究进展被引量：10
- 2009年
- 番茄作为重要的GMCs/GMF(genetically modified crops/food,转基因作物/食品)之一,在我国已被列入第一批实施标识管理的农业GMOs(genetically modified organisms,转基因生物)目录。通过对全球转基因番茄及其核酸检测技术研究现状的分析,阐述了转基因番茄的主要研究方向是研发具有延熟、抗虫等优良性能的番茄新品系,应用于疫苗以及其他药用性蛋白的生物反应器研究;总结了全球已获准上市和在研的重要转基因番茄品系的基因表达盒信息及其核酸检测研究数据;剖析了在转基因番茄核酸检测技术研究中尚存在的如关键性技术标准化以及标准物质缺乏等问题,并提出研究展望。希望为建立与国际接轨的转基因番茄量值溯源传递关键技术体系提供参考。
- 顾晓敏黎事伦胡良勇麦荣嘉周伦彬周晓红
- 关键词：生物工程转基因番茄核酸检测技术
- 转基因水稻种子核酸提取方法的比较研究被引量：2
- 2011年
- 以转基因水稻克螟稻2号及其受体水稻秀水11的种子为试验材料,将水稻种子脱壳磨成粉末后,称取100mg粉末分别用传统CTAB法和5种核酸提取试剂盒进行水稻基因组DNA的提取,其中试剂盒A和试剂盒B为磁珠法,其余为硅胶过柱法,将提取的基因组DNA通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计、荧光定量PCR等3种检测方法比较其提取效果,并结合提取时间和提取成本的比较,以期找到性价比最佳的提取方法。结果表明,试剂盒A和试剂盒B提取的基因组DNA完整性最好、纯度和提取效率最高,综合提取效果、耗时及成本等因素考虑,试剂盒B的性价比最佳。本研究为转基因水稻种子的检测和研究奠定了基础。
- 隋志伟余笑波王晶李亮臧超叶子弘
- 关键词：转基因水稻基因组DNA
- 基于数字PCR的单分子DNA定量技术研究进展被引量：49
- 2012年
- 数字PCR是一项针对单分子目标DNA的绝对定量技术.该技术是将含有DNA模板的反应溶液分配到大量独立的反应室中并且发生扩增反应,通过统计反应室中的阳性信号来定量DNA的拷贝数.DNA样品在反应室中随机和独立分布是单分子成功扩增和准确定量DNA拷贝数的关键因素.本文综述了数字PCR的发展历史、数字PCR与实时荧光定量PCR的区别,以及数字PCR在临床诊断、转基因成分定量、单细胞基因表达、环境微生物检测和下一代测序等方面的最新进展,并展望了该技术的应用前景.
- 李亮隋志伟王晶臧超余笑波
- 关键词：实时荧光定量PCR拷贝数单分子
- 基于四极杆-飞行时间质谱的非标记蛋白定量检测方法学研究被引量：3
- 2012年
- 以四极杆飞行时间质谱检测的蛋白肽段的质谱信息为基础,开发了一种简单、准确的蛋白定性、定量检测方法,并用于牛血清白蛋白的定性、定量检测。对酶解肽段的梯度洗脱条件和流速等液相色谱条件进行了优化;进行蛋白样品的酶解及质谱检测,利用MassHunter定量软件对数据进行分析;为减少假阳性结果的出现,实验优化了数据处理软件中的设置参数,并对方法的重现性进行了考察。结果显示,重复检测的8个肽段峰面积的RSD均在3.0%以下。该方法对牛血清白蛋白的检出限为100 ng。实验发现,样品中蛋白的含量与检测到的肽段匹配率呈对数关系,并从检测到的丰度较高的8个肽段中确定可用于BSA蛋白定性检测的肽段为:HLVDEPQNLIK,定量检测的肽段为:ATEEQLK,方法的回收率为106%。该方法操作简便,检测快速,成本较低,专一性强,可用于蛋白特异性肽段的筛选及复杂生物样品中蛋白的检测。
- 王珊珊赵汝松苑金鹏赵金
- 关键词：牛血清白蛋白
- 转基因水稻克螟稻2号定量检测用质粒标准分子研制及不确定度评价被引量：5
- 2012年
- 转基因作物的食用安全和环境安全一直受到消费者与各国政府及相关机构人员高度重视。质粒标准分子是转基因核酸量值的载体,为实现转基因植物核酸量值准确性、可比性和有效性提供保障。描述了转基因水稻克螟稻2号质粒标准分子(pKMD2)的研制过程,包括质粒构建、特异性、均匀性、稳定性、可替代性和量值及不确定度评价等方面。量值结果表明pKMD2质粒标准分子所含两个基因片段比值为1.032,不确定度为0.032,可以替代基因组作为阳性标准品用于实验室质控、含量检测及贸易争端等领域。
- 李亮臧超王晶隋志伟赵正宜董莲华
- 关键词：转基因水稻不确定度
- 转基因水稻华恢1号检测用质粒标准分子研制被引量：3
