教育部科学技术研究重点项目(03133)
- 作品数：6 被引量：29H指数：4
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- 相关机构：四川大学四川大学华西医院更多>>
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- 脑源性神经营养因子对体外培养大鼠胚脑皮质神经元缺氧的保护作用被引量：5
- 2006年
- 目的探讨脑源性神经营养因子（BDNF）对体外培养大鼠胚脑皮质神经元在低氧适应过程的保护作用。方法对胚鼠皮质神经元进行体外培养，观察透射电镜下缺氧诱导大鼠胚脑皮质神经元损伤的超微结构变化；采用MTT比色法检测正常对照组（A组）、不同缺氧时间点皮质神经元缺氧对照组（B组）及缺氧培养前24h和缺氧即刻加入不同剂量外源性BDNF实验组（C组）神经细胞存活率差别；4’、6-二脒基-2-苯基吲哚盐酸染色法结合凋亡细胞的原位末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡。结果遭受缺氧损伤的大鼠胚脑皮质神经元超微结构显示缺氧可以诱导神经细胞坏死、凋亡和混合型细胞死亡；以神经元缺氧最为敏感的0～10h为研究时间，C组在缺氧0～6h时细胞活性显著高于缺氧对照组B组（P〈0．05）。凋亡神经细胞百分率低于缺氧对照组B组（P〈0．05）。结论缺氧可诱导体外培养大鼠胚脑皮质神经元死亡，早期加入外源性BDNF可以使神经元对低氧的耐受性增强而发挥其对神经元的保护作用。
- 罗小丽毛萌周晖孙小妹李胜富
- 关键词：脑源性神经营养因子缺氧凋亡
- 脑源性神经营养因子经由环磷酸腺苷反应元件结合蛋白磷酸化对缺氧大鼠胚脑皮质神经元细胞的保护作用被引量：1
- 2008年
- 转录因子环磷酸腺苷反应元件结合蛋白（Cyclic AMP response element-binding protein，CREB）是胚脑皮质神经元细胞内脑源性神经营养因子（Brain-derived neurotrophic factor，BDNF）诱导基因表达的重要调节因子。我们前期的研究表明BDNF对缺氧性神经元损伤具有保护作用，为了阐明BDNF对缺氧性神经元损伤的保护作用是否经过了核蛋白CREB的磷酸化，本研究采用蛋白质免疫印迹法检测单纯缺氧组和BDNF干预组胚脑皮质神经元细胞内CREB及Ser^133磷酸化CREB在不同时间点表达水平的变化。结果显示缺氧及BDNF均能刺激胚脑皮质神经元细胞内Ser^133磷酸化CREB表达增加，在不同缺氧时间点BDNF干预组Ser^133磷酸化CREB表达水平较单纯缺氧组明显增强（P〈0．01），BDNF干预组1h后Ser^133磷酸化CREB表达至高峰，以后持续表达维持6h以上，维持时间较单纯缺氧组明显延长；在缺氧0～3h，BDNF干预组细胞内总CREB表达水平与单纯缺氧组基本一致；随着缺氧时间的延长，单纯缺氧组细胞内CREB表达明显减少，以第5～6h最明显。结果表明，BDNF对缺氧性神经元损伤的保护作用经过了核蛋白CREB的磷酸化。
- 罗小丽周晖孙小妹李胜富母得志毛萌
- 关键词：脑源性神经营养因子环磷酸腺苷反应元件结合蛋白蛋白质免疫印迹法
- 脑源性神经营养因子对缺氧胚脑皮质神经元发挥保护作用的细胞内信号传导机制被引量：9
- 2006年
- 目的:通过胚脑皮质神经元的体外培养,探讨遭受缺氧刺激时,脑源性神经营养因子(Brain derivedneurotrophic factor,BDNF)对神经元发挥保护作用时所启动的细胞内信号传导通路。方法:对胚鼠皮质神经元进行体外培养,提取不同缺氧时间点单纯缺氧的对照组及BDNF干预组的细胞蛋白,采用免疫印记(western blotting)方法检测两组神经元在细胞外信号调节激酶(extracellular signal-related kinase,ERK1/2)/磷酸化ERK1/2、蛋白激酶Akt/磷酸化Akt、P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 Mitogen-activated protein kinase,P38MAPK)/磷酸化P38MAPK表达上的差别。结果:与单纯缺氧组比较,加入BDNF可引起磷酸化ERK1/2和磷酸化AKT表达的增强,而磷酸化的P38MAPK在两组均没有表达。结论:BDNF引起磷酸化ERK1/2及磷酸化AKT表达的上调可能为BDNF发挥对缺氧神经元保护作用的机理之一。
