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结核分枝杆菌分泌蛋白64抗体适体的获得及血清学检测被引量：8: 2010年; 指数级富集配体的系统进化（ systematic evolution of ligands by exponential enrichment, SELEX）技术筛选的适体具有可体外合成、纯度高、稳定性强和易于保存等特点，并已用于检测多种靶物质。目前利用适体检测MTB分泌蛋白64（MPT64）及模拟胸腔积液中γ干扰素含量已有报道，由于MPT64是结核病血清学诊断的重要抗原之一，; 蔡江丽秦莲花刘忠华郑瑞娟金瑞良胡忠义; 关键词：血清学检测分泌蛋白结核分枝杆菌适体抗体 MPT64

分泌蛋白MPT64鉴定结核分枝杆菌复合群的应用研究被引量：9: 2009年; 目的构建重组MTB分泌蛋白MPT64，制备多克隆抗体，评价其在鉴定MTB复合群中的应用价值。方法通过PCR扩增mpt64基因，构建pET21a—mpt64重组质粒；纯化重组蛋白并免疫兔制备多克隆抗体；纯化和标记抗体，建立双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）方法；检测分枝杆菌标准菌株和临床分离株培养液中MPT64蛋白，抽提样本基因组扩增mpt64基因。结果成功构建重组质粒，纯化重组蛋白并制备多克隆抗体，检测抗体浓度为0．85g／L，ELISA法检测敏感度为0．01mg／L，MTB复合群中H37Rv、牛分枝杆菌和非洲分枝杆菌为阳性，24株非MTB均为阴性；rapt64基因扩增的结果与ELISA法检测结果完全相符。ELISA法检测MTB临床分离株的敏感度为97．3％（110／113），57株非MTB均未检出MPT64蛋白，检测特异度为100．0％。基因扩增MTB中2株为阴性，非MTB均为阴性。结论采用ELISA法检测分泌蛋白MPT64来鉴定MTB复合群，是一种准确、快速和简便的方法，值得临床推广应用。; 刘忠华秦莲花冯永红毕爱笑杨华丁元生崔振玲金瑞良郑瑞娟胡忠义; 关键词：分枝杆菌结核分泌蛋白

显微镜观察药物敏感性试验检测结核杆菌的耐药性被引量：9: 2009年; 目的探讨显微镜观察药物敏感性试验（MODS）同时陕速检测结核杆菌对4种一线抗结核药物耐药性的效果。方法用24孔细胞培养板进行结核分枝杆菌（MTB）液体药敏检测，并对最佳检测条件进行探讨；将建立的MODS技术用于测定66株MTB临床分离株对链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇的耐药性，并与传统罗氏药敏结果进行比较，对两法检测结果不符的菌株进行最低抑菌浓度（MIC）测定。结果MODS检测链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇药敏结果与罗氏药敏结果符合率分别为97．0％、90．9％、95．5％、86．4％。如以传统罗氏药敏结果为判断标准，则MODS检测链霉素的敏感度为96．0％、特异度为97．6％、阳性和阴性预测值（PPV、NPV）及准确性分别为96．0％、97．6％和97．O％；检测异烟肼、利福平和乙胺丁醇的敏感度、特异度、PPV、NPV及准确性分别为100％、85．4％、81．O％、100％、90．9％；96．2％、95．0％、92．6％、97．4％、95．5％和73．7％、91．5％、77．8％、89．6％、86．4％。共有16株菌的20个药敏结果MODS与传统罗氏药敏结果不符，MIC检测结果有14株16个药敏结果与MODS结果一致，4株菌4个药敏结果与罗氏药敏结果一致。结论MODS同时检测链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇药敏结果具有快速、操作简便、价廉等优点，与传统罗氏药敏结果有较高的符合率，可作为MTB耐药性的快速检测方法之一。; 金文国郑瑞娟王洁杨华丁元生付佑辉胡忠义; 关键词：抗药性微生物敏感性试验显微镜检查

结核分枝杆菌分泌蛋白64抗原模拟表位的筛选研究被引量：4: 2010年; MTB分泌蛋白64（MPT64）是MTB重要的保护性抗原,也是结核病血清学诊断的理想抗原之一.然而目前报道MPT64抗原对血清标本的直接检出率较低.20世纪80年代兴起的噬菌体展示随机肽库（phage display peptide library）技术是一种快捷、高效分析蛋白分子间相互作用的工具[3],尤其适于筛选生物活性大分子的配体.; 张丽婷胡忠义李连青刘忠华秦莲花蔡江丽杨华; 关键词：抗原模拟表位分泌蛋白结核分枝杆菌 DISPLAY PEPTIDE

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上海市科学技术委员会科研基金(08DZ2291500)

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