家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金
- 作品数：238 被引量：718H指数：11
- 相关作者：乔军才学鹏孟庆玲朱兴全宋铭忻更多>>
- 相关机构：中国农业科学院兰州兽医研究所石河子大学华南农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金公益性行业(农业)科研专项内蒙古自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 兔出血症病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立被引量：7
- 2013年
- 为建立一种敏感、特异、简便的兔出血症病毒(RHDV)检测方法,根据GenBank中公布的RHDV全基因组序列保守区域设计了2对引物,筛选了其中1对建立并优化了PCR条件,扩增产物为331bp,并基于此建立了SYBR GreenⅠ荧光染料real-time RT-PCR检测方法。通过敏感性、特异性、标准曲线建立等表明,该方法可检出101以上拷贝数的模板,只在RHDV有特异性扩增,标准曲线线性相关性好。实际应用结果显示,该方法对疑似RHDV病料检测的阳性率为74.8%,而普通RT-PCR方法检测的阳性率为65.5%。该方法的建立为开展该病的诊断、疫苗制备质控等提供了有效的技术保障。
- 肖跃强谢金文徐二丹沈志强丁壮
- 关键词：兔出血症病毒实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应
- 四种隐孢子虫半胱氨酸蛋白酶Cryptopain-1基因的克隆和序列分析被引量：1
- 2014年
- 为克隆不同种隐孢子虫(Cryptosporidium spp.)的半胱氨酸蛋白酶Cryptopain-1基因,分析其核苷酸与编码氨基酸序列的变异情况,根据GenBank上公布的微小隐孢子虫(C.parvum)Cryptopain-1基因序列设计合成引物,用PCR技术从不同种隐孢子虫基因组DNA中扩增Cryptopain-1基因,并将其克隆至pZeroBack/blunt载体,阳性克隆经PCR鉴定正确后测序,与微小隐孢子虫Cryptopain-1基因进行序列同源性比对,并进行系统进化分析。结果显示,本研究成功从泰泽隐孢子虫(C.tyzzeri)、火鸡隐孢子虫(C.meleagridis)、兔隐孢子虫(C.cuniculus)基因组DNA中扩增出Cryptopain-1基因。与微小隐孢子虫Cryptopain-1基因比较,泰泽隐孢子虫、火鸡隐孢子虫、兔隐孢子虫Cryptopain-1基因核苷酸序列相似性分别为98.67%、94.53%、98.34%,演绎的氨基酸序列相似性分别为99.00%、96.51%、99.00%。研究结果为利用Cryptopain-1基因进行隐孢子虫的代谢、致病机理等研究奠定了基础。
- 王晓娟米荣升周鹏黄燕王向佩杨晓娇石凯刘宇轩雷晓思陈兆国赵权
- 关键词：隐孢子虫克隆
- 基于微小隐孢子虫重组CP15/60蛋白的间接ELISA检测方法的建立及上海市猪隐孢子虫感染情况调查被引量：2
- 2015年
- 为建立敏感、特异的猪隐孢子虫感染血清学检测方法,了解上海市猪隐孢子虫感染情况,以纯化的重组CP15/60(r CP15/60)为诊断抗原,建立了检测隐孢子虫感染的间接ELISA方法,并对上海市猪隐孢子虫感染情况进行血清学调查。结果显示,与Nested PCR方法检测结果相比,本研究建立的r CP15/60-ELISA方法的阴阳性符合率为83.3%,敏感性为100%,特异性为80%;重复性试验的变异系数在12.5%之内;对341份猪田间血清进行检测,阳性为194份,占56.89%,表明该方法可用于实验室初步诊断和现场猪隐孢子虫病的流行病学调查。
- 刘宇轩米荣升黄燕于慧珠胡盼詹婷婷周金林陈兆国
- 关键词：微小隐孢子虫间接ELISA
- 捕食动物线虫性真菌相关研究进展
- 2021年
- 畜禽线虫病是由线形动物门中多种线虫引起的一类寄生虫病,给养殖业带来了严重的经济损失。长久以来,采用化学药物驱虫进行防治产生的耐药性、环境污染及动物源性食品药物残留等问题愈发严重,迫切需要寻找能替代化学药物驱虫的防治手段。利用捕食线虫性真菌进行动物寄生性线虫的生物防治对建立可持续发展战略和无公害农业具有重要意义。通过综述捕食线虫性真菌的捕食活性、捕食器形成、真菌基因组学及相关捕食机制到应用模式的研究现状,以期为捕食线虫性真菌的后续深入研究和应用提供参考。
- 侯斌母晓佳牛杰康尚世杰樊雅茹丁玉林王瑞杜山
- 关键词：捕食线虫性真菌
- 病原体溯源技术研究进展及在寄生虫上的应用被引量：1
- 2011年
- 病原体是导致人和动植物感染疾病的根源,带来一系列的安全隐患。病原体溯源研究对于基因型鉴定、分类地位准确化、流行病学调查及疾病的防控具有重大意义。近年来,分子生物学技术已被广泛用于病原溯源研究。作者主要对病原体溯源技术的最新研究进展及其在寄生虫上的应用作一综述。
- 陈芬林瑞庆朱兴全李娟
- 关键词：病原体基因分型寄生虫
- 新疆塔城地区绵羊蠕形蚤形态学观察与分类鉴定被引量：2
- 2012年
