国家自然科学基金(30500220)
- 作品数：8 被引量：13H指数：2
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- Cx43和GFP双基因共表达重组腺病毒载体的构建和鉴定被引量：2
- 2007年
- 目的构建间隙连接蛋白43（Cx43）和绿色荧光蛋白（GFP）双基因共表达重组腺病毒载体。方法利用PCR方法从真核表达载体pcDNA3.0-Cx43扩增Cx43片断,利用DNA重组技术,将目的基因Cx43克隆至含有报告基因GFP的穿梭质粒pAdTrack-CMV,然后在BJ5183细胞中将重组穿梭质粒pAdTrack-Cx43与pAdeasy-l质粒进行同源重组,产生重组腺病毒载体pAd-Cx43-GFP,用PacⅠ单酶切鉴定重组载体;将pAd-Cx43-GFP转入293细胞中包装,荧光显微镜观察报告基因GFP的表达,Western blot方法检测293细胞中Cx43表达。结果（1）通过PCR方法从载体pcDNA3.0-Cx43扩增出单一条带,与Cx43片断大小相符;（2）重组穿梭质粒pAdTrack-Cx43经NotⅠ/XhoⅠ双酶切后,电泳可见2个大小约为9、1kb条带,证明pAdTrack-Cx43构建成功;（3）同源重组产物pAd-Cx43-GFP经PacⅠ酶切后,电泳可观察到2个大小约为31、4kb左右条带,与预期结果相符,提示同源重组成功;（4）荧光显微镜下观察可见转染pAd-Cx43-GFP后293细胞在培养1-2d即有绿色荧光表达;（5）利用WesternBlot法检测到转染pAd-Cx43-GFP后293细胞中Cx43的表达较未转染组增强。结论Ad-Cx43-GFP重组腺病毒载体构建成功。
- 司英健张曦陈幸华刘耀高蕾高力彭贤贵光丽霞王庆余
- 关键词：连接蛋白43同源重组重组腺病毒载体
- 全反式维甲酸对急性白血病骨髓基质细胞GJIC功能的影响
- 2007年
- 目的观察在全反式维甲酸(ATRA)作用下急性白血病骨髓基质细胞间连接蛋白43(Cx43)表达的变化及通讯功能的改变。方法体外培养急性白血病骨髓基质细胞,传代后加入ATRA(1×10^(-5)mol/L),采用细胞免疫化学及流式细胞术检测加药前后Cx43表达的变化;采用细胞划痕染料传输技术比较二者间隙连接细胞间通讯(GJIC)功能的差异。结果急性白血病骨髓基质细胞加药前后,细胞免疫化学方法检测Cx43表达的阳性率分别为47.2%±2.04%和54.5%±5.66%,流式细胞术检测Cx43的含量为38.75%±23.95%和49.5%±5.46%;加药后染料可传输至4～5列细胞,明显高于加药前(P<0.01)。结论加入ATRA后,急性白血病骨髓基质细胞间通讯功能较加药前明显增强。
- 刘耀张曦李忠俊司英健孔佩艳刘红陈幸华
- 关键词：急性白血病骨髓基质细胞连接蛋白43间隙连接细胞间通讯维甲酸
- 急性白血病化疗前后与正常人骨髓基质细胞间通讯的改变被引量：1
- 2007年
- 目的观察急性白血病化疗前后与正常人骨髓基质细胞间隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)表达的变化及通讯功能的改变。方法体外培养初发急性白血病化疗前及化疗后完全缓解的与正常人的骨髓基质细胞,采用免疫细胞化学方法观察三者之间Cx43表达的变化;采用细胞划痕染料传输技术比较三者之间间隙连接细胞间通讯(gap junction intercellular communication,GJIC)功能的差异。结果正常人、急性白血病化疗前及化疗后完全缓解的骨髓基质细胞上Cx43表达的阳性率分别为(88.0±3.5)%、(12.0±2.4)%和(52.0±3.1)%;基质细胞上Cx43蛋白的光密度值分别为(175.08±8.34)、(45.42±3.71)及(94.33±7.20);染料传输的细胞数分别为(9.20±0.35)、(1.84±0.33)和(4.07±0.53)。结论急性白血病骨髓基质细胞间通讯功能较正常人及化疗后完全缓解急性白血病骨髓基质细胞明显减弱。
- 刘耀张曦陈幸华李忠俊司英健高蕾
- 关键词：急性白血病CONNEXIN43GJIC化疗
- 急性淋巴细胞白血病骨髓基质细胞缝隙连接功能的研究被引量：6
- 2007年
- 目的:研究急性淋巴细胞白血病骨髓基质细胞缝隙连接的功能方法:体外培养正常(正常对照组)及急性淋巴细胞白血病(急淋组)原代骨髓基质细胞,采用细胞免疫组化法及计算机灰度检测观察两组之间Connexin 43表达的变化,采用细胞划痕染料传输技术比较两组之间缝隙连接细胞间通讯(GJIC)功能的差异。结果:急性淋巴细胞白血病骨髓基质细胞Connexin 43的表达较正常骨髓基质细胞明显减低,GJIC功能减弱。结论:急性淋巴细胞白血病骨髓基质细胞缝隙连接功能下降可能与白血病骨髓造血微环境功能异常有关。
