广东省医学科学技术研究基金(A2010362)
- 作品数：5 被引量：5H指数：2
- 相关作者：吴志宏邱贵兴梁锦前周亚鹏赵赞栋更多>>
- 相关机构：北京协和医院南方医科大学南方医院中国协和医科大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 应用于双向电泳技术的不同软骨蛋白提取方案对比
- 2011年
- 目的探索可兼顾双向电泳凝胶图像质量和结果保真性的软骨蛋白提取方案。方法取股骨髁软骨(n=17)。分别用软骨组织直接提取总蛋白(软骨组织组)、软骨组织提取总蛋白后CPC处理(软骨+CPC组)、直接分离软骨细胞提取总蛋白(直接软骨细胞组)或培养软骨细胞提取总蛋白(培养软骨细胞组)同步进行2-DE,对比不同方案产生凝胶图像质量和结果保真性的差异。结果软骨组织组不能形成等电聚焦。软骨+CPC组可形成等电聚焦,但蛋白点数量偏少。直接软骨细胞组可获得与培养软骨细胞组媲美的高质量等电聚焦和凝胶图像,且在高分子量和偏碱区域分离出培养软骨细胞组缺如的部分蛋白点,质谱结果显示这些蛋白分别为VI型胶原、TGF-β2和annexin等骨关节炎病因学相关蛋白。结论从软骨组织直接提取软骨细胞用于2-DE的方案在解决等电聚焦难题的同时,还避免了细胞培养对实验结果保真性的影响,是软骨相关疾病样本的2-DE研究优化处理方案。
- 肖军尹若峰梁锦前史占军吴志宏邱贵兴
- 关键词：双向电泳等电聚焦软骨
- 膝关节骨关节炎软骨细胞差异表达蛋白的研究被引量：2
- 2010年
- 目的 探讨骨关节炎（OA）差异表达蛋白的病理作用.方法 分别从正常膝关节提取正常软骨（NAC,n=22）和从接受膝关节表面置换的OA患者提取OA软骨（OAC,n=17）.分离软骨细胞,提取总蛋白直接进行双向电泳分析.胶图导入Imagemaster 2-D platinum3.0软件筛选差异表达蛋白点,切胶消化并提交质谱分析.质谱生成的肽段指纹序列输入到MASCOT,依托NCBI蛋白数据库确立差异表达蛋白的身份.结果 NAC和OAC组双向电泳胶图分别显示约1000个蛋白点,其中35个NAC蛋白点和31个OAC蛋白点被确立为差异表达蛋白.通过质谱分析识别19个差异表达蛋白,包括6型胶原、与软骨细胞胶原代谢相关的酶、应激相关蛋白,以及功能未知蛋白.结论 差异表达蛋白的分离和识别提示了多方面的OA病理信息,为深入认识OA的分子病因学拓宽了视野.
- 肖军史占军吴志宏梁锦前赵赞栋周亚鹏兰天邱贵兴
- 关键词：骨关节炎软骨细胞差异表达蛋白
- RE-1元件辅助抑制因子对骨关节炎软骨细胞分化的调控作用被引量：2
- 2011年
- 目的观察RE-1元件辅助抑制因子（CoREST）在骨关节炎（OA）软骨细胞中的差异表达并探讨CoREST对OA软骨细胞分化的调控作用。方法取材接受膝关节表面置换的OA患者和正常对照组软骨并提取软骨细胞总蛋白，以Western blot对比CoREST在OA（n=8）和正常软骨（n=8）细胞中表达水平的差异。培养正常原代软骨细胞，采用针对CoREST设计的敲除siRNACoREST的表达至OA相当水平。应用Realtime聚合酶链反应（PCR）技术监测敲除CoREST前后软骨细胞（n=6）表型基因（I型胶原、Ⅱ型胶原、aggrecan和X型胶原）表达水平的变化。结果CoREST表达水平较正常软骨细胞下降69．5％（P〈0．01）。将正常软骨细胞中的CoREST表达knock—down 64．8％后，软骨细胞终末分化表型基因X型胶原的表达水平升高40．0％（P〈0．05），而正常分化表型Ⅱ型胶原和aggrecan的基因表达水平分别降低71．4％（P〈0．01）和57．6％（P〈0．01）。结论CoREST在OA软骨细胞中表达下降，诱发软骨细胞表型基因表达变化，提示CoREST参与了OA软骨细胞分化的调控。
- 肖军吴志宏史占军金健赵赞栋周亚鹏兰天邱贵兴
- 关键词：骨关节炎软骨细胞分化表型
- CoREST基因在骨关节炎软骨组织中的表达、分布和意义被引量：1
- 2011年
- 目的:观察RE-1元件辅助沉默因子(CoREST)基因在正常和骨关节炎(OA)膝关节软骨组织中的表达和分布,分析CoREST基因表达下调对OA的病理意义。方法:取材膝关节正常(n=10)和OA(n=12)软骨组织,提取软骨细胞并包埋制备切片,应用real-time PCR技术对比CoREST基因在正常和OA软骨细胞中表达水平的总体差异,应用原位杂交技术观察CoREST基因在正常/OA软骨表、中、深各层组织中的表达和分布的特点。结果:CoREST基因在OA软骨细胞中的表达水平显著降低64.6%(P<0.01)。CoREST基因广泛表达于正常软骨组织的表层、中层和深层,以中层表达最为显著,其次为深层和表层。在OA软骨组织中,CoREST基因在浅层细胞簇部分细胞中表达水平升高,在深层潮线状细胞柱中表达水平普遍降低。结论:CoREST基因在正常和OA软骨组织细胞中的差异表达和分布与文献报道的X型胶原基因的组织学表达一致。结合前期研究成果,我们认为CoR-EST的生物功能可能与OA软骨细胞的终末分化相关。
- 肖军赵赞栋史占军梁锦前吴志宏邱贵兴
- 关键词：骨关节炎软骨细胞原位杂交
- 膜蛋白双向电泳技术在软骨细胞相关研究中的应用
- 2010年
- 目的探索应用双向电泳技术研究人类关节软骨细胞膜蛋白蛋白组学的可行性及膜蛋白双向电泳与总蛋白电泳技术的互补性。方法取材膝关节软骨组织,应用II型胶原酶/透明质酸酶DMEM溶液消化法分离软骨细胞,分别提取总蛋白和膜蛋白,进行双向电泳研究,观察膜蛋白所生成2-DE电泳凝胶的图像质量,并对比膜蛋白与总蛋白双向电泳凝胶图像之间蛋白点分布的差异和互补性。结果膜蛋白双向电泳可获得较高质量的电泳图像,每张胶图可识别412.3±13.5个蛋白点,蛋白点主要分布在等电点PH5.0-9.0的偏碱性区域。总蛋白双向电泳凝胶可识别564.3±5.9个蛋白点,蛋白点主要分布在等电点PH3.0-7.0的偏酸性区域。结论软骨细胞膜蛋白双向电泳可产生高质量的凝胶图像,其分离蛋白质的等电点分布区域与总蛋白双向电泳技术形成互补,可为软骨细胞为样本的相关疾病病因学研究提供更多的信息。
- 肖军史占军赵赞栋周亚鹏兰天
- 关键词：膜蛋白双向电泳等电点软骨细胞
