国家自然科学基金(39730210)
- 作品数：73 被引量：663H指数：15
- 相关作者：钱桂生毛宝龄张青李琦张德明更多>>
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- 地塞米松对人肝癌细胞系SMMC-7721细胞酪氨酸转氨酶活性诱导能力丧失的机制研究
- 2008年
- 目的:通过测定人肝癌SMMC 7721细胞酪氨酸转氨酶(TAT)cDNA序列,并观察其糖皮质激素受体(GR)通路是否存在异常,以探讨地塞米松(Dex)丧失诱导SMMC-7721细胞TAT活性的机制。方法:RT-PCR扩增SMMC-7721细胞全长TAT cDNA并进行测序;采用实时定量PCR观察Dex对SMMC-7721细胞TAT mRNA表达的影响,并与HepG2细胞作对照;采用电穿孔法将GR特异性报告基因GRE-tk-LUC及GRE-MMTV CAT分别瞬时转入SMMC-7721细胞中,观察Dex对荧光素酶(LUC)和氯酶素乙酰转移酶(CAT)表达的影响,并与HepG2细胞作对照。结果:SMMC-7721细胞TAT cDNA中第576位碱基存在同义突变;Dex能够诱导SMMC-7721细胞中TAT mRNA的表达,最大诱导倍数为2.22,明显低于HepG2细胞(15.1倍,P<0.01);Dex诱导了SMMC-7721细胞LUC及CAT的表达,与HepG2细胞无显著差异。结论:Dex对SMMC-7721细胞TAT mRNA诱导水平降低,可能是TAT活性不增高的主要原因。
- 李忆东刘宇健卢建
- 关键词：糖皮质激素受体转录激活
- Mac-1在细胞内走向的直视研究被引量：2
- 2004年
- 分别构建荧光蛋白(FP,fluorescenceprotein)与Mac-1的两个亚基(CD11b,CD18)融合蛋白表达载体,并在鉴定pYFP-CD18和pCD11b-BFP共转染的CHO细胞(CHO-Mac-1-FP)表达的Mac-1-FP(Mac-1fusedwithfluorescenceprotein)具有与正常白细胞表达的野生型Mac-1基本一致的结构与功能的基础上,结合应用PE标记的CD11b单抗,通过激光共聚焦显微镜观测CD11b,CD18在PMA刺激和ICAM-1结合后于胞内的走向与归宿.结果显示:(ⅰ)在静态的细胞膜上看不到Mac-1,PMA活化后1h,胞膜上可见CD11b-PE和YFP-CD18群集,2h后内吞,内吞后YFP-CD18的荧光减弱,提示Mac-1有部分降解;24h后PMA再次活化,部分CD11b-PE与YFP-CD18可再次出现在膜上,说明Mac-1还可以被循环利用.(ⅱ)ICAM-1包被磁珠与Mac-1-FP-CHO细胞作用后,4h内粘附增加,同时伴有Mac-1-FP的群集,8h后粘附减少,同时伴有Mac-1-FP的荧光逐渐减弱,这一过程与PMA活化后Mac-1-FP的变化过程类似,提示ICAM-1作用后也可能出现内吞并降解.由以上结果可以得出结论,Mac-1活化后的走向是由胞浆内转位到质膜上,然后内吞,内吞后被降解或可被再利用,与此同时粘附活性亦发生相应的变化,提示受体介导性内吞是白细胞粘附活性降低的重要机制之一.
- 严鸣毛积芳韦毅钟纪根杨生生徐仁宝
- 关键词：MAC-1PMAICAM-1细胞免疫反应
- 内毒素血症大鼠心肌TLR4与IL-18 mRNA表达的变化被引量：8
- 2003年
- 目的 :观察内毒素 (LPS)血症时心肌组织Toll样受体 4 (Toll likereceptor 4 ,TLR4 )及IL 18 mRNA表达的变化 ,探讨TLR4与IL 18在LPS急性心肌损伤中的作用。方法 :运用RT PCR与ELISA分别检测心肌TLR4和IL 18mRNA的表达及心肌组织匀浆TNF α浓度。结果 :LPS组心肌中TLR4与IL 18 mRNA表达分别比正常对照组显著增强 (1 5 1± 0 0 7)vs(0 85± 0 0 3) ,(1 6 5± 0 0 4 )vs(0 5 6± 0 0 3) ,心肌组织匀浆中TNF α浓度显著增高 (0 6 7± 0 0 2 )ug lvs(0 39± 0 0 5ug l)。结论 :LPS血症时心肌组织TLR4功能及其介导的信号转导作用加强 ,IL 18分泌增加 ,表明二者在LPS血症心肌损伤中起重要作用。
- 张德明李永旺毛宝龄钱桂生
