国家自然科学基金(30771813)
- 作品数：7 被引量：26H指数：4
- 相关作者：杨茂伟曹军军杨蕾郭晓东郭宝磊更多>>
- 相关机构：中国医科大学附属第一医院中国人民解放军95935部队沈阳市第九人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省自然科学基金辽宁省教育厅高等学校科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 缺锌对增殖期大鼠生长板软骨细胞凋亡的影响被引量：2
- 2009年
- 目的探讨锌缺乏对增殖期大鼠肋生长板软骨细胞(RGC)凋亡的影响,为阐明锌对骨骼生长发育影响的机制提供科学依据。方法体外培养Wistar大鼠RGC,用0,5,10及20μmol/L的锌螯合剂N-N-N′-N′-4(2-吡啶甲基)乙二胺(TPEN)分别处理细胞12h。采用流式双染试剂盒研究早期凋亡和晚期凋亡细胞百分比。以5μmol/LTPEN作用6,12,24h,利用免疫组化技术检测细胞中凋亡诱导因子(AIF)的定位表达,并利用Western blot和实时定量PCR(real-time PCR)检测其表达水平的变化。结果随着TPEN浓度的增高,RGC细胞凋亡率也逐渐增加,各组早期凋亡和晚期凋亡细胞百分比增大,AIF的表达水平也逐渐升高。免疫组化染色结果显示在TPEN作用6h后,AIF已从线粒体迁出,12h及24h后,大部分AIF已从线粒体迁至细胞核。结论锌缺乏可以诱导RGC细胞凋亡,在凋亡的过程中AIF发挥着关键作用。
- 初立伟杨茂伟于江王铜浩李亚伦
- 关键词：锌生长板软骨细胞凋亡凋亡诱导因子
- β-榄香烯通过抑制WNT信号通路促进MG-63细胞凋亡被引量：8
- 2011年
- β-榄香烯在作为化疗药使用时表现为毒副作用小,极少产生耐药性[1]。但是榄香烯治疗骨肉瘤尚未见报道。我们应用榄香烯作用于人骨肉瘤细胞系MG-63细胞,观察其对细胞增殖和凋亡的影响,并进一步研究Wnt/β-catenin信号传导通路在其中的作用。
- 梁单杨茂伟郭宝磊曹军军杨蕾郭晓东
- 关键词：Β-榄香烯人骨肉瘤细胞MG-63
- 不同浓度锌对成骨细胞MC3T3-E1骨保护素基因表达和细胞增殖的影响被引量：5
- 2011年
- 目的研究不同浓度锌对成骨细胞骨保护素基因表达和细胞增殖的影响。方法取小鼠的成骨细胞系MC3T3-E1培养并随机分为4组,A组加入10μmol/L硫酸锌;B组加入50μmol/L硫酸锌;C组加入200μmol/L硫酸锌;D组作为空白对照。培养48h后提取细胞RNA,RT-PCR分析成骨细胞骨保护素(OPG)mRNA表达,Elisa检测细胞培养上清中骨保护素表达水平。MTT法测定成骨细胞增殖率。结果 A组、B组、C组与D组细胞骨保护素基因表达比值分别为0.461±0.051、1.068±0.123、0.244±0.044、0.548±0.089,A组与D组差异不明显,B组高于D组(P<0.01),C组低于D组(P<0.01)。Elisa结果与RT-PCR相同。细胞增殖率之间差异有显著性意义,B组高于D组(P<0.01),C组低于D组(P<0.01)。结论 50μmol/L的锌促进成骨细胞骨保护素基因表达和细胞增殖,200μmol/L的锌则抑制成骨细胞骨保护素基因表达和细胞增殖。而10μmol/L的锌对成骨细胞骨保护素基因表达和细胞增殖的影响不大。
- 杨茂伟梁单郭宝磊曹军军杨蕾郭晓东高志达
- 关键词：成骨细胞锌骨保护素细胞增殖
- 氟通过胞外信号调控激酶通路对成骨细胞增殖作用的影响被引量：7
- 2012年
- 目的观察氟通过胞外信号调控激酶（ERK）通路对成骨细胞（MC3T3-E1）增殖作用的影响。方法取小鼠成骨细胞（MC3T3-E1）进行体外培养，加入不同浓度的氟（F-，0、200、400、600、1000、2000、4000、8000、10000μmol／L）培养24、48h，甲基噻唑蓝（MTr）法筛选出促进细胞增殖的最适浓度。根据最适浓度，将成骨细胞单纯随机分为3组：对照组（F-，0μmol／L）、染氟组（F-，400／μmol／L）、染氟抑制组（F-，400μmol／L＋PD91805，10μmmol／L）。培养48h后应用流式细胞术检测各组细胞周期；Westernbolt法和免疫荧光法检测各组磷酸化ERK（P-ERK）蛋白表达。