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猪细小病毒结构蛋白VP2与猪圆环病毒多肽P21的串联表达被引量：1: 2012年; 猪细小病毒与猪圆环病毒的混合感染较为普遍,给养猪业造成了较大的经济损失。从河北省部分地区病猪中分离猪细小病毒,通过PCR技术获得VP2蛋白的编码基因,采用PCR技术对猪圆环病毒的多肽P21基因进行扩增。分别将其连入Simple-T载体中,经酶切、PCR及序列测定法进行鉴定。测序正确后,将VP2基因与多肽P21基因插入到pET-32a(+)载体中构建原核表达载体。将此重组质粒转化到大肠杆菌BL21感受态细胞中,并用IPTG诱导,诱导产物用SDS-PAGE和Western-blot可检测到分子量约为85 ku的目的蛋白,结果显示VP2基因与P21基因可以在大肠杆菌中获联合表达。Western-blot试验证明,该蛋白可以与猪细小病毒免疫血清以及猪圆环病毒免疫血清产生特异性结合反应,具有良好的反应原性。; 孙彦欣左玉柱李建辉范京惠; 关键词：猪细小病毒猪圆环病毒 VP2基因 P21基因

不同药物对树突状细胞捕获猪细小病毒样颗粒的影响被引量：2: 2016年; 通过磁性筛选的方法从猪的脾脏分离树突状细胞(DC),经低渗和钾离子缺乏处理或与氯丙嗪、二甲基氨基吡咪、松胞素D、菲律平等药物分别在37℃下作用1h后,再与荧光素FITC标记的猪细小病毒样颗粒(FITC-PPVVLPs-E290)在37℃下作用4h,应用流式细胞仪检测在体外DC对PPV-VLPs的捕获情况。结果显示:钾离子缺乏及氯丙嗪对DC的捕获效率无影响,而经二甲基氨基吡咪、菲律平、及松胞素D处理的DC对PPV-VLPs-E290捕获效率明显下降。结果表明:DC对PPV-VLPs-E290的捕获与肌动蛋白及巨胞饮、小窝蛋白介导的方式有关,而与网格蛋白介导的方式无关。; 邸晶美左玉柱申小强顾文源刘宝京罗尚星代飞常嫣嫣孔园园范京惠; 关键词：病毒样颗粒树突状细胞

影响猪树突状细胞对猪细小病毒样颗粒提呈方式的因素被引量：1: 2017年; 旨在探明猪细小病毒样颗粒(PPV-VLPs)被猪脾树突状细胞(DC)捕获后,被提呈的方式。首先通过磁性筛选的方法从非免疫猪和免疫猪的脾分离CD172a+CD11R+DC及CD4-CD8+T细胞。DC分别与伯氨喹、放线菌酮、氯喹、乳胞素、布雷菲德菌素A及亮抑肽酶、胃酶抑素等作用1h后,再与细小病毒样颗粒PPV-VLPs-E290在37℃作用4h,应用CD8+T细胞的细胞毒性分析检测DC对PPV-VLPs-E290的提呈情况。乳酸脱氢酶(LDH)释放试验检测结果显示,伯氨喹及亮抑肽酶对DC提呈PPV-VLPs-E290的效率无明显影响,胃酶抑素部分抑制,而氯喹、放线菌酮、布雷菲德菌素A及乳胞素则可使DC提呈PPV-VLPs-E290的效率明显下降。结果表明,DC通过交叉提呈的方式提呈PPV-VLPs-E290。晚期内体的酸性环境以及蛋白酶的水解均参与了PPV-VLPs-E290的提呈过程。; 罗尚星申小强顾文源范京惠邸晶美刘宝京代飞孔园园常嫣嫣左玉柱; 关键词：病毒样颗粒树突状细胞

含T细胞表位的猪细小病毒VP2基因核酸疫苗的构建及其在小鼠中的免疫原性分析被引量：3: 2013年; 为研制猪细小病毒(PPV)主要保护性抗原VP2基因核酸疫苗,本研究将猪圆环病毒(PCV)编码T细胞表位P21多肽的序列连接于PPV VP2基因的5'端克隆于pcDNA3.1(+)中,构建重组表达质粒pcDNA-P21-VP2,并将其经磷酸钙介导转染HEK293T细胞中检测其表达情况。SDS-PAGE和western blot检测表明,P21-VP2重组蛋白获得了有效的表达,其分子量约为67 ku。将pcDNA-P21-VP2肌肉注射BALB/c小鼠后,采用ELISA方法检测其抗体,并采用MTT法检测小鼠免疫后脾脏淋巴细胞的增殖活性。试验结果表明,重组质粒能够有效诱导小鼠产生明显的抗体反应,并且对淋巴细胞的增殖反应有明显促进作用。该实验结果为研制有效的PPV核酸疫苗奠定了基础。; 孙彦欣左玉柱李建辉范京惠裴丽华杨震王晨枫; 关键词：核酸疫苗

不同内吞方式中的关键因子抗体对树突状细胞捕获猪细小病毒样颗粒的影响被引量：1: 2016年; 为了探明猪脾树突状细胞(DC)捕获猪细小病毒样颗粒的方式,通过磁性筛选的方法从猪的脾分离DC,DC与肌动蛋白抗体小窝蛋白caveolin-1抗体、猪IgG受体FcγRI(CD64)的抗体及DEC205抗体分别在37℃下作用1h后,再与荧光素FITC标记的猪细小病毒样颗粒(FITC-PPV-VLPs-E290)在37℃下作用1h,应用流式细胞仪及共聚焦显微镜检测体外DC对FITC-PPV-VLPs-E290的捕获情况。结果显示,经肌动蛋白抗体处理的DC几乎不能捕获FITC-PPV-VLPs-E290,经caveolin-1抗体处理的DC对PPV-VLPs-E290的捕获效率明显下降。而CD64及DEC205抗体则对DC的捕获效率无影响,表明DC对PPV-VLPs-E290的捕获依赖于肌动蛋白,与巨胞饮、小窝蛋白介导的内吞方式有关,而与吞噬作用及DEC205依赖的网格蛋白介导的方式无关。; 申小强左玉柱邸晶美顾文源范京惠; 关键词：病毒样颗粒树突状细胞

猪细小病毒样颗粒在树突状细胞中定位的研究被引量：4: 2014年; 为了探明猪细小病毒样颗粒(PPV-VLPs-E290)在树突状细胞(DC)中的定位情况,首先通过磁性筛选的方法从猪的脾脏分离DC,将病毒样颗粒用荧光素FITC标记后,体外与DC在37℃下作用,应用流式细胞仪检测在体外DC对PPV-VLPs的捕获情况。体内捕获情况则是将FITC标记的PPV-VLPs免疫仔猪后,分离DC进行检测。捕获PPV-VLPs的DC用皂苷透化后,分别与内吞体的表面标志分子Rab5、Rab7、Rab11、Lamp2单克隆抗体及PE标记的PPV-VP2抗体反应,通过共聚焦显微镜检测PPV-VLPs在DC中的定位情况。结果显示,DC在体内和体外均能有效捕获PPV-VLPs,PPV-VLPs可与晚期内吞体相关蛋白分子Lamp2及Rab7的单抗共定位,而与Rab5、Rab11不共定位,表明PPV-VLPs被DC捕获后,定位于DC的晚期内吞体。; 申小强王超左玉柱范慧霞范京惠顾文源邸晶美; 关键词：病毒样颗粒树突状细胞

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