国家自然科学基金(30870753)
- 作品数：18 被引量：82H指数：4
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- 芯片电泳快速检测乙型肝炎病毒YMDD变异
- 目的:利用芯片电泳高分辨力和分析快速的优点,建立一种基于芯片电泳的乙型肝炎病毒YMDD耐药性突变的检测方法。方法:利用序列特异性PCR联合芯片电泳检测乙型肝炎病毒YMDD变异。将YVDD、YIDD标准质粒分别按梯度稀释1...
- 王秋平
- 关键词：乙型肝炎病毒
- 微流控芯片精子分选法对精子常规参数及DNA完整性的影响被引量：8
- 2011年
- 目的:研究微流控芯片精子优选技术对精子常规参数及DNA完整性的影响。方法:自行设计制作微流控芯片,利用芯片处理技术和上游法对40例精液标本进行精子优选,通过计算机辅助精液分析系统及染色质扩散试验从精子常规参数及DNA完整性两个方面评价精液体外处理对精子的影响。结果:精液经微流控芯片法和上游法处理后,精子活力、精子正常形态率以及精子尾部肿胀率均有显著提高(P<0.01),精子的DNA损伤率明显降低(P<0.01)。微流控芯片法与上游法相比,优选后前者精子DNA损伤率明显低于后者[(8.4±5.8)%vs(16.4±9.2)%,P<0.01],而其他参数差异无显著性。结论:微流控芯片技术在精子优选中能获得精子DNA损伤程度小的高质量精子。
- 王维梁广铁彭娅娅刘大渔周小棉
- 关键词：微流控芯片上游法精子优选DNA完整性
- 基于DNA杂交CD式微流控芯片筛查苯丙酮尿症方法的建立被引量：1
- 2010年
- 目的 建立一种基于往复流的DNA杂交CD式微流控芯片技术,用于PKU基因突变快速筛查.方法 设计并加工一种具有12个微通道的CD式微流控芯片,芯片采用PDMS-玻璃双层结构,分别含有微通道和水凝胶结合探针区.探针区包括R243Q、V245V和空白对照.将PAH外显子7扩增产物加入芯片的进样孔,在离心力的作用下进入杂交微通道区.芯片在离心机中交替旋转或暂停从而进行杂交反应.杂交后将芯片置于荧光显微镜下观察结果并分析荧光信号.评价该方法检测特异性、检测限及重复性.对30例疑似PKU孕妇DNA标本进行检测,并将检测结果与测序比较.结果 利用基于往复流的DNA杂交CD式微流控芯片只需1.5μl样品,杂交时间为15 min,杂交检测限为0.7 ng/μl.对于PKU患者组与健康对照组,芯片检测结果与测序结果一致.挑选不同批次的5张芯片及每张芯片内5个微通道重复检测同一V245V突变PKU患者DNA标本,结果均为阳性,说明重复性较好.对30例疑似PKU孕妇标本进行检测,筛查出4例携带V245V突变,1例携带R243Q突变.结论 建立了一种基于往复流的DNA杂交CD式微流控芯片检测PKU基因突变的方法,该方法简便、快速、高灵敏,可以用于PKU产前筛查.
