湖北省自然科学基金(2006ABC009)
- 作品数：8 被引量：15H指数：3
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- 放射线对肝癌细胞中端粒酶启动子活性的影响
- 2007年
- 目的:研究放射线对不同的肝癌细胞株中人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子活性的影响。方法:报告质粒phTERTp-Luc经脂质体METAFECTENE介导瞬时转染4种不同的肝癌细胞株后,给予2 Gyγ射线照射,观察照射组与非照射组中荧光素酶的表达。结果:瞬时转染4种不同的肝癌细胞株后,检测到照射可经hTERT启动子而诱导荧光素酶的表达增强,即hTERT启动子在2 Gy照射组中比在非照射组中具有更高的活性。结论:2Gyγ射线可以诱导肝癌细胞中hTERT启动子活性增强,有望用于增强肝癌细胞中hTERT启动子介导的靶向基因治疗,并为进一步深入研究奠定了基础。
- 孙文洁廖正凯周福祥张红艳黄成虎熊杰周云峰
- 关键词：启动子人端粒酶逆转录酶肝癌细胞放射线
- 建立人喉鳞癌裸鼠移植模型两种方法的比较被引量：1
- 2009年
- 目的:建立人喉鳞癌(Hep-2)裸鼠移植模型,比较两种建模方法成瘤效果。方法:将裸鼠随机分成两组,每组8只,两组分别于皮下接种人喉鳞癌细胞悬液和改良法皮下接种瘤块建立动物模型,观察接种成瘤率、肿块大小、生长速度;免疫组化检测人端粒酶逆转录酶(hTERT)蛋白表达。结果:接种3d后,改良瘤块接种法组裸鼠可见皮下隆起瘤体,接种1周后,皮下接种瘤细胞法和改良瘤块接种法成瘤率分别为75%、87.5%,比较第1周瘤体体积,P<0.05,但成瘤后肿瘤生长方面无明显的差别(比较第3周瘤体体积,P>0.05),两种方法成瘤后的瘤块hTERT蛋白表达阳性率相同。结论:采用改良瘤块接种法成瘤率高,生长速度快,且裸鼠皮下肿瘤较好的继承了人喉鳞癌细胞的重要生物学特点,该法能较好建立了人喉鳞癌裸鼠移植模型,为后续以端粒酶为靶点的体内抗肿瘤研究奠定良好基础。
- 王伟锋周福祥於海军黄成虎谢丛华周云峰
- 关键词：人喉鳞癌裸鼠移植瘤人端粒酶逆转录酶
- 辐射诱导启动子介导的腺病毒自杀基因联合照射的抗肿瘤效应被引量：1
- 2011年
- 目的检测利用肿瘤特异性辐射诱导嵌合启动子介导的腺病毒自杀基因系统联合放射线对肝癌细胞裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用。方法构建含有6个串联放射反应元件的人端粒酶反转录酶基因嵌合启动子调控辣根过氧化物酶表达的复制缺陷型腺病毒，同时建立人肝癌细胞MHCC97裸鼠皮下移植瘤模型，瘤内注射重组腺病毒，腹腔注射吲哚乙酸，同时给予叮射线照射，观察肿瘤生长、裸鼠生存状态，以及肿瘤组织和正常器官的组织病理学改变。结果分组处理后第31天，阴性对照病毒组、单纯病毒组、单纯照射组及联合组裸鼠皮下移植瘤相对体积分别为49．23±4．55、27．71±7．74、28．53±10．48和．11．58±3．23，组间差异具有统计学意义（F=16．288，P〈0．01），其中联合组的肿瘤抑制作用最强，生长抑制率为76．5％；与对照组相比，非对照组均能延长裸鼠中位生存期（r=18．307，P〈0．01），其中联合组差异最显著（13d与43d）；光镜下各治疗组肿瘤组织均出现坏死，其中联合组肿瘤坏死较多，而正常器官组织病理学检查未发现治疗相关损伤改变。对照组裸鼠肝脏显示出密集的肝癌转移灶，单纯治疗组仅有少数转移灶，而联合组肝脏未见明显异常。结论复制缺陷型腺病毒介导的靶向自杀基因治疗联合放疗能有效抑制肝癌皮下移植瘤生长，延长裸鼠生存期，为肝癌的治疗提供了新的途径，具有良好的应用前景。
- 孙文洁於海军熊杰徐禹廖正凯周福祥谢从华周云峰
- 关键词：腺病毒人端粒酶反转录酶
- 喉癌细胞hTERT启动子介导基因治疗研究被引量：4
- 2007年
