广东省自然科学基金(05300929)
- 作品数：3 被引量：10H指数：2
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- 超声介导微泡空化增加鼠肺内皮细胞基因转染及其作用机制被引量：7
- 2010年
- 目的初步探讨超声介导声学微泡"空化效应"对鼠肺微血管内皮细胞基因转染的影响及其作用机制。方法 6孔板培养鼠肺微血管内皮细胞,加20μg报告基因质粒EGFP及10%白蛋白微泡(全氟显),连续波超声照射进行微泡"空化",观察不同照射时间相同机械指数(MI=1.0)(A组:30s;B组:60s;C组:90s;D组:120s;E组:180s)及不同MI相同照射时间(60s)(B1组:MI0.5;B2组:MI0.75;B3组:MI1.0;B4组:MI1.5;B5组:MI1.8)报告基因转染情况。以激光共聚焦观察细胞膜膜流动性、免疫荧光观察细胞微管蛋白及微丝蛋白。结果反应细胞膜流动性的荧光恢复强度分别为A组0.173±0.013、B组0.250±0.037、C组0.364±0.022、D组0.381±0.019、E组0.395±0.009(与A组相比,P<0.01);B1组0.171±0.017、B2组0.255±0.026、B3组0.378±0.007、B4组0.382±0.009、B5组0.397±0.008(与B1组相比,P<0.01)。反应细胞微管蛋白变化的荧光强度分别为A组159.15±4.79、B组188.23±6.20、C组205.80±4.48、D组208.99±8.34、E组213.70±5.09(与A组相比,P<0.01);B1组176.84±3.10、B2组187.57±14.52、B3组206.41±11.66、B4组220.12±13.39、B5组221.16±12.78(与B1组相比,P<0.01);各组微丝蛋白结构完整,无断裂及紊乱,荧光强度差别无统计学差异。结论超声介导微泡空化能增加基因转染率,对细胞骨架无明显损伤;当MI为1.0时,随照时延长细胞膜流动性及细胞骨架微管蛋白荧光强度增强;当照射时间为60s,随MI增高细胞膜流动性及细胞骨架微管蛋白荧光增强,但两种条件下均存在一定阈值;微丝蛋白荧光强度不随超声照射模式而改变。
- 周忠江叶海燕崔凯王玉筵
- 关键词：超声照射基因转染细胞骨架细胞膜流动性
- 超声介导微泡空化效应对鼠肺微血管内皮细胞膜流动性及细胞骨架的影响被引量：1
- 2009年
- 目的探讨超声介导微泡空化效应对鼠肺微血管内皮细胞膜流动性及细胞骨架的影响。方法6孔板培养鼠肺微血管内皮细胞，每孔加入20ug质粒EGFP及10％微泡后行超声辐照，辐照方式为连续波，探头频率2MHz，分别以不同照射时间分组：A组30S，B组60s，C组90S，D组120s，E组180s（机械指数均为1．0）；对B组再以不同机械指数分组：B1组0．75，B2组1．0，B3组1．3，B4组1．5，B5组1．8（照射时间均为60s）。以激光共聚焦显微镜观察细胞膜荧光恢复评价细胞膜流动性，以免疫荧光法观察细胞微管蛋白、微丝蛋白荧光强度变化。结果胞膜流动性荧光恢复指数分别为：A组0．173±0．013，B组0．250±0．037，C组0．364±0．022，D组0．381±0．019，E组0．395±0．009（B～E组与A组比较，均P〈0．01）；B1组0．171±0．017，B2组0．255±0．026，B3组0．378±0．007，B4组0．382±0．009、B5组0．397±0．008（B2～B5组与B1组比较，均P〈0．01）。微管蛋白荧光强度分别为：A组159．15±4．79，B组188．23±6．20，C组205．80±4．48，D组208．99±8．34，E组213．70±5．09（B～E组与A组比较，均P〈0．01）；BI组176．84±3．10，B2组187．57±14．52，B3组206．41±11．66，B4组220．12±13．39，B5组221．16±12．78（B2～B5组与B1组比较，均P〈0．01）；C、D、E组间两两比较及B3、B4、B5组间两两比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。不同辐照时间及MI时，微丝蛋白荧光强度差异无统计学意义。结论超声介导微泡空化在一定能量模式下可引起细胞膜流动性及微管蛋白荧光改变，此效应可能是超声及微泡促基因转染机制之一。
- 周忠江叶海燕王玉筵
- 关键词：细胞骨架微管蛋白
- 超声联合微泡介导基因转染对内皮细胞骨架的影响被引量：2
- 2008年
- 目的探讨白蛋白微泡在治疗性超声条件下对介导基因转染以及对细胞骨架的影响,同时探讨超声联合微泡介导基因转染的最佳声学参数。方法六孔板培养大鼠微血管内皮细胞,一组每孔加入eGFP质粒10μg,加或不加微泡,超声条件为连续波,频率2MHz,机械指数是0.50～1.80,照射时间是30～180s,24～48h后观察细胞转染情况。一组超声照射后免疫荧光染色细胞骨架,荧光显微镜观察并测定荧光强度。结果机械指数为0.50～1.00范围内,基因转染率与机械指数呈正相关(P<0.001),再增加机械指数基因转染率差别无统计学意义。超声照射时间30～90s范围内,基因转染率以及微管荧光强度改变与超声照射时间呈正相关(P<0.001),再延长照射时间基因转染率差别无统计学意义。同种条件下,微丝蛋白荧光强度改变无统计学意义(P>0.05)。结论超声联合微泡能够显著增加报告基因的转染率并且对细胞骨架无明显的损伤,微泡可以作为临床冠心病基因治疗的安全有效的载体。
- 王玉筵周忠江张翔吴赛珠
- 关键词：超声处理基因转染细胞骨架内皮细胞