- 陈斌王秋平李春宇邹晓雷秀霞周小棉江剑辉刘大渔
- 关键词：苯丙酮尿症苯丙氨酸羟化酶核酸杂交
- 微流控芯片优选人类精子研究被引量：2
- 2009年
- 目的:探讨微流控芯片技术对精子的优选能力。方法:自行设计和制造微流控芯片,利用芯片对40例人精液标本进行精子分选实验,优化其分选条件,观察芯片处理前后精液各参数变化。同时对其中30例精液标本(A组:a+b级精子<20%组,n=15;B组:a+b级精子≥20%组,n=15)同时用芯片法和密度梯度离心法分选,比较2种方法分离前后精子活力、形态等参数的变化。结果:①优选后精子活力和精子正常形态率都可见显著提高(P<0.001;P<0.01)。②在精子活动力优选上A、B组芯片法均明显优于密度梯度离心法(P<0.01),尤其在A组这种优势更为明显(P<0.001)。而在精子形态优选上,2种方法无显著差异(P>0.05)。结论:微流控芯片技术在优选精子中具有较高的分选效率,且具有操作简单、分选时间短,对精子损伤小的特点,在辅助生殖技术中特别是体外受精中将有良好的应用前景。
- 王维梁广铁刘大渔周小棉
- 关键词：微流控芯片精子优选辅助生殖技术
- 3种免核酸提取PCR试剂盒检测乙型肝炎患者血清中HBV DNA的比较被引量：3
- 2011年
- 目的比较3种免核酸提取PCR试剂盒检测乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒(HBV)DNA的灵敏度和特异度,初步探讨其用于HBV DNA检测的临床价值。方法用3种免核酸提取PCR试剂盒分别检测30例慢性乙型肝炎患者及30例阴性参比血清标本中的HBV DNA,以荧光定量PCR结果为标准,比较3种试剂检测灵敏度和特异度。结果 3种试剂盒的HBV DNA阳性检出率分别为93.3%(28/30)、96.7%(29/30)、100%(30/30);3种试剂检测HBV阴性的特异度均为100%;3种试剂检测灵敏度A公司为103 IU/mL,B、C公司均为102 IU/mL。结论使用免核酸提取PCR试剂检测HBV快速、简便、高效,可用于临床HBV DNA快速检测。
- 王秋平陈斌张琼雷秀霞周小棉匡艳华
- 关键词：乙型肝炎HBV
- 微流控芯片在精子分选中的应用被引量：6
- 2009年
- 目的探索微流控芯片技术在精子优选中的应用价值。方法选取男性不育症患者70例，利用自制聚二甲基硅氧烷（PDMS）微流控芯片对其中40份精液标本进行分离，观察分离前后精子的活力、形态以及精子尾部肿胀率的变化。同时，采用密度梯度离心法对另外30份精液标本进行分选，获得的活动精子用芯片进行存活率试验，观察芯片材料PDMS对精子存活的影响。结果40份精液标本经芯片分选前后，精子活力从（29．4±8_1）％增高至（94．2±3．3）％，差异有统计学意义（t=24．58，P〈0．01）。正常形态精子百分率从（10．5±8．0）％增高至（30．0±5．5）％，差异有统计学意义（t=13．67，P〈0．01）。精子尾部肿胀率从（65．5±7．4）％提高到（96．0±1．8）％，差异有统计学意义（t=10．13，P〈0．01）。同时对30份精液标本应用夹角分别为30。与60。的芯片进行分离，发现夹角为30。的芯片对活动精子的分选回收率可达（40．44±5．5）％，其分离回收效率显著优于夹角为60。的芯片（28．5±8．O）％，．且差异有统计学意义（t=6．78，P〈0．001）。此外，30份精液标本中的活精子经PDMS处理前、后精子活力分别为（71±3．4）％和（704±2．5）％，差异无统计学意义（t=0．65，P〉0．05）。结论PDMS微流控芯片在精子分选中能获得质量好的精子，且不需要对精液进行离心处理，减少了试验过程对精子的损伤，存体外受精精子的优选中有很好的应用前景。
- 王维黎雏生彭娅娅黄婷婷周小棉
- 关键词：精子能动性芯片分析技术
- 芯片瞬间等速电泳-筛分电泳偶联分析精确计算DNA长度被引量：1