- 目的研究喉癌细胞中端粒酶活性、端粒酶逆转录酶（hTERT）表达和hTERT启动子活性的关系，以及hTERT启动子介导喉癌基因治疗的可行性。方法将含hTERT启动子的质粒转染不同放射敏感性喉癌细胞（Hep2和Hep2R），通过报告基因评价启动子活性，RT-PCR检测hTERT mRNA表达，PCR—ELISA法检测端粒酶活性。构建质粒phTERTp-HRP，用RT-PCR和酶活性分析评价辣根过氧化物酶（HRP）表达，以克隆形成实验评价phTERTp-HRP／吲哚乙酸（IAA）对克隆形成率和放射敏感性的影响。结果Hep2R的端粒酶活性、hTERT mRNA表达水平和hTERT启动子活性分别是Hep2的1．37、1．43和1．81倍。hTERT启动子活性与hTERT mRNA表达水平和端粒酶活性之间显著正相关（P〈0．01）。转染phTERTp-HRP后，Hep2R细胞中HRP mRNA表达和HRP活性水平分别是Hep2细胞的2．1倍和1．8倍。0．5mmol／L IAA处理后，SERSF2分别为1．24（Hep2R）和1．20（Hep2），无IAA和有IAA组存活曲线参数α分别为0．020、0．090（Hep2R）和0．042、0．099（Hep2）。结论hTERT启动子可用于不同放射敏感性喉癌细胞的基因治疗。hTERTp—HRP／IAA基因治疗有望用于喉癌细胞的靶向杀伤和放射增敏。
- 廖正凯周云峰周福祥骆志国熊杰鲍洁谢丛华刘诗权
- 关键词：基因治疗HTERT启动子喉癌
- 辣根过氧化物酶/吲哚乙酸系统作为基因导向性酶前体药物疗法的研究被引量：4
- 2006年
- 目的:研究辣根过氧化物酶(HRP)/吲哚乙酸(IAA)系统作为基因导向性酶前体药物疗法(GDEPT)体外作用于人喉鳞癌Hep-2细胞株所产生的细胞毒性作用。方法:构建pcDNA3.1-HRP,将其瞬时转染Hep-2细胞后,Western blotting检测HRP蛋白的表达,MTT法检测加药IAA后对细胞增殖的影响。结果:pcDNA3.1-HRP构建成功,瞬时转染Hep-2细胞后Western blotting能检测到HRP蛋白的表达,MTT法显示HRP/IAA系统能较明显抑制细胞增殖。结论:HRP/IAA系统具备一定的作为基因导向性酶前体药物疗法治疗肿瘤的潜力。
- 熊杰廖正凯周福祥谢丛华鲍洁刘诗权周云峰
- 关键词：辣根过氧化物酶吲哚乙酸HEP-2细胞
- 射线联合嵌合启动子介导的自杀基因对肿瘤细胞的靶向杀伤作用被引量：4
- 2011年
- 目的探讨放射线联合新型嵌合启动子介导辣根过氧化物酶／吲哚乙酸（HRP／IAA）自杀基因系统特异高效的抗肿瘤作用。方法构建含有4个串联放射反应元件CArG、含或不含巨细胞病毒（CMV）启动子的人端粒酶逆转录酶嵌合启动子，筛选肿瘤特异性及放射诱导性强的嵌合启动子，下游连接自杀基因辣根过氧化物酶（HRP），检测放射线联合基因治疗对肿瘤细胞HeLa、A549和MHCC97增殖及凋亡的影响。结果人胚肺成纤维细胞MRC-5中C4-hTC嵌合启动子的活性（0．1±0．0）明显低于肿瘤细胞株HeLa、A549和MHCC97（0．6±0．0、1．1±0．1和1．0±0．1，P〈0．01），经过6Gy射线诱导后，这种差异更加显著（活性分别为0．2±0．1、1．7±0．2、2．3±0．2和2．3±0．1，P〈0．01）。在肿瘤细胞株HeLa、A549和MHCC97中，嵌合启动子C4-hTC-HRP携带的自杀基因系统SER值分别为2．64、2．75和2．82，显著高于单纯hTERT启动子。在肿瘤细胞中，除阴性对照质粒pGL3-contr01．Luc外，自杀基因与放射治疗相联合对肿瘤细胞的生长抑制明显高于单一治疗方法，而联合组中pC4-hTC．HRP／IAA系统与放射联合的生长抑制作用最显著，对HeLa、A549和MHCC97细胞的生长抑制率分别为67．3％、69．0％和64．6％。在肿瘤细胞中，除阴性对照质粒pGL3-control-Luc外，联合组诱导的早期凋亡率明显高于单一治疗方法组，其中pC4-hTC-HRP／IAA系统与放射联合诱导的凋亡率最高，HeLa、A549和MHCC97细胞凋亡率分别为39．6％、33．0％和33．2％。结论新型嵌合启动子C4-hTC具有良好的肿瘤特异性及放射诱导性，放射线联合基因治疗对肿瘤细胞具有特异高效的杀伤作用，在肿瘤的基因放疗中具有较强的应用潜力。
