国家重点基础研究发展计划(2001CB510208)
- 作品数：17 被引量：69H指数：5
- 相关作者：丁彦青李雪华姚开泰李明李欣更多>>
- 相关机构：南方医科大学中国人民解放军第一军医大学武警医学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划天津市自然科学基金军队医药卫生科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- α2,6-唾液酸对结肠癌细胞同源凝集的影响
- 2006年
- 目的研究结肠癌细胞LS174T的α2,6-连接的唾液酸水平对肿瘤细胞同源黏附功能的影响。方法结肠癌细胞株LS174T转染α2,6-唾液酸转移酶(ST6Gal-I)cDNA或ST6Gal-I cDNA的部分反义序列以及空载体pcDNA3.1,以流式细胞仪检测转染细胞表面α2,6-连接唾液酸含量并进行克隆分选,比较顺义、反义以及空载体转染细胞的贴壁时间以及细胞-细胞之间的同源凝集效应。结果转染顺义的ST6Gal-I cDNA的细胞克隆显示ST6Gal-I mRNA的表达增强,SNA(一种特异性识别α2,6-连接唾液酸的植物凝集素)与细胞表面成分的结合增加;另一方面,细胞转染反义ST6Gal-I cDNA后其ST6Gal-I mRNA表达减少,SNA与细胞表面成分的结合力降低。与空载体转染相比,顺义转染的细胞克隆同源凝集作用降低,与细胞外成分的黏附作用增强,贴壁速度加快;反义转染细胞克隆同源凝集作用显著增强,与细胞外成分的黏附作用降低,传代后4 h的贴壁率仅为空载体的53.7%。结论本实验结果显示,肿瘤细胞α2,6-唾液酸转移酶(ST6Gal-I)的表达将有效影响细胞表面α2,6-连接的唾液酸水平并调节肿瘤细胞的黏附功能。
- 林绍强尹小菁李君武Wolfgang Kemmner丁彦青
- 关键词：结肠肿瘤
- 双向凝胶电泳-飞行时间质谱法分析促癌剂TPA诱导NIH3T3细胞表达变化的蛋白质
- 2004年
- [目的]寻找并鉴定在TPA处理后小鼠成纤维细胞NIH3T3中表达发生变化的蛋白质,为阐明TPA在诱导细胞发生生物学变化的作用机制提供线索。[方法]用TPA刺激NIH3T3细胞,分别提取实验组和对照组的NIH3T3细胞的总蛋白质,通过聚丙烯酰胺凝胶双向电泳,硝酸银染色后用软件分析寻找差异表达的蛋白质,并对差异蛋白质进行质谱鉴定。[结果]软件分析显示TPA处理后的NIH3T3细胞中有明显的差异表达蛋白质,质谱鉴定表明TPA处理后,表达上调的蛋白质有线粒体基质蛋白P1前体、微管蛋白beta-5链;TPA处理后明显表达下调的蛋白质有galectin-1、N-myc下游调节基因1蛋白。[结论]TPA刺激NIH3T3细胞后可以下调生长抑制基因的表达,同时上调与细胞增生相关基因的表达。因此,促癌剂TPA可能对NIH3T3细胞有促进增生的作用。
- 江培洲甘明沈新明黄华李欣姚开泰
- 关键词：TPA细胞增生促癌剂
- 联合免疫在高通量单克隆抗体制备中的初步评价与分析被引量：1
- 2007年
- 目的了解联合免疫在高通量单克隆抗体制备中的意义。方法对本室两年来105次联合免疫和单一抗原免疫的融合进行回顾性分析。结果联合免疫的融合率、建株率、最终成功率与单一抗原免疫均无明显差异,但所花费时间短、免疫成本及融合成本低。结论联合免疫方案短期内可使单克隆抗体的产出率显著提高,制备周期明显缩短,是一种可以选择的高通量制备单克隆抗体策略。