- 关键词：内毒素血症心肌IL-18MRNA表达TOLL样受体4白介素-18
- TLR4及MD2反义基因对内毒素诱导的肺泡Ⅱ型细胞活化的影响被引量：3
- 2010年
- 目的观察Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)及myeloid differentiation protein2(MD2)反义基因对内毒素(lipopolysaccharide,LPS)诱导的肺泡Ⅱ型细胞NF-κB活化的影响。方法培养的肺泡Ⅱ型细胞分为:正常细胞(对照)组、LPS组、LPS+转染空载体组、LPS+转染TLR4反义基因组、LPS+转染MD2反义基因组、LPS+转染TLR4-MD2反义基因组(n=8)。Northern blot检测转染细胞的TLR4及MD2 mRNA表达,Western blot检测转染细胞TLR4及MD2蛋白表达,电泳迁移率改变法检测NF-κΒ的活性,ELISA测定细胞培养上清中TNF-α和IL-6含量。结果与对照组比较,LPS刺激后的细胞TLR4及MD2mRNA和蛋白表达、NF-κB活性、TNF-α和IL-6的生成均显著增加(P<0.01);而转染反义基因组细胞与其他LPS刺激组比较,TLR4及MD2mRNA和蛋白的表达、NF-κB活性及TNF-α和IL-6的含量均明显降低(P<0.01)。结论 TLR4及MD2反义基因能有效抑制LPS诱导的肺泡Ⅱ型细胞的活化。
- 李永旺麻莉张德明钱桂生
- 关键词：内毒素类肺泡上皮细胞TOLL样受体4
- 不同剂量脂多糖对大鼠急性肺损伤效应的观察被引量：62
- 2004年
- 目的 观察脂多糖 (LPS)诱导的急性肺损伤 (ALI)大鼠血浆IL 4含量变化 ,探讨其在ALI发生发展过程中的意义。方法 12 0只Wistar大鼠根据注射LPS剂量随机分为 2、4、6和 8mg/kg组 ,并设立生理盐水对照组 (NS组 ) ,伤后 1、2、4和6h观察大鼠的一般情况、动脉血氧分压 (PaO2 )、肺组织湿质量 /干质量比值、肺组织病理改变 ,并检测血浆IL 4含量。结果 ①梯度剂量LPS可以引发程度不同的大鼠ALI ;当LPS≥ 6mg/kg时 ,发生急性呼吸窘迫综合征 (ARDS)。②LPS可以诱导大鼠血浆IL 4含量升高 ;当LPS≥ 6mg/kg时 ,血浆IL 4含量峰值显著提高。结论 ①尾静脉注射LPS可以复制出大鼠ALI模型。②LPS≥ 6mg/kg是大鼠发生ARDS的临界剂量。③LPS诱导大鼠血浆IL
- 李琦钱桂生张青王长征
- 关键词：急性呼吸窘迫综合征急性肺损伤脂多糖白细胞介素-4
- 急性肺损伤大鼠多形核白细胞L选择素变化及其在肺内扣押中的作用被引量：5
- 2001年
- 目的 探讨急性肺损伤 (ALI)大鼠循环血多形核白细胞 (PMN)L选择素表达的变化及其于肺内扣押中的作用。方法 通过静脉注射内毒素 (5mg/kg)复制大鼠ALI模型 ,5 6只大鼠随机分为7组 ,每组 8只。分别为 :(1)内毒素 5min组 ;(2 )内毒素 15min组 ;(3)内毒素 30min组 ;(4 )内毒素 6 0min组 ;(5 )fucodin干预 5min组 ;(6 )Fucodin干预 15min组 :静脉注射fucodin 5mg/kg后 ,立即静脉注射内毒素 5mg/kg ;(7)正常对照组 :静脉注射等量生理盐水替代内毒素。用免疫荧光间接法和流式细胞仪检测大鼠ALI过程中PMNL选择素蛋白表达的变化 ;用髓过氧化酶 (MPO)分析法及组织学检查定量ALI过程中PMN于肺内的扣押量。结果 (1)PMNL选择素的表达于静脉注射内毒素后 5min为7 8± 1 6 ,与对照组 (10 5± 2 1)比较差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,静脉注射内毒素后 15min(2 9± 0 5 )、30min(3 5± 0 7)和 6 0min(4 9± 0 7)与对照组比较差异更具显著性 (P <0 0 1)。 (2 )大鼠肺组织MPO活力于静脉注射内毒素后 5min [(0 35 9± 0 0 74)U/mg肺组织 ]、15min [(0 490± 0 0 6 9)U/mg肺组织 ]、30min [(0 5 6 5± 0 111)U/mg肺组织 ]、6 0min [(0 710± 0 112 )U/mg肺组织 ]与对照组 [(0 0 6 9± 0 0 11)