- 孙小妹毛萌周晖罗小丽李胜富
- 关键词：脑源性神经营养因子缺氧ERK1/2AKT
- 脑源性神经营养因子对缺氧神经元的保护作用及其细胞内信号传递被引量：9
- 2006年
- 目的:观察体外培养大鼠胚脑皮质神经元对缺氧耐受的时间窗,探讨外源性脑源性神经营养因子对缺氧神经元保护作用的时效-量效关系,及该保护作用可能的细胞内信号传递途径。方法:实验于2004-02/2005-02在四川大学华西医院移植工程及移植免疫实验室完成。体外培养孕17～19dSD大鼠皮质神经元,随机数字法分为基线对照组、单纯缺氧组及缺氧+脑源性神经营养因子组,7d后作缺氧培养,采用四氮唑盐比色法检测0～10h段各时间点单纯缺氧组和缺氧+脑源性神经营养因子组(分别在缺氧前24h及缺氧前即刻加入25～100μg/L脑源性神经营养因子)存活率的差别,并用Westernblotting检测两组神经元在Akt/磷酸化Akt及CREB/磷酸化CREB表达的差别。结果:①脑源性神经营养因子对缺氧神经元的保护作用是相对的,该保护作用具有时效-量效关系,缺氧前24h加入大剂量脑源性神经营养因子组(100μg/L)优于缺氧即刻加入小剂量(25μg/L)组,缺氧损伤到一定程度后(>10h)脑源性神经营养因子的保护作用将明显减弱犤缺氧前24h加入100μg/L脑源性神经营养因子在1,2,4,8,10h细胞活性分别为基线对照组的(133.85±3.72)%,(109.83±5.43)%,(86.15±0.68)%,(53.78±1.71)%,(33.41±1.64)%,而缺氧前即刻加入25μg/L脑源性神经营养因子组在以上时点细胞活性分别为基线对照组的(81.55±1.07)%,(92.10±4.89)%,(78.75±1.87)%,(43.58±2.42)%,(33.13±0.94)%,单纯缺氧组的细胞活性分别为基线对照组的(82.12±3.15)%,(81.79±2.61)%,(64.5±4.56)%,(45.9±1.74)%,(35.45±1.25)%犦。②加入脑源性神经营养因子可使磷酸化Akt表达增加,磷酸化CREB表达提前并维持较长时间。结论:脑源性神经营养因子可减轻缺氧对神经元的损害,而Akt表达上调可能是脑源性神经营养因子发挥其对缺氧神经元保护作用的重要途径之一。
- 周晖毛萌罗小丽孙小妹李胜富
- 关键词：缺氧脑源性神经营养因子神经元
- 不同光激发钙荧光探针的性质、选择标准及测定过程的标准化被引量：6
- 2007年
- 目的:概括钙荧光探针的分类,选择钙荧光探针的基本思路以及细胞内钙测定的标准化。资料来源:应用计算机检索Pubmed数据库2000-01/2006-12相关钙荧光探针方面的文献,检索词“calcium fluorescent indicators,calcium measurement”,限定文献语言种类为English。资料选择:对资料进行初审,选取包括钙荧光探针的文献,开始查找全文。纳入标准:与钙荧光探针及细胞内钙测定相关的文献。排除标准:重复研究、个案报告、综述、Meta分析的文献。资料提炼:共检索到103篇关于钙荧光探针及细胞内钙测定的文献,最终纳入30篇符合标准的文献。资料综合:钙荧光探针可分为定性探针及定量探针两类,定性探针多为可见光激发的单波长探针,其代表有Fluo3和Fluo4等,定量探针多为紫外激发的双波长探针,其代表为Fura2及Indo1等。选择钙荧光探针需考虑试验目的,探针进入细胞的方式,探针的离解常数及测定所用仪器等。测定细胞内钙时,应注重测定过程中的标准化,同时注意钙荧光探针测定过程中的潜在问题,避免混杂因素的干扰。本文主要综述如何选择钙荧光探针。结论:选择合适的钙探针,注意钙荧光探针测定过程中的标准化及其他潜在问题,可对细胞内钙离子浓度进行较为准确的测定。
- 周晖毛萌
- 关键词：钙荧光探针
- 神经营养因子信号转导与神经细胞凋亡的分子机制被引量：2
- 2007年
- 细胞凋亡(Apoptosis)是一种程序化的细胞死亡过程,其中神经细胞的凋亡对胚胎期神经系统的生长、发育、分化、成熟及生后各种原因所致的脑损伤,神经退行性疾病的发生都起着至关重要的作用。神经营养因子(Neurotrophins,NTS)通过其与相应靶细胞膜受体的活化而引发相关信使分子的级联激活而减缓神经细胞凋亡、促进神经细胞的存活,发挥其生物学功能。对NTS家族信号转导与神经细胞凋亡的分子机制的认识有助于早期干预和治疗各种原因所致神经发育残障,脑损伤及神经退性行疾病。
- 罗小丽毛萌
- 关键词：神经营养因子细胞凋亡神经细胞信号转导
