“十五”重点攻关项目(GB05B501)
- 作品数：5 被引量：20H指数：3
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- 产肠毒素大肠杆菌F5菌毛基因的克隆与表达被引量：2
- 2008年
- 应用PCR方法从产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)中扩增出不含信号肽序列的F5菌毛抗原基因片段,克隆测序后将其连接到大肠杆菌表达载体pET-30a(+)中,转化工程菌BL21,经IPTG诱导表达。经SDS-PAGE和Western Blot分析,重组蛋白在BL21中得到表达并与F5菌毛单因子血清发生明显反应。
- 于迪付海兵丁琳师东方单安山
- 关键词：产肠毒素性大肠杆菌基因克隆蛋白表达
- 一株混合O血清型猪水肿病大肠杆菌的分离与鉴定被引量：5
- 2009年
- 从具有典型临床症状和病理剖检变化的病死猪肠系膜淋巴结中分离到的1株革兰阴性细菌,通过菌体形态观察,染色、生化试验、SLT-Ⅱe基因检测、O血清型鉴定、动物试验,其结果证明分离菌为O26、O139、O142混合血清型,产SLT-Ⅱe大肠埃希氏杆菌。SLT-Ⅱe基因序列与GenBank上发表的参考序列(序列号为AY368993)的同源性达100%。用粗提的毒素经腹腔注射小鼠后引起小鼠后肢麻痹、死亡和胃肠水肿。
- 师东方葛俊伟王明翠许亚卓李海滨单安山
- 关键词：猪水肿病大肠杆菌
- 志贺样毒素Ⅱ型变异体B亚基单克隆抗体的制备被引量：5
- 2009年
- 为建立针对仔猪水肿病SLT-Ⅱe毒素的检测方法,应用PCR技术克隆SLT-ⅡeB基因,并将其克隆到原核表达载体pET-30a进行表达。以纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,并利用淋巴细胞杂交瘤技术获得6株稳定分泌抗SLT-ⅡeB的单克隆抗体(McAb)细胞株,其抗体亚类包括IgM、IgA、IgG2b和IgG2a,而且轻链均为κ链。阻断ELISA结果显示,6株McAb均能特异性识别天然SLT-Ⅱe毒素。相加ELISA结果显示,3G7和4F3两株是针对不同抗原表位的McAb。
- 丁琳师东方付海兵于迪杨旭东单安山
- 关键词：仔猪水肿病单克隆抗体
- BALB/c鼠口服免疫猪水肿病大肠杆菌基因突变菌株的免疫效果被引量：2
- 2009年
- 为了研究猪水肿病(ED)大肠杆菌SLT-Ⅱe基因突变菌株作为口服疫苗的免疫效果,本实验用已构建的猪ED大肠杆菌SLT-Ⅱe基因突变菌株口服免疫BALB/c小鼠,检测其血清中的IgG抗体及粪便和肠黏液中的sIgA抗体水平,并进行淋巴细胞增殖检测及攻毒保护实验。结果表明该基因突变菌株具有良好的免疫性,能诱导小鼠体内产生IgG和sIgA抗体,并且能引起T淋巴细胞增殖反应。攻毒保护实验结果显示,口服免疫突变菌株能对小鼠提供良好的保护,保护率为75%(15/20)。本研究结果证明,该大肠杆菌基因突变菌株在小鼠体内能激发体液免疫和细胞免疫反应,可作为猪ED口服疫苗的候选菌株。
- 杨春柳许亚卓杨旭东刘文鑫师东方
- 关键词：猪水肿病口服免疫
- 猪水肿病大肠杆菌基因突变株的构建被引量：10
- 2007年
- 应用定点突变技术将野生型猪水肿病大肠杆菌（O139）主要毒力基因SLT—ⅡeA亚基中第167位谷氨酸和第170位精氨酸，分别突变为谷氨酰胺（E167Q）和亮氨酸（R170L）后，获得突变基因SLT—Ⅱe^＊。通过同源重组，将野生菌中的毒力基因SLT—Ⅱe替换为SLT．Ⅱe^＊，构建了一株毒力基因突变株（SLT-Ⅱe^＊）。实验结果显示，该突变菌株对Vero细胞的毒性是野生菌毒性的1／500.
- 付海兵丁琳杨春柳许亚卓师东方
- 关键词：猪水肿病大肠杆菌同源重组