- 徐兴祥钱桂生朱元珏
- 关键词：内毒素急性肺损伤多形核白细胞L选择素
- 单个巨噬细胞超氧阴离子水平的定量检测方法被引量：3
- 2002年
- 目的 :建立单个巨噬细胞超氧阴离子 (O 2 )水平的定量检测方法 ,从而达到在单细胞内同时检测O 2和细胞内游离钙离子浓度 ([Ca2 + ]i)的目的。方法 :分离小鼠腹腔巨噬细胞 ,用NBT还原法显示细胞产生O 2 的水平 ,以细胞加入NBT前与染色后的透光强度之比来定量表示该细胞产生O 2 的量 ;以荧光探针Fura - 2 /AM负载细胞检测单细胞内 [Ca2 + ]i。结果 :①分别用PMA、OZ刺激细胞并用NBT还原法染色后细胞内均有黑色沉淀 ,但前者分布均匀而后者所产生沉淀多偏于一侧 ,呈明显的局域性分布 ;②用NBT孵育 10min后 ,细胞透光强度没有明显变化 (n=4 3,P >0 .0 5 ) ,用NBT刺激细胞产生黑色沉淀后细胞透光强度明显降低 (P <0 .0 1,n =4 3)。③在不同的聚焦状态下 ,无细胞背景区的透光强度没有明显变化 ,而细胞区透光强度变化明显 ,但各个细胞透光强度的变化趋势是一致的 ;④PMA处理 3批巨噬细胞并用NBT法染色得到 3组ROI值的分布情况提示用ROI值定量是合理的但批间差异过大 ;⑤静息状态下的小鼠腹腔巨噬细胞 [Ca2 + ]i与细胞受PMA刺激后的ROI呈显著正相关 (n =4 3,r =0 .4 2 ,P <0 0 1)。结论 :用NBT还原法染色前后细胞透光强度比值可以代表该细胞产生O 2 的量 ,进而我们可以在单细胞内同时检测O 2 和 [Ca2 + ]i。
- 朱晓燕徐仁宝
- 关键词：超氧阴离子巨噬细胞
- 脂多糖结合蛋白抗体对内毒素诱导的肺Ⅱ型细胞NF-κB活化的影响被引量：2
- 2004年
- 目的 观察兔抗人LBP多抗对LPS诱导的肺Ⅱ型细胞NF κB活化的影响。方法 原代培养的肺Ⅱ型细胞随机被分为生理盐水对照组、LPS组、加LPS前 30min加抗体组、LPS与抗体同时加入组、加入LPS后 30min加抗体组和加LPS后 1h加抗体组 ,通过凝胶电泳迁移率改变法 (EMSA)检测肺Ⅱ型细胞NF κB的活性 ,ELISA测定细胞培养上清中TNF α和IL 6的含量。结果 与对照组相比 ,LBP抗体早期应用能显著降低LPS诱导的肺Ⅱ型细胞NF κB活性 ,并显著降低细胞培养上清中TNF α和IL 6的含量。结论 LBP抗体能抑制LPS诱导的肺Ⅱ型细胞NF κB的活化和TNF α和IL 6产生。
- 李永旺张德明毛宝龄钱桂生
- 关键词：脂多糖结合蛋白内毒素
- 地塞米松对人肝癌细胞系酪氨酸转氨酶mRNA表达的影响被引量：2
- 2002年
- 目的 :观察地塞米松 (Dex)对人肝癌细胞系 (SMMC- 772 1细胞 )酪氨酸转氨酶 m RNA表达的影响。 方法 :采用定量逆转录 -多聚酶链反应 (RT- PCR)检测酪氨酸转氨酶 m RNA。 结果 :Dex能够诱导 SMMC- 772 1细胞酪氨酸转氨酶 m RNA的表达 ,且具有剂量依赖性和时间依赖性特点 ,但诱导倍数偏低。 结论 :SMMC- 772
- 李忆东刘宇健卢建
- 关键词：糖皮质激素类糖皮质激素受体地塞米松MRNA
- 急性肺损伤大鼠肺组织白介素13 mRNA的表达被引量：5
- 2002年
- 目的 观察脂多糖 (LPS)介导的急性肺损伤 (ALI)大鼠肺组织白介素 13(IL 13)mRNA表达的变化 ,探讨ALI发生、发展过程中抗炎机制变化的意义。 方法 (1)由鼠尾静脉注射梯度剂量LPS ,制作ALI模型 (APDS)。 (2 )逆转录PCR法检测肺组织IL 13mRNA含量。 结果 (1)梯度剂量LPS可以引发不同程度的ALI,当LPS≥ 6mg/kg时 ,大鼠出现急性呼吸窘迫综合征 (ARDS)。 (2 )LPS可以导致肺组织IL 13mRNA表达升高 ,当LPS≥ 6mg/kg时 ,IL 13mRNA表达增加显著。 结论 (1)尾静脉注射LPS可以复制大鼠ALI模型。 (2 )LPS≥ 6mg/kg是大鼠发生ARDS的临界剂量。 (3)LPS诱导大鼠肺组织IL 13mRNA表达增强 。
- 李琦钱桂生张青徐建铖龙勇汤正才龚晋迁
- 关键词：急性肺损伤急性呼吸窘迫综合征脂多糖类白介素13ALI
