国家高技术研究发展计划(2006AA10Z336)
- 作品数：10 被引量：47H指数：5
- 相关作者：杨瑞金张文斌费颖刘芳张萃荟更多>>
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- 发文基金：国家高技术研究发展计划食品科学与技术国家重点实验室目标导向资助项目更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学化学工程更多>>
- 节杆菌基因组DNA提取方法的改良被引量：2
- 2009年
- [目的]研究比较了节杆菌的不同DNA提取方法,以获得高质量的基因组DNA。[方法]采用反复冷冻研磨、甲苯处理对细胞进行预处理,随后进行CTAB抽提,并与细菌基因组提取试剂盒进行比较。[结果]改良的CTAB法提取的DNA,纯化之后经电泳检测表明,基因组DNA条带清晰,量度均一,DNA片断大小一致;以上述DNA为模板进行PCR扩增,条带单一、特异性强,其中利用经甲苯方法提取的DNA快速、简便、经济实用,可作为PCR扩增的模板进行后续的基因操作和分子生物学研究。[结论]改良的CTAB法能够有效地提取节杆菌基因组DNA,纯度达到要求。
- 孙慧慧董晓璇唐蕾刘海丽张峰杨瑞金
- 关键词：节杆菌DNA提取PCR
- 薄层色谱法快速分析乳果糖被引量：11
- 2008年
- 以硅胶G板为固定相,正丁醇-乙醇-水(体积比5:3:2)为流动相,研究并建立了乳果糖的薄层层析快速分析方法。经过上行展开,苯胺-二苯胺-磷酸显色,根据葡萄糖、半乳糖、果糖、乳糖、乳果糖各斑点的R_f值和各自的斑点颜色定性。运用飞点扫描仪扫描乳果糖斑点的峰面积,并依据建立的标准曲线计算酶反应液中的乳果糖含量。在所选择的实验条件下,乳果糖的检测限为2μg,在2～30μg范围内,其斑点的峰面积与检测量具有一定的正相关性。用定量添加标准品的方法研究薄层扫描的准确度,其相对标准偏差为3.41%。此方法设备简单、操作成本低,可以应用于实验室的初期研究阶段。
- 刘芳杨瑞金张文斌张萃荟费颖
- 关键词：乳果糖薄层色谱薄层扫描
- 产β-半乳糖苷酶的节杆菌诱变选育及培养基优化
- 2011年
- 酶法合成乳果糖需要使用同时具备水解和转苷活力的β-半乳糖苷酶为催化剂。采用物理诱变,培养基优化手段,以提高细菌产该类β-半乳糖苷酶的能力为目的,自然筛选获得的具有转苷能力的节杆菌Arthrobacter sp.,经紫外线照射处理,采用5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(X-gal)为平板筛选显色剂,加之摇瓶发酵筛选,得到8株产酶水平明显提高的诱变株,其中Arthrobacter sp.M2酶活力较野生株提高了89%,传代5次酶活基本稳定。采用正交实验优化产酶培养基,结果表明:在乳糖浓度为10g/L,玉米浆浓度为22g/L,Fe3+浓度为1.5mmol/L时效果最佳,酶活水平进一步提高了113%。紫外诱变和培养基优化有效地提高了节杆菌产β-半乳糖苷酶的水平。
- 唐蕾董晓璇李珍爱孙慧慧杨瑞金毛忠贵
- 关键词：节杆菌紫外诱变Β-半乳糖苷酶
- 适合乳果糖生产的β-半乳糖苷酶高产株的筛选及培养基优化被引量：9
- 2008年
- 通过紫外、超声和甲基磺酸乙酯(EMS)诱变乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis),筛选出一株适合乳果糖生产的β-半乳糖苷酶高产菌株K1-16-7,其乳果糖产量达到44.88g/L。通过Plackett-Burman实验设计、中心组合实验设计对其摇瓶培养基进行优化,采用优化配方酶活可以达到147.6U/g。
- 张萃荟杨瑞金张文斌刘芳费颖
- 关键词：乳酸克鲁维酵母诱变育种Β-半乳糖苷酶乳果糖
- 转半乳糖基β-半乳糖苷酶产生菌筛选鉴定、产酶条件优化及酶法制备乳果糖
- 2010年
- 借助形态观察、生理生化指标测定及16S rNDA序列分析,对从土壤中筛选得到的转半糖基β-半乳糖苷酶产生菌进行鉴定,确定其为肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)285。通过单因子试验和正交试验,对该菌株产转半乳糖基β-半乳糖苷酶的培养条件进行优化。优化的发酵条件为:种龄6 h,起始pH值7.0,接种量3%,装液量40 mL/250 mL,30℃下发酵8 h。该培养条件下产酶量达7.21 U/mL。以0.1 mol/L、pH值7.0 K3PO4缓冲溶液配制的40%乳糖、20%果糖(w/v)溶液为底物,调整酶活力至3.5 U/mL,50℃恒温水浴反应6 h,HPLC分析转半乳糖基产物,得乳果糖产量为20.8 g/L,即3.47 g/(L.h)。
- 蒋孝燕杨瑞金王贺叶发银张燕鹏华霄
