广东省医学科学技术研究基金(A2013312)
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
- 相关作者：王丽京李江超何晓东叶宇翔关新元更多>>
- 相关机构：广东药学院中山大学南方医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省医学科学技术研究基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 快速高效从石蜡包埋肿瘤组织中提取micro-RNA方法的研究
- 2014年
- 目的探索一种从石蜡包埋组织标本中快速、便捷、低成本的提取miRNAs的方法。方法收集2年内石蜡包埋的人乳腺癌组织和保存6个月的MMTV基因工程小鼠乳腺癌组织石蜡样本，同时选用进口A公司生产的提取石蜡组织miRNAs试剂盒作为对照；通过2种方法提取人和鼠的石蜡切片中miRNAs做对比分析，包括采用凝胶电泳验证，检测miRNA纯度、浓度分析。为了进一步验证其提取效果，采用定量PCR对所提取的总miRNAs进行miRNA-375和miR-218检测。结果①采用本实验方法从石蜡包埋乳腺癌组织中提取的miRNAs其纯度在1．86—2．210D之间，其浓度可以满足常规实验要求（最低38．50mg／L）；②荧光定量PCR能够检测到miRNA-375和miRNA-218，其拷贝数与对照组比较，2种方法差异无统计学意义（P〉0．05）。③该方法提取时间短、成本低，成本是试剂盒法的1／10，提取时间至少节省1／3。结论从石蜡包埋组织标本中提取miRNAs方法切实可行，为从石蜡组织样本提取miRNA进行分子诊断和肿瘤相关的研究提供了便利，对采用回顾性石蜡标本研究miRNAs提供了有力的帮助。
- 李江超杨扬郝卓芳周晓明章倩倩王丽京
- 关键词：石蜡包埋组织MICRORNAS
- 肺癌细胞自分泌collagenⅠ在三维培养中促进肺癌细胞的生长被引量：3
- 2014年
- 目的研究肺癌细胞自分泌的胶原Ⅰ型(collagenⅠ)在肺癌细胞三维培养的作用。方法通过免疫组化和RT-PCR证实肺癌细胞表达collagenⅠ;采用sh-collagenⅠ方法干扰肺癌细胞的表达,正常肺癌细胞作为对照组;用成纤维细胞的上清液刺激肿瘤,RT-PCR检测collagenⅠ的表达。结果肺癌细胞分泌collagenⅠ;发现敲除collagenⅠ的肺癌细胞的三维生长受到限制:其生长率下降,三维培养中克隆形成减少。采用成纤维细胞培养细胞上清液刺激肿瘤细胞,肺癌肿瘤细胞自分泌的collagenⅠ表达发生改变,肿瘤自分泌的collagenⅠ可以维持自身生长的需要并受到微环境中非细胞外基质的调控。结论肺癌细胞自分泌的collagenⅠ对肿瘤的生长有着重要作用。
- 李江超李小妹兰天亓翠玲何晓东杨弘李焱王丽京关新元
- 关键词：肺癌细胞细胞生长
- 改良CAM移植瘤模型的制备及其对肿瘤血管新生抑制药物的筛选效果被引量：2
- 2014年
- 目的：以改良方法在鸡胚绒膜尿囊膜（chickchorioallantoicmembrane，CAM）上接种人成神经胶质瘤U87细胞制备移植瘤，验证改良模型筛选抗肿瘤血管新生药物的有效性和可行性。方法：将鸡胚种蛋随机分为2组，分别使用传统方法与改良方法建立CAM-U87移植瘤模型；改良方法在鸡胚孵育中增加9—16h的开窗适应期，再将特制的硅胶圈放置在CAM组织-级血管的半侧；硅胶圈内接种U87细胞建立CAM—U87移植瘤模型。