- 徐伟文徐洲稳郝文波姚小艳王穗海李明
- 关键词：联合免疫单克隆抗体高通量
- 肺癌血清蛋白质双向电泳图谱的建立
- 2014年
- 目的:建立肺癌血清蛋白质双向凝胶电泳(2-DE)图谱。方法:对肺癌血清蛋白质2-DE的IPG胶条选择、上样量、聚焦参数、样品缓冲液、沉淀处理等各方面进行调整、优化。结果:获得了稳定的肺癌血清蛋白质2-DE图谱。结论:已建立的肺癌血清蛋白质2-DE图谱,可以为进一步开展肺癌的血清蛋白质组学研究奠定基础。
- 李雪华刘燕青谷彦军刘静
- 关键词：肺癌血清蛋白质组学双向凝胶电泳
- 反义寡核苷酸对Daudi细胞α2,6唾液酸的下调作用研究
- 2004年
- 目的 研究反义寡核苷酸对Burkitt’s淋巴瘤Daudi细胞α2 ,6 唾液酸转移酶 (ST6GalI)的活性和细胞表面α2 ,6 唾液酸水平的下调作用。方法 以修饰后的ST6GalI的反义寡核苷酸处理Daudi细胞 ,以RT PCR检测Daudi细胞ST6GalImRNA的表达 ,荧光定量法测定ST6GalI的活性及以流式细胞仪检测细胞表面α2 ,6 唾液酸的含量。结果 和对照组比较 ,以反义寡核苷酸处理的Daudi细胞ST6GalImRNA的表达下调 ,ST6GalI酶活性下降 ,并导致细胞表面α2 ,6 唾液酸水平降低。结论 反义寡核苷酸可有效降低Daudi细胞表面α2 ,6 唾液酸化水平 ,内源性减少α2 ,6 唾液酸对Daudi细胞CD2
- 林绍强尹小菁李君武李扬秋丁彦青
- 关键词：反义寡核苷酸淋巴瘤CD22
- 抗凋亡蛋白Fortilin基因的克隆、表达与鉴定
- 2006年
- 目的在大肠杆菌中表达一种新近发现的抗凋亡蛋白Fortilin。方法用RT-PCR方法,从肺腺癌细胞中扩增出编码Fortilin蛋白的基因(GenBank中编码该蛋白的基因名为TPT1),克隆入pGEX-4T-1表达载体;重组质粒转入E.coliBL21(DE3),诱导表达Fortilin蛋白,并对表达产物进行免疫印迹鉴定。结果经双酶切及核酸序列分析鉴定,重组质粒pGEX-4T-1/TPT1成功构建,诱导后能高效表达可溶性Fortilin融合蛋白,SDS-PAGE及Western-blot验证该蛋白,表达的融合蛋白分子量为45000,与预期理论值相符。结论Fortilin蛋白在大肠杆菌中以融合蛋白形式进行表达,可提高其在宿主细胞中的稳定性和可溶性,且在大肠杆菌中获得高效表达,获得了充足的活性蛋白,这为进一步了解该蛋白的生物学功能,研究其抗凋亡机制奠定了基础。
- 吴芬芳宁云山吴英松王穗海董文其李明
- 关键词：克隆
- 高低转移人大肠癌细胞系基因表达谱差异被引量：6
- 2004年
- 目的用自制肿瘤转移相关基因cDNA微阵列研究人大肠癌高转移细胞系Lovo、SW620及低转移细胞系SW480、LS174T的基因表达谱差异,筛选与大肠癌转移相关的特异基因。方法分别提取4种大肠癌细胞系及对照的正常大肠上皮组织的mRNA,逆转录成cDNA探针,经cy3和cy5标记后分别与含有399个肿瘤转移相关基因的微阵列杂交,用专用软件分析杂交信号强度。结果高转移细胞系与低转移细胞系的基因表达谱有显著差异,其中有104个基因的表达值有意义,包括上调基因44个、下调基因60个。结论大肠癌转移是由其发生过程中多个基因表达的复杂变化决定的,高转移细胞系与低转移细胞系比较存在差异的基因可能与高转移特性有关。