- 2013年
- 质粒标准分子作为阳性标准品已广泛用于转基因作物及产品的核酸定量检测。但是目前多数质粒标准分子只用于研究,未能成为国家级标准物质。因此,按照国家一级标准物质技术规范,研制了用于检测转基因水稻华恢1号的质粒标准分子,内容包括质粒分子的构建、纯度分析、特异性检测、可替代性研究、均匀性检验、稳定性考察、定值与不确定度评估。结果表明,该质粒分子标准物质半年内稳定,可替代基因组作为华恢1号定量的阳性标准。
- 李亮王晶臧超隋志伟赵正宜
- 关键词：转基因水稻实时荧光定量PCR
- 天然纳米材料凹凸棒土促进Sp2/0细胞增殖的研究被引量：3
- 2010年
- 目的:研究天然纳米材料凹凸棒土(ATP)对Sp2/0细胞增值的作用,并探讨这种作用与ATP优化细胞培养环境相关。方法:通过CCK8法和细胞计数方法,比较正常培养方式和添加天然纳米材料凹凸棒土培养方式下Sp2/0细胞的生长曲线、细胞活性,除外,Sp2/0细胞培养过程中谷氨酰胺的消耗以及细胞代谢产物NH4+浓度随时间的变化。结果:一定浓度范围的天然纳米材料凹凸棒土可有效的提高了Sp2/0细胞的细胞活性和细胞密度,促进了Sp2/0细胞的增殖。结论:天然纳米材料凹凸棒土通过降低细胞代谢产物中铵离子浓度,优化了细胞培养环境,促进了Sp2/0细胞增值。
- 张海燕吴凡王诺鑫蔡冬清郭建平丁克俭
- 关键词：凹凸棒土细胞培养细胞活性
- 适于转基因油菜RT73品系特异性检测的标准分子构建及其适用性鉴定被引量：3
- 2011年
- 针对目前转基因产品检测标准物质缺乏的难题,构建适于转基因油菜RT73品系特异性检测的标准分子pEASY-RT73,其包含转基因油菜RT73品系3'端侧翼序列,油菜内标准基因HMG和PEP片段。对其在定性和定量检测中的适用性进行了实验室内部验证,结果表明,标准分子pEASY-RT73高度特异于转基因油菜RT73品系。以标准分子为标准品的普通PCR扩增中,3个目标片段的检测下限(LOD)均为10拷贝。实时荧光PCR检测的LOD均为25拷贝,定量下限(LOQ)均为50拷贝。以标准分子为标准品构建的标准曲线反应效率介于0.96-1.02间,相关系数均大于0.999。分别以PEP和HMG为内标准基因对5个盲样的测试结果显示,测量值与设定值间偏差(Bias)介于-14.13%-14.29%间,SD小于0.20,RSD小于18.0%。因此,标准分子pEASY-RT73可很好地替代植物来源阳性标准品用于转基因油菜RT73及其来源产品品系特异性检测。
- 李俊毅李想褚庆华吕蓉张舒亚潘良文黄新朱水芳
- 关键词：PCR实时荧光PCR
- 荧光标记寡核苷酸的反相离子对色谱分析被引量：2
- 2009年
- 建立荧光标记寡核苷酸反相离子对色谱分析方法,优化了流动相醋酸三乙胺浓度(0～0.15 mol/L),pH4.5～7.0和洗脱强度等色谱条件。对5-mer,10-mer和15-mer非标记和5′-羧基荧光素(5′FAM)标记寡核苷酸的保留进行比较分析,研究荧光标记寡核苷酸的保留机理,并分离TaqManTM探针等多种常用荧光标记寡核苷酸。结果显示,不同长度荧光标记寡核苷酸在0.01 mol/L醋酸三乙胺,pH7.0的条件下获得最大分离。荧光标记寡核苷酸的保留与非标记寡核苷酸有明显差异,两者可完全分离。在一定长度范围内非标记寡核苷酸随长度的增加,保留时间增长;相反,荧光标记寡核苷酸的长度增加,保留时间减短。荧光染料疏水性对其标记的寡核苷酸在反相柱中的保留有较大影响,荧光染料疏水性越强,其标记寡核苷酸保留时间越长。但疏水性的影响程度随标记寡核苷酸长度增加而逐渐变小。
- 黎朋王晶高运华武利庆盛灵慧傅博强
- 关键词：荧光染料反相离子对色谱
- 转基因植物Real-time PCR方法检出限和定量限的研究
- 2012年
- 目前Real-timePCR(Rt-PCR)方法在转基因植物定量检测中应用最为广泛。有关该方法的检出限和定量限的计算并没有达成统一。本文采用统计模型对三种转基因植物进行实时荧光定量PCR方法检出限和定量限的研究。实验结果表明:转基因玉米NK603检出限5拷贝,定量限14拷贝;转基因棉花Mon15985检出限5拷贝,定量限12拷贝;转基因油菜Oxy235检出限4拷贝,定量限9拷贝。是利用统计学方法对转基因植物荧光定量PCR方法检出限和定量限研究的一个积极尝试,可用于其他转基因植物检测中检出限和定量限的确定。
- 隋志伟王晶李亮谢田法
- 关键词：转基因植物检出限