- 关键词：肺炎克雷伯氏菌Β-半乳糖苷酶乳果糖
- 适合乳果糖生产的菌株K．lactisK1-16-7产β-半乳糖苷酶发酵条件的优化被引量：8
- 2008年
- 在摇瓶发酵条件下,采用Plackett-Burman设计法和响应面分析法对K.lactisK1-16-7菌株的培养基配方进行优化,确定了影响K1-16-7菌株产酶的5个重要因子依次为酵母膏、蛋白胨F403、乳糖、MgSO4和KH2PO4,对这5个因子进行最陡爬坡试验,通过响应面分析法确定了主要影响因子的最佳条件。优化后的培养基配方为酵母膏10.7g/L、蛋白胨F4039.4g/L、乳糖12.1g/L、MgSO45.6g/L、KH2PO44.7g/L,优化后β-半乳糖苷酶的产量达147.6U/g,比优化前提高了88.7%。
- 张萃荟杨瑞金张文斌刘芳费颖
- 关键词：乳酸克鲁维酵母Β-半乳糖苷酶乳果糖响应面分析法
- 密苏里游动放线菌葡萄糖异构酶基因xylA的克隆及其表达条件的优化被引量：6
- 2010年
- 为克隆、表达密苏里游动放线菌葡萄糖异构酶(GI)基因xylA,并对其诱导表达条件进行初步优化。采用Slowdown PCR方法克隆得到密苏里游动放线菌(Actinoplanes missouriensis)CICIM B0118(A)的葡萄糖异构酶基因xylA,构建pET-28a(+)-xylA表达载体,并转化至E.coliBL21(DE3),经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,并对其表达产物进行SDS-PAGE电泳。结果表明,融合蛋白分子质量约为45kD。在诱导时间9h、0.6mmol/LIPTG、30℃和OD600nm值为0.8的最适培养条件下,酶比活力最高达到62.42U/mL。
- 王贺杨瑞金华霄钱婷婷张文斌蒋孝燕
- 关键词：葡萄糖异构酶SLOWDOWNPCR
- 利用枯草芽孢衣壳蛋白表面展示β-半乳糖苷酶被引量：5
- 2012年
- 分别将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis 168)芽孢衣壳蛋白CotB、CotC、CotG和CotX的启动子和编码序列与来自嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus IAM11001)的β-半乳糖苷酶基因bgaB进行重组,构建融合表达cotB-bgaB、cotC-bgaB、cotG-bgaB和cotX-bgaB的整合型重组质粒。将4种重组质粒分别转入枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 168(trp-),获得了能在芽孢表面展示的重组菌株PB701、PB702、PB703和PB704。经Western blot检测,4种重组菌株均表达了预期分子量的融合蛋白,初步表明β-半乳糖苷酶被锚定在重组菌株的芽孢表面。以oNPG为底物测定4种重组菌株芽孢表面展示β-半乳糖苷酶的水解能力,得到的酶活分别为0.14、0.06、0.22和0.20 U/mL。
- 王贺杨瑞金华霄赵伟张文斌
- 关键词：芽孢Β-半乳糖苷酶WESTERNBLOT
- 具有β-半乳糖苷酶转苷能力的菌株筛选及鉴定被引量：9
- 2008年
- 以乳糖为惟一碳源,5-溴-4-氯-3-吲哚--βD-半乳糖苷(X-gal)为显色剂,从土壤中筛选出10株产β-半乳糖苷酶较高、生长较好的菌株。在30℃下发酵产酶,测定邻硝基苯-β-D-半乳糖苷(ONPG)水解能力。在50 mmol/L磷酸钾缓冲液(pH 7.0)中,加入400 g/L乳糖和200 g/L果糖,并分别添加10株菌所产β-半乳糖苷酶,至酶活为400 U/L,37℃下反应8 h,经高效液相色谱分析,编号为2-1样品中含有乳果糖。通过形态特征和16S rDNA序列分析,鉴定菌株2-1为节杆菌属。
- 钟义华唐蕾吴亢杨瑞金朱松
- 关键词：Β-半乳糖苷酶乳果糖
- 共固定化乳糖酶和葡萄糖异构酶的研究被引量：3
- 2008年
- 研究了明胶-戊二醛法在共固定化乳糖酶和葡萄糖异构酶中的应用,并与开孔明胶法、卡拉胶包埋法进行了比较。进一步研究pH、明胶质量浓度、前交联中戊二醛的体积分数和二次交联的时间对明胶-戊二醛法共固定乳糖酶和葡萄糖异构酶的影响。结果表明,共固定化的最佳条件为:pH8.6,明胶浓度27%(w/w),前交联戊二醛体积分数0.15%和二次交联时间10min。在此条件下共固定化,乳糖酶的活力回收率为30.85%,葡萄糖异构酶的活力回收率为83.48%。共固定化乳糖酶和葡萄糖异构酶用于制备乳果糖,间歇操作6批次后酶活力仍然保持在初始活力的75%以上。
- 刘芳杨瑞金张文斌卢蓉蓉张萃荟费颖
- 关键词：乳糖酶葡萄糖异构酶共固定化明胶乳果糖