模型的硅胶圈内分别加入经典抗血管新生药物沙利度胺（50、100、200μg／ml）和自主研发抗血管新药G386，以DMSO为对照；体视显微镜观察肿瘤形态，H—E染色法观察瘤组织新生微血管密度（microvesseldensity，MVO），原位杂交（insituhybridization，ISH）技术检测血管标记物VEGFR2的表达。结果：成功制备改良CAM—U87细胞移植瘤，改良模型不影响CAM本身的血管生成，其瘤细胞接种成功率较传统模型显著升高[（70．00±4．226）％vs（41．25±5．154）％；t=4．314，P=0．0007]，移植瘤体积显著增大[（60．20±6．012）vs（15．97±2．403）mm3；t=6．012，P〈0．0001]。沙利度胺和G386两药均能显著抑制移植瘤组织中的血管形成，使瘤组织中MVD显著降低[沙利度胺200μg／ml时（15．85±1．15）％vs（29．80±4．16）％；t=2．49，P=0．0474]、VEGFR2表达明显减少。结论：改良方法成功制备CAM—U87移植瘤模型，经沙利度胺和G386验证，该模型对抗肿瘤血管新生药物的筛选具有良好的有效性和可行性。
- 叶宇翔周秦李江超袁俏冰韩露雷岩王丽京
- 关键词：移植瘤U87细胞肿瘤血管新生
- 荧光原位杂交探针应用于平衡易位t(1,6)(q42;p23)胚胎植入前诊断的研究被引量：1
- 2014年
- 背景:染色体相互易位在人群中比较常见,下一代常常产生相同或不同的易位,易导致容易流产,而植入前诊断方法之一的CGH难以检测到相互易位,因此原位杂交(FISH)依然是解决诊断相互易位的有力手段。目的:通过设计个体化的FISH探针,制备探针,并在卵裂球单细胞水平进一步验证探针的准确性,为筛选正常核型的囊胚进行植入奠定技术基础,为个体化的FISH探针植入前诊断提供应用研究基础。方法:通过设计1q和6p平衡易位探针,进行探针标记,再采用患者和正常人核型验证探针质量,通过荧光原位杂交技术进一步检测正常人受精后的卵裂球中1q和6p平衡易位对易位染色体状态。结果:3个卵接球裂均呈现单个完整细胞核,荧光原位杂交中各细胞核均有清晰明亮的杂交信号。信号数分别为2。均为正常胚胎,可以考虑进一步对该易位患者进行卵裂球进行诊断,上述研究对个体化的易位探针的应用研究提供了研究基础。
- 李江超张仁礼张丽丽陈金娜石庆荣熊丽关新元王丽京
- 关键词：平衡易位荧光原位杂交植入前诊断
- PSGL-1基因敲除小鼠血中MIP-1γ和TNF-α的表达被引量：2
- 2014年
- 目的研究PSGL-1缺失对遗传基因工程小鼠外周血血常规的影响,并检测外周血中炎症因子IGFBP-6、TNF-α和MIP-1γmRNA表达水平。方法用血常规检测方法检测正常C57/BL/6小鼠和PSGL-1基因缺失的基因工程小鼠(PSGL-1-/-小鼠)的外周血中血常规的差异;其次,提取两种鼠的血液的mRNA,逆转录为cDNA,采用real-time PCR方法,检测C57小鼠与PSGL-1-/-小鼠外周血中炎症因子TNF-α和MIP-1γmRNA的差异。结果与对照组C57小鼠相比,PSGL-1-/-基因工程小鼠在12周龄时外周血中中性粒细胞(*P<0.05)、淋巴细胞(**P<0.01)和白细胞细胞(***P<0.001)总数显著增加炎症因子TNF-α以及MIP-1γ表达增加(P<0.05)。结论 PSGL-1的缺失改变了小鼠细胞因子并影响了外周血的血细胞组成,MIP-1γ和TNF-α炎症因子上调,有可能影响了小鼠的免疫功能。
- 李江超周泽启叶杰韩露叶宇翔刘影何晓东陈卉袁俏冰黎帅张静丽王丽京
- 关键词：TNF-Α