- 翁德胜丁彦青孙青
- 关键词：大肠癌基因表达谱肿瘤转移CDNA微阵列
- 利用全基因组寡核苷酸筛选大肠癌差异表达基因被引量：8
- 2005年
- 目的筛查人大肠癌组织与相应正常大肠粘膜差异表达基因。方法应用美国AffymetrixHG-U133寡核苷酸芯片(代表迄今所知的32264个人类全基因,包括19308个已知的人类基因和12956个EST簇)检测9例大肠癌组织及相应正常大肠粘膜基因表达谱,并以实时荧光定量PCR技术对基因芯片检测结果进行验证;综合运用交集补集、秩和检验及t检验比较两组表达谱数据。结果获得大肠癌组织与正常大肠粘膜组织差异表达基因和ESTs3125个(包括肿瘤上调基因ESTs974个、下调基因ESTs2151个);大肠癌组织表达而相应正常粘膜不表达的ESTs245个;大肠癌组织不表达而正常粘膜表达的ESTs162个;最重要的大肠癌差异表达基因ESTs17个。本研究所筛得之大肠癌差异表达基因80.1%未见报道。结论综合运用交集补集分析、t检验、秩和检验对基因谱数据进行挖掘的策略,可为寻找大肠癌分子标记物和从整体上探讨大肠癌发生的分子机制奠定基础。
- 许红民王强白雪娟钟定荣曹秀堂张金萍丁彦青姚开泰
- 关键词：大肠癌基因表达谱数据挖掘
- 运用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳和图像软件分析TPA处理NIH3T3细胞前后的蛋白质表达谱差异被引量：6
- 2004年
- 目的建立及优化聚丙烯酰胺双向凝胶电泳技术,并应用图像软件分析伏波醇酯(TPA)刺激前后小鼠成纤维细胞NIH3T3系的蛋白质差异表达,为进一步鉴定与TPA生物学作用有关的蛋白质奠定基础。方法分别提取TPA处理前后的NIH3T3细胞总蛋白质,经双向电泳,硝酸银染色后用软件分析显示两者蛋白质的差异表达。结果软件分析显示TPA刺激前后的细胞蛋白质有明显的差异表达。结论高质量的双向电泳设备、熟练的电泳操作和图像处理技能是寻找稳定可信的功能蛋白质的必要条件。
- 沈新明江培洲黄华李欣姚开泰
- 关键词：凝胶电泳NIH3T3细胞蛋白质表达谱
- 细胞表面唾液酸及其连接方式对乳腺癌细胞黏附的影响
- 2006年
- 目的研究肿瘤细胞总唾液酸及α2,6-连接唾液酸对乳腺癌细胞MDA-MB435黏附力的影响。方法乳腺癌细胞MDA-MB-435转染顺义或反义α2,6唾液酸转移酶(ST6Gal-I)cDNA,以黑接骨木凝集素SNA筛选高、低表达α2,6唾液酸细胞克隆,检测各转染细胞的同源凝集作用,并比较唾液酸酶处理前后肿瘤细胞对胶原IV黏附力的变化。结果顺义转染克隆细胞-细胞之间的同源黏附能力下降,与胶原IV的黏附增强;反义转染克隆细胞-细胞之间同源黏附能力增强,而与胶原IV的黏附降低。唾液酸酶处理后肿瘤细胞与胶原IV的黏附力下降至未处理前的31%￣57%。结论乳腺癌MDA-MB435细胞表面唾液酸及α-2,6唾液酸化对肿瘤细胞的黏附有重要影响。
- 王晓玉林绍强李君武Wolfgang Kemmner丁彦青
- 关键词：乳腺肿瘤细胞外基质细胞黏附肿瘤转移