- 刘耀张曦司英健高蕾高力陈幸华
- 关键词：CONNEXIN缝隙连接细胞间通讯急性淋巴细胞白血病骨髓基质细胞
- 激光共聚焦扫瞄显微镜检测急性白血病骨髓基质细胞Cx43表达被引量：1
- 2007年
- 目的观察急性白血病骨髓基质细胞上connexin43蛋白的表达以及GJIC功能。方法体外培养正常及急性白血病骨髓基质细胞,采用激光共聚焦扫瞄显微镜观察二者Cx43表达的变化;采用荧光漂白恢复技术比较二者之间GJIC功能的差异。结果正常及急性白血病骨髓基质细胞上Cx43表达的像素密度分别为(81.04±8.84)%和(34.10±17.91)%,两组间差异有统计学意义(P<0.01)。结论急性白血病骨髓基质细胞间通讯功能较正常骨髓基质细胞明显减弱。
- 刘耀张曦陈幸华司英健彭贤贵李忠俊曾东风高蕾高力王庆余
- 关键词：急性白血病骨髓基质细胞GJIC
- 人AB型血清培养体系体外培养扩增人脐血源基质细胞的试验研究
- 2009年
- 目的建立并优化AB型健康成人血清培养体系对人脐血源基质细胞的体外培养条件,观察基质细胞的生物学特性。方法人脐带血标本分离培养人脐血源基质细胞,经密度梯度分离后,在含有15%人AB型血清、bFGF(2,5～20.0μg/L)、10^(-6)mol/L氢化可的松的DMEM/F12培养液中进行原代培养和传代。倒置显微镜观察细胞生长情况,HE染色观察细胞形态特征,并采用常规HE染色和免疫细胞化学染色对培养细胞进行鉴定。结果成功获得人脐血源基质细胞并进行体外扩增培养和传代,培养细胞能形成纤维细胞样集落。优化的培养条件为:DMEM/F12培养基添加15%人AB型血清、10.0μg/LbFGF、10^(-6)mol/L氢化可的松。免疫细胞化学染色Vimentin+、CD34+、TdT-、CD45-、CK-,符合造血基质细胞特点。结论采用人AB型血清培养体系可成功培养扩增人脐血源基质细胞,为下一步临床应用研究打下坚实的基础。
- 龚奕陈幸华张曦彭贤贵邹仲敏
- 关键词：细胞培养技术血型抗原胎血
- 腺病毒介导Cx43基因修饰对急性白血病骨髓基质细胞GJIC功能的影响
- 2007年
- 目的观察急性白血病骨髓基质细胞(acute leukemia bone marrow stromal cells,ALBMSCs)经腺病毒介导的间隙连接蛋白43(Cx43)基因修饰后Cx43基因表达的变化以及对细胞间隙连接通讯(GJIC)功能的影响。方法用重组腺病毒Ad-Cx43-GFP转染ALBMSCs,荧光显微镜观察报告基因GFP的表达并计算转染效率,RT-PCR法、Westernblot法和免疫细胞化学法检测ABMSCs转染前后Cx43基因及蛋白表达情况,通过染料传输实验观察细胞间隙连接通讯功能的变化。结果荧光显微镜下观察可见ALBMSCs在转染Ad-Cx43-GFP后24h即有绿色荧光表达,计数绿色荧光细胞的百分率得出转染效率为(82.7±2.16)%;RT-PCR法、Westernblot法和免疫细胞化学法检测显示转染Ad-Cx43-GFP后ALBM-SCsCx43基因及蛋白表达较转染前增强(P<0·01);转染Ad-Cx43-GFP后ALBMSCs GJIC功能较转染前增强(P<0·01)。结论腺病毒介导Cx43基因修饰ALBMSCs后可上调其Cx43基因的表达并增强GJIC功能。
- 司英健张曦刘耀童燕敏陈幸华高力高蕾彭贤贵光丽霞王庆余
- 关键词：CX43GJIC重组腺病毒急性白血病骨髓基质细胞GFP
- 急性白血病化疗前后基质细胞上连接蛋白43表达及功能改变的研究被引量：3
- 2008年
- 目的:研究急性白血病骨髓基质细胞在化疗前后基质细胞上连接蛋白43(connexin43,Cx43)表达及由其介导的细胞通讯功能的变化。方法:体外培养初发急性白血病及其化疗后完全缓解的骨髓基质细胞,采用细胞免疫化学方法及计算机灰度检测观察二者之间Cx43表达的变化,采用细胞划痕染料传输技术比较二者之间通讯功能的差异。结果:化疗后达到完全缓解的急性白血病骨髓基质细胞的Cx43的表达增加,细胞间通讯功能较化疗前明显增强。结论:化疗后完全缓解的急性白血病骨髓基质细胞Cx43的表达及由其介导的细胞间通讯功能较化疗前明显增强。
- 刘耀张曦李忠俊司英健高蕾高力孔佩艳陈幸华
- 关键词：白血病急性骨髓基质细胞化疗CX43
