长江学者和创新团队发展计划(TRT0723)
- 作品数：9 被引量：23H指数：3
- 相关作者：陈金顶赵明秋琚春梅康艳梅张学涛更多>>
- 相关机构：华南农业大学内蒙古农业大学中国兽医药品监察所更多>>
- 发文基金：长江学者和创新团队发展计划广东省自然科学基金广州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪乙型脑炎病毒3种灭活疫苗的制备及免疫效果比较被引量：8
- 2011年
- 以GZ0409-31株乙脑强毒株作为抗原与白油佐剂、蜂胶佐剂、603纳米佐剂制备灭活疫苗,并对疫苗做了无菌检验和安全检验,灭活疫苗接种小鼠后均未出现不良反应,安全性良好.将制备的乙脑灭活疫苗免疫小鼠,并且与市售乙脑弱毒活苗作对比.结果显示,白油佐剂灭活苗组和603纳米佐剂灭活苗组在第90 d抗体效价还维持在较高的水平,同期的弱毒活苗组抗体较低;弱毒活苗组IFNγ-含量较灭活苗组高,其中603纳米佐剂灭活苗组IFNγ-含量较其他灭活苗组高.用乙脑病毒强毒对免疫小鼠进行感染,白油佐剂灭活苗和603纳米佐剂灭活苗对小鼠的保护率均为100%(10/10),蜂胶佐剂灭活苗对小鼠的保护率为70%(7/10),对照组市售乙脑弱毒活苗对小鼠的保护率为100%(10/10).表明制备白油佐剂灭活苗和603纳米佐剂灭活苗对小鼠的保护率高,无排毒散毒危险.
- 乔进平赵明秋张学涛李银光李姗姗刘薇陈金顶
- 关键词：乙脑病毒灭活疫苗佐剂免疫效果
- 猪树突状细胞的体外培养及其主要免疫生物学特性研究被引量：6
- 2010年
- 为建立体外诱导、培养猪外周血单核细胞来源树突状细胞(DC)的方法,并对其进行免疫生物学特性鉴定,本实验从猪外周血无菌分离单核细胞—DC前体细胞,以猪源重组GM-CSF和IL-4联合诱导培养,从形态学、表型及功能方面对其进行检测。结果证实,经体外诱导培养的猪DC具有典型的树突状形态;培养6d的未成熟DC表面SLA-II-DR、CD1、CD172a表达的阳性率分别为61.50%、83.10%和24.90%;培养8d的成熟DC表面SLA-II-DR、CD1、CD172a表达的阳性率分别为71.70%、50.10%和19.30%;培养的DC具有吞噬异物的功能,以及刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力。本文首次在国内成功地建立了体外培养猪外周血单核细胞来源DC的方法,为进一步研究DC在猪传染性疾病致病机制中的作用奠定了基础。
- 沈海燕赵明秋琚春梅张学涛康艳梅陈金顶
- 关键词：CD分子
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5/6/7基因真核载体的构建
- 2012年
- 针对PRRSV ORF5～ORF7设计3对特异性引物,以PRRSV GD-XH株和GD08-1株为模板进行RT-PCR扩增,并将扩增产物克隆到真核表达载体pEGFP-N1中,获得重组质粒pEGFP-N1-(ORF5～ORF7),然后将重组表达质粒转染Marc-145细胞.通过荧光显微镜观察显示,重组质粒pEGFP-N1-(ORF5～ORF7)和载体pEGFP-N1均有绿色荧光出现.结果表明:成功构建了表达PRRSV GD-XH株和PRRSV GD08-1株的GP5、M、N蛋白的真核表达质粒pEGFP-N1-GD-XH-GP、pEGFP-N1-GD-XH-M、pEGFP-N1-GD-XH-N、pEGFP-N1-GD08-1-GP5、pEGFP-N1-GD08-1-M、pEGFP-N1-GD08-1-N.
- 康艳梅赵明秋沈海燕琚春梅陈金顶
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒PEGFP-N1
- 新型可视化RT-LAMP检测猪乙型脑炎病毒方法的建立及初步应用
- 针对乙型脑炎病毒(JEV)保守区序列设计了一套RT-LAMP的检测引物,通过优化反应条件,建立了一种检测猪乙型脑炎(JE)的新型可视化RT-LAMP诊断方法。特异性和敏感性试验结果显示,该方法能够特异的检测JEV,其最低...
- 张学涛沈海燕刘微赵明秋琚春梅陈金顶
- 关键词：乙型脑炎病毒
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒感染对Marc-145细胞NF-κB信号通路影响的研究
- 本研究用PRRSV经典株GD-XH和变异的高致病性PRRSV GD08-1感染Marc-145细胞,于感染后1 h、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h收集细胞,抽取胞浆蛋白和核蛋白。取48 h核蛋白,用EMSA...
- 康艳梅陈立军沈海燕赵明秋琚春梅陈金顶
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒NF-ΚBMARC-145IΚB
- 文献传递
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5/6/7基因真核表达载体的构建
- 本研究针对PRRSV ORF5-ORF7设计三对带有EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点的引物,以PRRSV GD-XH株和GD08-1株为模板进行RT-PCR扩增,获得带有酶切位点的目的片段插入pMD18-T载体,对阳性重组质...