- 2010年
- 建立了基于相对迁移时间比例的方法,依据待侧DNA片段相对于上位及下位内标的迁移时间比例进行长度预测。实验结果显示,DNA片段的相对迁移时间比例在不同分析条件下具有良好的重现性。通过建立相对迁移时间比例相对于DNA片段长度的对应关系公式,实现了芯片瞬间等速电泳条件下DNA片段长度的准确预测。实际样品分析证实这种基于相对迁移时间比例的计算方法简单可靠,适合于芯片tITP-CGE分析中DNA长度的精确判定。
- 刘大渔梁广铁莫建坤周小棉
- 毛细管直接PCR方法快速鉴定NDM-1阳性细菌被引量：1
- 2011年
- 目的建立一种无需核酸提取预处理的毛细管PCR方法,用于新德里金属酰胺酶(NDM-1)阳性细菌的快速鉴定。方法考察在直接加入细菌培养液条件下,两种改良型DNA聚合酶Terra和MightyAmp DNA聚合酶对NDM-1编码基因的扩增效果。选用其中一种DNA聚合酶进行毛细管PCR,确定其对于NDM-1阳性细菌的检测限。结果当分别向25 μLPCR反应体系加入1、3、5、7μL细菌培养液条件下,两种DNA聚合酶均能有效扩增NDM-1编码基因序列,Terra DNA聚合酶效果较好。采用两步法毛细管PCR扩增NDM-1编码基因,3 μL反应体积条件下,40个循环反应在20 min内完成。结论应用改良型DNA聚合酶可以免去细菌核酸纯化步骤直接进行PCR。免核酸提取扩增结合毛细管PCR方法可以显著缩短核酸分析时间,适合于NDM-1阳性细菌的快速鉴定。
- 周小棉刘大渔黄华霖
- 关键词：聚合酶链反应基因
- 臭鼻克雷伯和鲍曼不动杆菌中检出NDM-1型金属β内酰胺酶基因被引量：31
- 2011年
- 目的调查对碳青霉烯类抗菌剂敏感性降低的肠杆菌和鲍曼不动杆菌中NDM-1型金属β内酰胺酶基因的存在情况。方法应用改良Hodge试验和EDTA协同试验对2007～2010年本院收集的对碳青霉烯类抗菌剂敏感性降低的肠杆菌和鲍曼不动杆菌进行碳青霉烯酶筛选。PCR法扩增NDM-1基因,并对PCR扩增阳性产物进行DNA测序分析。对NDM-1基因阳性菌株用PCR方法检测armA和rmtB16S rRNA甲基化酶基因,VIM、SPM、IMP和KPC碳青霉烯酶基因以及Ⅰ类整合子。Etests法进行药敏试验。结果 70株肠杆菌中10株Hodge Test和EDTA协同试验阳性,55株鲍曼不动杆菌中6株EDTA协同试验阳性。其中1株臭鼻克雷伯和3株鲍曼不动杆菌PCR扩增出NDM-1型金属β内酰胺酶基因目的片段,经测序比对为NDM-1型基因。其中1株臭鼻克雷伯和1株鲍曼不动杆菌检测出armA型16S rRNA甲基化酶基因,1株鲍曼不动杆菌检测出2000 bp左右的Ⅰ类整合子,未检出除NDM-1型外的其他碳青霉烯酶基因。NDM-1基因阳性菌除对替加环素、多黏菌素B敏感外,对其他检测的抗菌剂均耐药。结论臭鼻克雷伯和鲍曼不动杆菌中存在NDM-1型金属β内酰胺酶基因,有的携带armA型16S rRNA甲基化酶基因和Ⅰ类整合子,为该地区首次报道。
- 杨银梅叶惠芬张伟红陈惠玲周小棉
- 关键词：碳青霉烯酶革兰氏阴性菌
- 毛细管液滴中的乙型肝炎病毒DNA提取与扩增
- 2011年
- 目的利用毛细管液滴技术,发展一种集成DNA提取与扩增的乙型肝炎病毒分析方法。方法利用聚四氟乙烯毛细管的疏水特性,向毛细管中先后引入油相和水相溶液,在表面张力作用下形成油包水液滴。顺序向毛细管中引入含有不同试样的液滴,完成进样、DNA结合、洗涤、洗脱,扩增等过程。微液滴不仅有效解决了样品蒸发和扩散问题,同时在操作中起到微阀和微混合器微功能。结果利用上述毛细管液滴方法分析了乙型肝炎病毒的血清样品,通过优化DNA提取和扩增条件,毛细管液滴方法能在较短时间内高效纯化并扩增DNA。结论上述方法具有简便快速和低成本的优势,有望发展成一种有潜力的微全核酸分析系统。
- 王维刘大渔梁广铁雷秀霞周小棉
- 关键词：聚合酶链反应DNA提取液滴毛细管