- 为有效防控新疆塔城地区流行的一种不明绵羊外寄生虫病,本实验通过眼观、解剖镜、数码显微镜观察对该寄生虫进行形态学分类和鉴定研究。结果表明,蚤体大小6 mm～8 mm,饱血后12 mm～15 mm,头胸部占整个体长的10%左右。头胸黑褐色,腹部白色略灰;体表有稀少的鬃毛,无额突,下唇须节数17～22节。3对足,后足胫节依次着生1 2 2 2根粗鬃,中间腹节背板气门稍大于眼。从形态学鉴定该外寄生虫属于蠕形蚤科(Vermipsyllidae)长喙蚤属(Dorcadia)的羊长喙蚤(D.ioffi),但与典型的羊长喙蚤存在形态学差异,该长喙蚤是否为新的亚种或变种尚待进一步研究。
- 赵春光张金生孟庆玲乔军石国界才学鹏陈创夫
- 关键词：蠕形蚤形态学观察绵羊
- 猪囊尾蚴API基因原核表达条件的优化被引量：1
- 2017年
- 【目的】获得猪囊尾蚴凋亡蛋白酶抑制剂(API)基因在大肠杆菌中的最佳表达条件,为API功能研究奠定基础。【方法】以表达载体pEGX-4T-1、pET-30a及猪囊尾蚴API基因的原核表达载体pEGX-4T-1/API-Flag、pET-30a/API为材料,对影响API蛋白表达的载体(pEGX-4T-1、pET-30a)、温度(25,30,37℃)、诱导时间(2,4,6,8h)、IPTG终浓度(0.2,0.4,0.6,0.8,1.0mmol/L)和卡那霉素终浓度(100,200,300,400mmol/L)等条件进行优化,筛选重组蛋白最佳的表达条件。对在最佳条件下获取的目的蛋白进行超声处理,4℃、10 000r/min离心分别收集上清液和沉淀,对目的蛋白进行可溶性分析;SDS-PAGE后,将目的蛋白条带转印至硝酸纤维素膜上,与抗His标签抗体共孵育,检测目的蛋白的反应原性。【结果】当选择pET系列载体(pET-30a)时,API表达量高于其在pGEX系列(pGEX-4T-1)中的表达量。API融合蛋白最佳表达条件为:在含200mmol/L卡那霉素的LB培养基上于37℃培养3h后,加入终浓度为0.4mmol/L的IPTG,再于30℃诱导培养6h。SDS-PAGE结果表明,pET-30a/API融合蛋白分子质量约为53ku,与预期蛋白分子质量一致。Western-blot检测结果显示,重组蛋白pET-30a/API能够识别特异性抗体,显示获得了大量表达正确的目的蛋白。【结论】确定了API基因的最佳表达条件,获得了较大表达量的API融合蛋白。
- 苏文强胡鑫宇王秋霞欧长波郭爱疆李辉骆学农余燕张艳红姜金庆刘兴友马金友王松才学鹏
- 关键词：猪囊尾蚴原核表达
- 扩展莫尼茨绦虫膜联蛋白B3基因组织表达差异分析被引量：3
- 2011年
- 【目的】探索膜联蛋白B3(Annexins B3)基因在扩展莫尼茨绦虫生长发育中的作用。【方法】研究以beta-Tubulin基因作为内参基因,采用SYBR Green real-time RT-PCR方法检测该基因在扩展莫尼茨绦虫四个不同发育阶段即头节、幼节、成节、孕节中的表达差异。【结果】标准曲线分析显示,Annexins B3和beta-Tubulin基因的Ct值与阳性质粒的浓度均呈良好的线性关系,相关系数均大于0.991,溶解曲线分析表明,产物为特异的单峰,具有较高的特异性。【结论】膜联蛋白B3基因在虫体个发育阶段中的表达丰度存在差异,从高到低依次为孕节、头节、成节、幼节。
- 王正荣赵文娟王新华薄新文
- 关键词：ANNEXINS扩展莫尼茨绦虫RT-PCR
- 旋毛虫HSP70基因的原核表达及其免疫原性
- 利用RT-PCR方法扩增旋毛虫HSP70基因,将其扩增产物克隆到pEASY-Blunt Simple载体中,经限制性酶切后与pET-28a(+)载体连接,进一步转化至感受态细胞Transetta(DE3)中,用IPTG诱...
- 宋铭忻路义鑫韩彩霞李巍李晓云徐佳王泽
- 细粒棘球蚴GST-mu2基因的克隆、表达及重组蛋白反应原性研究
- 2018年
- 为了研究细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,Eg)谷胱甘肽S-转移酶mu 2(GST-mu 2)蛋白的反应原性,根据GenBank中Eg GST-mu2基因cDNA序列设计特异性引物,以Eg头节总RNA为模板,进行RT-PCR扩增,将PCR产物克隆到pMD19-T载体,测序验证后,将GST-mu2基因亚克隆至表达载体pET-28a中,构建pET-GST-mu2原核表达载体,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,用IPTG进行诱导表达,并对表达蛋白进行反应原性分析。结果表明,GST-mu2cDNA全长660个核苷酸,编码219个氨基酸,该多肽含有2个N端酰基化位点,2个PKC磷酸化位点,3个CKⅡ磷酸化位点,1个TYR磷酸化位点,抗原表位区集中在28~70、147~219位;SDS-PAGE可以检测到32kDa的蛋白特异性条带;Western blot分析显示,表达的pET-GST-mu2重组蛋白能与Eg阳性血清发生特异性反应,具有较强的反应原性,为进一步利用GST-mu2蛋白作为Eg感染诊断的候选抗原奠定了基础。
- 陈英乔军孟庆玲钟文强刘田莉贡莎莎才学鹏
- 关键词：细粒棘球蚴克隆反应原性