- 康艳梅赵明秋沈海燕琚春梅陈金顶
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒PEGFP-N1
- 文献传递
- 猪繁殖与呼吸综合症病毒分离株ORF5和Nsp2基因的序列分析被引量：1
- 2010年
- 根据美洲型猪繁殖与呼吸综合症病毒（PRRSV）基因组序列设计2对引物，对疑似PRRSV感染猪的病料进行RT—PCR检测，核酸检测阳性病料进行PRRSV分离，获得了1株美洲型PRRSV，命名为GD08-2．对PRRSVGD08．2株、GD—XH株、GD08—1株的ORF5基因和部分Nsp2基因进行序列测定与分析．结果表明，GD08—2株的ORF5基因与PRRSV疫苗株pMLV、经典株VR-2332和GD—XH株的相似性较高，而与GD08—1株的相似性较低．GD08—2株的Nsp2基因推导的氨基酸序列出现12个氨基酸的不连续缺失，分别位于66～74位和192～194位，由此推测，GD08—2株可能为PRRSV的突变株．GD08—1株的ORF5基因与国内分离的高致病性PRRSV相似性较高，其Nsp2基因推导的氨基酸序列存在30个氨基酸的缺失，与国内高致病性PRRSV分离株JXA1的缺失位置完全一致，由此推测，GD08—1株属于高致病性PRRSV；GD—XH株的ORF5基因与疫苗株pMLV的相似性较高，其Nsp2基因存在个别核苷酸的点缺失．遗传进化分析表明，GD08—1株与国内分离的高致病性PRRSV的遗传进化关系较近，属同一分支；GD-XH株和GD08—2株与PRRSV经典株VR一2332、疫苗株pMLV的遗传关系较近，属另一分支．
- 康艳梅赵明秋张学涛沈海燕徐艳芳琚春梅易琳陈金顶
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合症病毒ORF5基因NSP2基因
- 口蹄疫病毒VP1基因siRNA重组腺病毒的构建及其介导的RNAi抑制口蹄疫病毒复制的研究被引量：1
- 2010年
- 本研究选择O型FMDV VP1基因上保守序列作为可能的干扰位点,合成了siRNA,将siRNA克隆到pSIREN-Shuttle中,获得siRNA重组表达载体pShuttle-VP1。用限制性内切酶PI-Sce I和I-Ceu I双酶切siRNA重组表达载体和腺病毒质粒载体pAdeno-X,利用体外连接法获得了重组质粒。经过PCR扩增、酶切鉴定及序列测定,证明成功构建了重组腺病毒质粒pAdeno-VP1。利用脂质体转染法,将Pac I线性化的重组腺病毒质粒pAdeno-VP1转染HEK293细胞,包装成重组腺病毒rAdeno-VP1。经过PCR鉴定正确后大量增殖,增殖的重组腺病毒经过浓缩、纯化得到了高滴度的病毒。用终点稀释法测定病毒滴度为2.5×109PFU/mL。将rAdeno-VP1感染IBRS-2细胞后,12 h后再加入100TCID50的FMDV O/HKN/2003。结果显示,重组腺病毒能够抑制FMDV的复制。
- 贾俊涛陈立军赵明秋琚春梅吕英然陈金顶
- 关键词：口蹄疫病毒重组腺病毒
- 口蹄疫病毒L、2B基因siRNA重组腺病毒质粒的构建
- 2017年
- 根据si RNA设计原则,分别选择O型FMDV的L和2B基因上保守序列作为可能的干扰位点,设计了2个si RNAs,并将si RNAs克隆到p SIREN-Shuttle中,获得2个si RNA重组表达载体p Shuttle-L和p Shuttle-2B。用限制性内切酶I-Ceu I和PI-Sce I双酶切si RNA重组表达载体和腺病毒质粒载体p Adeno-X,利用体外连接法获得了重组质粒。经PCR扩增、酶切鉴定及序列测定,成功构建了重组腺病毒质粒p Adeno-L和p Adeno-2B。
- 贾俊涛郭凤英乌伦吉如嘎张小宇陈金顶
- 关键词：口蹄疫病毒RNA干扰
- siRNA抑制口蹄疫病毒在BHK-21细胞中复制的研究被引量：3
- 2009年
- 选取口蹄疫病毒(FMDV)的VP1、IRES、2B、3D和L基因保守序列,设计、合成siRNA,并成功构建表达siRNA的穿梭载体,通过脂质体2000在BHK-21细胞上转染6个重组siRNA表达质粒,观察其对FMDV S72毒株复制的抑制效果.结果发现:病毒对照和空载体对照细胞死亡脱落,脂质体2000对照和细胞对照细胞状态良好;6个siR-NA转染孔细胞状态明显优于病毒对照孔,表明6个重组质粒转染后均可以显著抑制FMDV S72毒株的复制,其中靶向IRES1基因的siRNA对FMDV的复制抑制最为明显.
- 王伟利陈立军赵明秋琚春梅陈金顶
- 关键词：口蹄疫病毒RNA干扰SIRNABHK-21细胞