结果400Ixmol／L的氟是促进成骨细胞增殖的最适合浓度。与对照组比较[（76．12±10．08）％、（2．064-0．31）％]，染氟组G0／G1期细胞数[（63．044-8．12）％]明显减少，S期细胞数[（9．13±2．08）％]明显增多（P均〈0．05）；而染氟抑制组G0／G1期细胞数[（92．11±9．01）％]明显增多（P〈0．05）。Westernblot结果表明，与对照组[（100．00±0．00）％]比较，染氟组成骨细胞P-ERK蛋白表达水平[（131．244-13．88）％]明显增高（P〈0．05），染氟抑制组P-ERK蛋白表达[（91．33±9．68）％]未见明显改变（P〉0．05）；免疫荧光法检测结果与Westernblot法相似。结论400txmol／L氟可以促进成骨细胞增殖，ERK通路在氟促进成骨细胞的增殖作用中起到了关键的作用。
- 郭晓东杨茂伟梁单郭宝磊曹军军杨蕾
- 关键词：成骨细胞氟细胞增殖细胞外信号调节MAP激酶类
- 地塞米松对骨髓间充质干细胞Runx2表达的影响被引量：4
- 2009年
- 目的观察地塞米松对骨髓间充质干细胞(BMSC)成脂分化的影响。方法采用离心贴壁法培养SD大鼠BMSC,分别加入0、10-9、10-8、10-7、10-6mol/L地塞米松,培养4、8、12、16d时碱性磷酸酶和SundanⅢ复染,21d时检测培养细胞的碱性磷酸酶活性和细胞增殖活力;透射电镜观察0和10-7mol/L地塞米松培养21d时细胞内的细胞器;实时定量RT-PCR检测不同浓度地塞米松培养7d及0和10-7mol/L地塞米松培养3、5、7d时细胞的Runx2 mRNA;Western blot测定0、10-7mol/L地塞米松培养7d时BMSC的Runx2蛋白。结果随地塞米松浓度增加、培养时间延长,BMSC碱性磷酸酶染色减弱,细胞SundanⅢ着色明显增加。10-6、10-7mol/L地塞米松培养后BMSC碱性磷酸磷酸酶活性和增殖活力降低明显,P均<0.05。10-7mol/L地塞米松培养后BMSC胞核缩小,染色质固缩,电子密度增强,胞质稀疏,细胞器萎缩。10-9～10-6mol/L地塞米松培养7d后BMSC的Runx2 mRNA表达减少88%～45%,Runx2蛋白表达同样减少。结论大剂量地塞米松下调BMSC的Runx2 mRNA和蛋白表达,促进其成脂分化。
- 林乐李旭杨茂伟范广宇
- 关键词：地塞米松骨髓间充质干细胞细胞分化骨坏死
- 锌对大鼠生长板软骨细胞ZnT-7表达的影响
- 2009年
- 目的研究锌对大鼠生长板软骨细胞锌转移体-7(ZnT-7)表达的影响及其规律。方法原代培养Wistar大鼠肋生长板软骨细胞,不同浓度的锌螯合剂TPEN分别处理培养生长板软骨细胞12h。免疫组化检测生长板软骨细胞特异性Ⅱ型胶原表达。免疫荧光技术对ZnT-7进行定位研究,实时RT-PCR和Western blot检测ZnT-7表达。结果Ⅱ型胶原免疫组化检测阳性。ZnT-7在生长板软骨细胞中定位于高尔基体上;Western blot和RT-PCR结果显示;5μmol/L(TPEN)组与对照组相比略有增高,而10μmol/L、20μmol/L组与对照组相比逐渐降低。结论ZnT-7定位于高尔基体上,同时在缺锌的条件下其对锌离子稳定有一定的代偿作用。
- 初立伟杨茂伟于江王铜浩李亚伦
- 关键词：锌生长板软骨细胞
- ZnT1及游离锌离子在小鼠骺板软骨细胞的定位研究
- 2009年
- 目的研究锌转运体-1(Zinc transporter 1,ZnT1)和游离锌离子在小鼠骺板软骨细胞的定位分布,探讨ZnT1影响骺板软骨细胞锌离子代谢从而参与骨骼生长的可能机制。方法应用浸入式金属自显影技术(AMG)观察锌离子在小鼠肋骨骺板内的定位分布;应用免疫组织化学SABC法检测ZnT1在小鼠骺板软骨细胞的表达。结果金属自显影技术显示游离锌离子在小鼠肋骨骺板肥大带、增殖带和静止带三层区域结构内有不同程度的表达,其中肥大带软骨细胞层锌离子含量最高;ZnT1免疫阳性反应产物主要定位于软骨细胞膜附近,在小鼠肋骨骺板三层区域结构内有不同程度的表达,从肥大带到静止带,软骨细胞膜上的ZnT1免疫反应逐渐减弱。结论小鼠肋骨骺板内存在大量的游离锌离子和ZnT1蛋白,提示ZnT1可能参与锌离子在软骨细胞的转运和代谢,在骨的形成和发育过程中发挥作用。
- 杨茂伟李亚伦初立伟王旭东叶放
- 关键词：游离锌离子锌转运体骺板小鼠
