江苏省自然科学基金(BK2010161)
- 作品数：7 被引量：20H指数：3
- 相关作者：华东茆勇吴玉玉游庆军孙静更多>>
- 相关机构：苏州大学附属第四医院苏州大学苏州卫生职业技术学院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金无锡市医院管理中心医学科技发展基金更多>>
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- 小干扰RNA对结肠癌细胞株TLR4沉默效果的分析被引量：1
- 2012年
- 目的建立SYBR Green荧光定量聚合酶链反应（PCR）TLR4检测方法，构建标准曲线，并测定小干扰RNA（siRNA）沉默TLR4的效率。方法设计TLR4qPCR扩增引物，以SYBRGreenq PCR mastermix，95℃15min，95℃15S，60℃1min50个循环进行扩增，同时1：4稀释阳性对照，构建标准曲线。以65℃为起点，0．5℃为阶梯逐步增加至95℃，于每个温度点测定荧光强度，获得熔解曲线。Lipofectamine^TM2000介导不同浓度的siRNA（60、80、100nmol/L）转染SW480细胞6h后撤除。分别于24、48h后，使用qPCR检测TLR4mRNA水平表达变化。结果（1）SYBRGreen定量检测TLR4扩增曲线呈典型s型动力学曲线，扩增效率为100．9％，熔解曲线成单峰，熔解温度为81．5℃。（2）siRNA在24h、80nmol/L时，TLR4Ct值为27．72，较未干扰组（25．96）明显增加。（3）琼脂糖凝胶电泳显示转染组（24h、80nmoWL）在PCR扩增28个循环时不能被检出，而阳性对照则扩增条带清晰。结论（1）qPCR检测TLR4方法稳定，结果可靠。（2）siRNA浓度80nmol/L，可对肠癌SW480细胞的TLR424h时的表达水平明显抑制。
- 张燕江波张婷茆勇高翔华东
- 关键词：肠癌SIRNATOLL样受体4SW480细胞株
- 人乳腺癌B7-H3分子的高表达及其抑制T淋巴细胞活化增殖作用的机制被引量：3
- 2010年
- 目的探讨乳腺癌组织及细胞中高表达协同刺激分子B7-H3对T淋巴细胞作用的机制。方法 RT-PCR及流式细胞仪方法分析乳腺癌组织及细胞中B7-H3基因的高表达,以PGPU6/GFP/Neo质粒为载体,构建shRNA重组体,采用脂质体法转染乳腺癌细胞株MCF-7,采用免疫荧光标记和流式细胞术分析在MCF-7细胞上的表达。继而,利用CCK8法和酶联免疫吸附测定法(ELISA)分析B7-H3基因干扰细胞株对T细胞体外增殖和细胞因子的分泌。结果乳腺癌组织和细胞中高表达B7-H3分子,成功通过RNAi技术构建低表达B7-H3基因乳腺癌细胞株。体外生物学功能分析表明,与转染空载体的MCF-7/mock细胞相比,B7-H3表达干扰细胞能有效增强T细胞增殖以及对IFN-γ的分泌。结论乳腺癌中高表达协同刺激分子B7-H3能有效逃避T淋巴细胞对其的作用和杀伤。
- 浦勇吴玉玉茆勇华东
- 关键词：B7-H3乳腺癌T细胞
- 唑来膦酸诱导结肠癌HCT116细胞株凋亡分子的研究被引量：2
- 2013年
- 目的探讨唑来膦酸诱导结肠癌HCTll6细胞凋亡的线粒体途径。方法分别采用浓度25μol／L和50μmol／L的唑来膦酸孵育HCTll6细胞48h，流式细胞仪分析凋亡细胞比例；将标志线粒体膜电位的染料JC-1与唑来膦酸作用24、48、72h的HCTll6细胞避光孵育15ruin，荧光显微镜和流式细胞仪观察其红色荧光强度的变化；Westernblot分析唑来膦酸作用后48、72h细胞线粒体和胞质细胞色素C（CyclinC）含量的改变，细胞线粒体和细胞质CyclinC的改变。结果HCT116细胞和唑来膦酸25μmol／L和50μmol／L作用48h后，出现凋亡，凋亡比例分别为（11．6±0．5）％、（49．2±3．4）％（P〈0．01）；唑来膦酸浓度25pmlol／L时，24、48、72h后JC-1被激发出红色荧光的细胞比例为（96．49±2．10）％、（86．13±3．20）％、（74．23±5．30）％（P〈0．01）；Westernblot显示唑来膦酸作用下，CyelinC从线粒体内释放至细胞质。结论线粒体途径是唑来膦酸介导的结肠癌HCTl16细胞凋亡的信号途径之一。
- 高翔江波张婷邹士涛吴小红游庆军华东
- 关键词：HCT116唑来膦酸线粒体细胞色素C
- 奥曲肽联合奥沙利铂对人结肠癌细胞SW480的作用被引量：4
- 2012年
