上海市科委重大科技攻关项目(04D219114)
- 作品数：5 被引量：5H指数：1
- 相关作者：季育华张玥钱春艳谈意隽孙宏彬更多>>
- 相关机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院国家工程研究中心上海华冠生物芯片有限公司更多>>
- 发文基金：上海市科委重大科技攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 三株抗人巨细胞病毒pp65蛋白单克隆抗体的鉴定和应用被引量：3
- 2007年
- 目的 制备抗HCMVpp65蛋白的单克隆抗体（简称单抗），并对其进行相关研究。方法 以重组表达的HCMVpp65蛋白为抗原，运用杂交瘤技术制备单抗，对获得的单抗进行Ig亚型、特异性、效价和亲和常数的鉴定与测定，并以免疫荧光检测法与进口同类产品进行比较。结果 获得3株针对HCMVpp65蛋白的单抗，即B6、G12、2812；Ig亚型依次为IgG1κ型、IgG1κ型、IgMg型；亲和常数依次为3．6×10^7L／mol、3．8×10^7L／mol、3．1×10^7L／mol；免疫印迹试验结果表明，3株单抗都与HCMVpp65蛋白特异性的结合，除2B12外，B6、G12与EB病毒（EBV）、单纯疱疹病毒（HSV）Ⅰ、HSVⅡ均无交叉反应；与进口单抗平行检测140份临床标本，结果一致（r=1．00，P〉0．05）。结论 成功获得3株稳定分泌抗HCMVpp65蛋白的杂交瘤细胞株，所产生的抗体特异性和亲和力较理想，为HCMVpp65蛋白抗原血症检测国产化试剂盒的研制奠定了基础。
- 钱春艳王升年张玥陈盈盈施艳何妍陆皓季育华
- 关键词：巨细胞病毒PP65蛋白
- T7噬菌体表达巨细胞病毒PP65蛋白抗原的初步研究
- 2006年
- 目的利用噬菌体展示技术构建巨细胞病毒基质蛋白PP65的抗原,初步评价其抗原性。方法PP65的基因片段经酶切后,与T7噬菌体的基因组相应酶切位点结合,借助包装蛋白组装成为完整的噬菌体。PP65目的蛋白以融合蛋白的形式表达在T7噬菌体的头蛋白部位,每个噬菌体颗粒表面可表达5～15个拷贝。噬菌体可以在宿主细胞中快速繁殖,并且能够迅速裂解宿主细胞,使目的蛋白的富集达到很高的效率。人巨细胞病毒基质蛋白PP65可以激发机体强烈的免疫反应,运用T7噬菌体载体展示系统表达PP65的部分肽段,扩增噬菌体,以SDS-PAGE电泳和western-blot鉴定所表达的抗原特性。结果获得了重组T7-PP65噬菌体,通过鉴定,噬菌体表达在其头蛋白上的PP65抗原可以被天然PP65的单克隆抗体所识别。结论噬菌体展示技术可以有效地进行病毒蛋白抗原的表达,为抗原筛选和疫苗的研制提供科学依据。将PP65表达在T7噬菌体表面,可以研究其免疫原性及评估其作为疫苗的可能性。
- 谈意隽周彩存唐亮刘岽曾宪卓孙宏彬张钥季育华
- 关键词：噬菌体展示巨细胞病毒PP65抗原表位
- 采用原位杂交法检测移植患者外周血白细胞中HCMV DNA
- 2008年
- 目的建立DNA原位杂交方法(ISH)检测移植患者外周血白细胞中的人巨细胞病毒(HCMV),并与HCMV-pp65抗原血症(免疫组织化学法,IHC)结果比较。方法选取本院肾移植患者标本60例,移植前后采集外周血标本250例,分离获得白细胞经涂片固定后分别采用ISH和IHC检测HCMV。结果ISH检测阳性率高于IHC,ISH检测的HCMV DNA阳性细胞见于外周血单个核细胞,IHC检测的HCMV抗原阳性细胞主要见于中性粒细胞,ISH检出的阳性细胞数明显高于IHC,且显然早于IHC。结论原位杂交检测HCMV DNA,敏感性高、特异性强,有利于早期、快速监测HCMV的激活。
- 张玥钱春艳叶廷军季育华
- 关键词：巨细胞病毒原位杂交免疫组织化学
- 人巨细胞病毒pp65抗体检测方法的建立被引量：1
- 2006年
- 目的建立检测人巨细胞病毒pp65IgG抗体（HCMV pp65 IgG）的间接酶联免疫吸附试验（ELISA）。方法通过棋盘滴定法选择包被抗原和酶标二抗的最适浓度：以商品抗HCMV pp65单抗为阳性模拟标本，建立检测抗HCMV pp65 IgG抗体，并对临床收集的各类血清标本进行检测和分析。结果检测间接ELISA HCMV pp65 IgG的最佳包被抗原浓度为10ng／孔，酶标二抗的工作浓度为1：3000。当阳性吸光度似）值为0．298时，87份不同组的血清标本（HCMV感染活动组、HCMV感染不活动组、HCMV未感染组）阳件检出率分别为51．6％（16／31）、12．1％（4／33）和0．0％（0／23）。3组两两间差异均存在显著性（P〈0．01）。结论本研究建立了检测HCMV pp65抗体的方法，应用该方法能从相应人群中检出该抗体，检测不存在假阳性，并发现该抗体与抗HCMV IgM的检出有关。
- 钱春艳吴晓玲张玥王升年季育华
- 关键词：人巨细胞病毒酶联免疫吸附试验
- 人巨细胞病毒pp65核酸疫苗的构建、表达与动物免疫效应被引量：1
- 2005年
- 构建真核重组表达质粒PVAX1-pp65,通过对其表达产物的鉴定和免疫小鼠实验,探讨PVAX1-pp65载体对诱导免疫应答的效果及方式。用已构建的原核表达载体pp65-pet32a,经酶切后与DNA疫苗载体PVAX1连接,构建HCMVpp65核酸疫苗(PVAX1-pp65)。用脂质体法将其转染293细胞,经间接免疫荧光、免疫印迹试验来验证其表达的产物。同时,免疫小鼠后取其脾脏细胞,经流式细胞仪检测其CD4+和CD8+T细胞;并利用MTT法测定免疫小鼠的T细胞对ConA和重组pp65蛋白刺激后的增殖活性。结果显示构建的真核表达载体PVAX1-pp65,经测序验证其序列正确。体外转染实验结果表明转染重组质粒的细胞胞浆内呈现与特异性pp65单克隆抗体反应的颗粒状荧光产物,免疫印迹试验也显示重组质粒转染的细胞裂解物中有pp65蛋白条带。另外,免疫小鼠脾CD8+T细胞的含量明显高于对照组;免疫鼠脾细胞对重组pp65抗原蛋白的刺激后增殖反应明显。综上结果证实,成功地构建了HCMVpp65核酸疫苗,并能有效地表达,表达的蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性。HCMVpp65DNA疫苗可诱导小鼠产生针对HCMV的特异性细胞免疫应答,可作为一种有应用前景的核酸疫苗进一步深入研究。
- 张玥孙宏彬谈意隽季育华
- 关键词：人巨细胞病毒PP65核酸疫苗细胞免疫