- 孙文洁熊杰王伟锋廖正凯周福祥周云峰
- 关键词：人端粒酶逆转录酶人巨细胞病毒吲哚乙酸肿瘤细胞系
- 人端粒酶逆转录酶启动子在裸鼠中增强人喉癌对基因放射治疗的敏感性被引量：1
- 2008年
- 目的探索人端粒酶逆转录酶启动子（hTERTp）介导自杀基因辣根过氧化酶（HRP）-吲哚乙酸（IAA）系统联合射线，对相同来源而放射敏感性不同的人喉癌移植瘤模型的治疗作用。方法建奇相同来源而放射敏感性不同的人喉癌（Hep-2和Hep-2R细胞）移植瘤模型，并分为联合治疗组（A组和AR组）、基因治疗组（B组和BR组）、单纯放射组（C组和CR组）和对照组（D组和DR组）。瘤内注射脂质体包裹的质粒phTERTp—HRP，腹腔内注射IAA并联合放疗30Gy，观察对移植瘤生长的抑制作用。应用原位末端转移酶标记技术（TUNEL）检测肿瘤细胞的凋亡情况；应用AP法检测瘤内HRP蛋白的表达。结果裸鼠移植瘤生长以联合治疗组最慢，以对照组最快。A组的肿瘤抑制率为54．8％，B组为10．0％，C组为31．9％，AR组为52．7％，BR组为24．8％，CR组为17．0％。A组和AR组可见大量肿瘤细胞坏死和凋亡，凋亡指数分别为16．6％±1．3％和17．6％±1．3％，高于其他组（P〈0．05）。B组的HRP蛋白表达率（21．9％±5．7％）低于BR组和（33．3％±8．9％），辐射诱导后，A组和AR组的HRP蛋白表达率分别增加2．1和1．6倍（P〈0．05）。结论在不同放射敏感性的喉癌移植瘤模型中，hTERTp能被射线诱导，并根据瘤内端粒酶活性增强HRP基因的表达。hTERTp—HRP—IAA系统通过诱导肿瘤细胞凋亡和引起细胞坏死，抑制裸鼠移植瘤生长，并与射线协同作用，起到放射增敏作用。
- 黄成虎廖正凯周福祥王伟锋谢丛华张红艳孙文洁周云峰
- 关键词：人端粒酶逆转录酶启动子喉肿瘤裸鼠
- 辣根过氧化物酶/吲哚乙酸自杀基因系统联合放射对Hep-2细胞的生长抑制作用被引量：2
- 2008年
- 目的:研究辣根过氧化物酶(HRP)/吲哚乙酸(IAA)自杀基因系统联合放射对人喉鳞癌Hep-2细胞株的生长抑制作用,观察HRP/IAA系统是否具有放射增敏性。方法:将构建成功的pcDNA3.1-HRP转染Hep-2细胞,RT-PCR及Western blotting分别在mRNA和蛋白质两个水平检测其表达;分别以0.5 mmol/L IAA、2 Gyγ-射线及两者联合作用于转染HRP后的Hep-2细胞,实验分为4组:A、对照组;B、加药组;C、放射组;D、加药及放射组。克隆形成实验观察HRP/IAA系统对细胞存活分数的影响,通过拟合生存曲线计算放射增敏比SERSF2;流式细胞仪分析各组细胞周期时相的变化;AnnexinV-FITC试剂盒比较各组细胞凋亡率。结果:转染pcDNA3.1-HRP的Hep-2细胞,RT-PCR和Western blotting能检测到HRP的表达;加药及放射组比单纯放射组细胞存活分数降低,SERSF2为1.302;与A组相比,B、C、D组G2/M期细胞比例升高,S期细胞比例降低,细胞凋亡率均显著增高(P<0.01);D组与B组相比,G2/M期细胞比例升高,S期细胞比例百分比降低,凋亡率增高(P<0.01);D组与C组比较,G0/G1期、G2/M期细胞比例升高(P<0.05),S期细胞比例百分比降低,凋亡率增高(P<0.01)。结论:HRP/IAA系统与放射联合应用能更有效地抑制Hep-2细胞生长、诱导其凋亡,HRP/IAA系统具有放射增敏性。
- 鲍洁廖正凯周福祥谢丛华熊杰刘诗权周云峰
- 关键词：自杀基因疗法放疗HEP-2细胞