- 目的观察奥曲肽与奥沙利铂联合应用对人结肠癌细胞株SW480增殖和凋亡的影响，探讨其机制。方法利用不同浓度的奥曲肽（6．25、12．50、25．00、50．00、100．00μg／L）、奥沙利铂（12．5、25．0、50．0、100．0、200．0mg／L）及一定浓度的奥曲肽（25μg/L）联合奥沙利铂（12．5mg／L）作用于体外培养的人结肠癌细胞株SW480，采用噻唑蓝（MTT）比色法分析细胞增殖的抑制作用，流式细胞仪检测细胞凋亡率，逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）检测各组细胞bax、fas、B细胞淋巴瘤／白血病-2（bcl-2）基因mRNA的变化。结果奥曲肽、奥沙利铂对人结肠癌细胞株SW480增殖均有明显抑制作用（P〈0．01），且随着浓度的提高抑制率也随之提高。奥曲肽联合奥沙利铂对SW480细胞增殖的抑制率（74．5600±0．0072）％高于奥曲肽（44．7200±0．0216）％、奥沙利铂（34．5100±0．0053）％；联合组细胞凋亡率为（15．45±0．41）％，较奥曲肽（10．63±0．14）％、奥沙利铂（10．07±0．53）％上升，差异有统计学意义（P〈0．05）；联合组baxmRNA、faxmRNA表达显著高于对照组和单药组，bcl-2 mRNA表达显著低于对照组和单药组，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论奥曲肽和奥沙利铂联合应用具有明显的协同抗结肠癌细胞SW480增殖的作用，并能诱导细胞凋亡，其机制可能与上调bax、fas基因和下调bcl-2基因表达有关。
- 赵曙光华东费伯健茆勇蒋晖游庆军
- 关键词：奥曲肽奥沙利铂结肠肿瘤增殖脱噬作用
- 协同刺激分子B7-H3在非小细胞型肺癌中的表达及其临床意义被引量：5
- 2011年
- 目的:探讨非小细胞型肺癌组织中协同刺激分子B7-H3的表达及其与患者的病理参数、预后及CD3+T淋巴细胞的浸润程度的相关性。方法:收集2005年1月至2005年9月在苏州大学附属第四人民医院行手术切除术的非小细胞型肺癌患者组织标本87例,免疫组织化学的方法检测非小细胞型肺癌中协同刺激分子B7-H3的表达和CD3+T淋巴细胞的浸润程度。结果:协同刺激分子B7-H3在非小细胞型肺癌组织中高表达,该分子的表达与患者的年龄、性别、淋巴结的转移情况、肿瘤的大小、病理分型无相关性(P>0.05),但与患者的生存期呈负相关。且该分子在肺癌中的表达水平与浸润的T细胞呈负相关。结论:协同刺激分子B7-H3的表达在非小细胞型肺癌组织中诊断和预后判断中具有潜在的临床应用价值。
- 孙静茆勇顾文超王凤鸣吴玉玉吴小红华东张学光
- 关键词：非小细胞型肺癌B7-H3
- 顺铂联合唑来膦酸对肺癌A549细胞增殖的影响及其机制被引量：4
- 2011年
- 目的观察顺铂联合唑来膦酸对肺癌A-549细胞增殖的影响并探讨其作用机制。方法以噻唑蓝（MTT）比色法观察顺铂联合唑来膦酸对A549细胞增殖的影响，以Annexin-V／PI双染法检测细胞凋亡，逆转录一聚合酶链反应（RT—PcR）检测DNA损伤检查点蛋白调节因子1（MDCl）mRNA的表达。结果顺铂联合唑来膦酸对A549细胞增殖的抑制率（39．16±4．94）％高于顺铂（16．87±2．50）％、唑来膦酸（19．66±4．57）％；联合用药诱导A549细胞的凋亡率（32．30±0．50）％较顺铂（23．90±2．46）％、唑来膦酸（18．87±3．04）％上升；联合用药后A549细胞MDC1 mRNA的相对表达水平（0．134±0．037）较顺铂（0．356±0．033）、唑来膦酸（0．208±0.040）下降，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论顺铂、唑来膦酸可抑制肺癌A549细胞的增殖，诱导其凋亡；顺铂联合唑来膦酸抑制A549细胞的增殖具有协同作用；其协同作用可能与下调MDC1 mRNA表达有关。
- 茆勇马凤锦黄朝晖许林游庆军华东
- 关键词：肺肿瘤顺铂唑来膦酸A549细胞
- B7-H1分子在肿瘤微环境中的特异表达及对调节性T细胞的诱导促进作用被引量：1
- 2011年
- 目的通过分析人结直肠癌细胞表达B7-H1分子与肿瘤微环境中浸润的调节性T细胞的关系,探讨肿瘤性B7-H1信号参与肿瘤免疫逃逸的机制。方法采用免疫组化分析肠癌组织中B7-H1分子的表达及调节性T细胞的浸润情况,采用细胞培养和流式细胞术分析肿瘤性B7-H1信号对调节性T细胞分化的作用。结果 B7-H1异常高表达在肠癌组织中,正常组织不表达;肿瘤组织中B7-H1表达水平与调节性T细胞浸润数量成正相关(P<0.01),在TGFβ-的共同作用下,M435-B7-H1细胞可以显著促进Tregs的诱导。结论 B7-H1在肿瘤组织异常表达可通过诱导肿瘤微环境中调节性T细胞的分化参与肿瘤免疫逃逸。
- 华东孙静茆勇吴玉玉周桓朱明
- 关键词：调节性T细胞免疫逃逸
