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TNF-α结构与功能的关系被引量：39: 2003年; 肿瘤坏死因子 (TNF α)是一种具有广泛生物学活性的细胞因子 ,其功能发挥与结构密切相关。TNF α的活性形式为三聚体结构 ,其单体结构类似三明治 ,不同氨基酸残基的作用各异。内部残基参与三聚体形成 ,外部残基参与受体结合 ,有 4个重要的结构域。TNF α包括跨膜型和分泌型 ,二者的结构和功能均有差异。; 郑芳; 关键词：肿瘤坏死因子

两型TNFα杀伤U937细胞的差异表达基因: 2003年; 目的　比较两型TNFα对U93 7细胞的胞毒效应及二者诱导U93 7细胞差异表达的基因。方法　采用生物活性检测法测定两型TNFα对U93 7细胞的胞毒效应 ;用抑制消减杂交法探索两型TNFα诱导U93 7细胞差异表达基因。结果　两型TNFα对U93 7细胞胞毒效应存在差异 ,分泌型TNFα (sTNFα)的杀伤率为 2 4 3 % ,且引起靶细胞坏死率大于其诱导的凋亡率 ;跨膜型TNFα (TM TNFα)的杀伤率为 3 4 3 % ,主要引起靶细胞凋亡。以sTNFα诱导基因做消减 ,得到TM TNFα诱导的差异表达基因 ,即 2 5个EST ,其中 8个EST与已知基因有高度同源性 ,17个EST为未知序列 ,已向GenBank登录。; 孙义敏尹丙姣徐勇姜晓丹熊平冯玮龚非力李卓娅; 关键词：U937细胞差异表达基因抑制消减杂交

肌动蛋白样分子参与TNFRⅡ介导的TM-TNF-α杀瘤活性的研究被引量：2: 2003年; 目的　寻找并研究参与TM TNF α杀瘤的协同分子 ,进一步揭示TM TNF α发挥生物学作用的特征 ,阐明其与S TNF α功能差异的分子机制。方法　利用免疫共沉淀法、质谱分析、Westernblot及细胞毒实验探索参与TM TNF α杀瘤功能的协同作用分子并确定其性质。结果　TM TNF α免疫共沉淀产物中发现一相对分子质量 (Mr)为 4 3× 10 3蛋白分子 ,用质谱分析及Westernblot证实该分子属于肌动蛋白家族 ;用抗肌动蛋白抗体封闭效应细胞和或靶细胞后 ,TM TNF α对主要表达TNFRⅡ的肿瘤细胞HL 6 0的杀伤作用显著下降 ,而对主要表达TNFRⅠ的肿瘤细胞MCF 7则无影响。结论　Mr为 4 3× 10 3的肌动蛋白样分子可能参与并增强TM TNF α通过TNFRⅡ介导的杀瘤功能。; 郑芳李卓娅李新平姜晓丹冯玮徐勇熊平龚非力; 关键词：肿瘤坏死因子-Α 跨膜型分泌型

87位氨基酸在TM-TNF-α诱导靶细胞凋亡中的作用被引量：1: 2004年; 目的　研究TM TNF α分子结构与功能的关系 ,阐明其诱导靶细胞凋亡的分子机制。方法　构建定点突变的 87/PheTM TNF pcDNA3.0 ,并瞬时转染Cos 7细胞 ,利用MTT法 ,annexinⅤ ,Westernblot检测TM TNF α突变体的胞毒效应 ,对靶细胞死亡方式及对核转录因子NF κB转位的影响。结果　 87位氨基酸置换后 ,TM TNF α对靶细胞的杀伤率无明显改变 ,但TM TNF α突变体通过促进NF κB核转位 ,诱导靶细胞死亡的方式由凋亡转为坏死。结论　 87位氨基酸是TM TNF α诱导靶细胞凋亡的关键氨基酸残基。; 郑芳姜小丹冯玮龚非力李卓娅; 关键词：靶细胞凋亡坏死 MTT法定点突变

跨膜型TNF-α细胞毒作用与其功能域的关系被引量：2: 2003年; 目的 :探讨跨膜型TNF α(TM TNFα)的细胞毒作用及其功能域的关系。方法 :采用重组PCR对TM TNFα基因进行定点突变 ,在微粒体膜的存在下体外转录、翻译突变体 ,并观察这些突变体的胞毒作用。结果 :通过重组PCR分别获得TM TNFα第 - 71、31、35、87、95、14 3与 14 7位氨基酸置换的突变体 ,这 7种突变体对L92 9细胞系的细胞毒作用 ,与野生型TM TNFα相比 :第 - 71、14 3位氨基酸单个置换使TM TNFα胞毒作用下降 4倍以上 ,35、95、14 7位单个置换使TM TNFα胞毒作用下降1 5～ 2 5倍 ;而第 31、87与 133位氨基酸突变则对TM TNFα杀伤作用无影响。结论 :除 - 71位氨基酸外 ,以上 6个位点的氨基酸均参与分泌型TNF α(S TNFα)的胞毒功能 ,提示TM TNFα和S TNFα发挥细胞毒功能的功能域可能不完全相同。; 郑芳李卓娅龚非力姜晓丹熊平冯玮徐勇; 关键词：跨膜型功能域

利用噬菌体肽库筛选TNF-α表位的相关短肽被引量：9: 2002年; 目的　从噬菌体肽库筛选TNF α相关短肽 ,为临床上治疗肿瘤奠定基础。方法　用可溶性TNF受体Ⅰ (sTNFRⅠ )筛选噬菌体随机 12肽库 ,利用细胞毒效应进行生物学效应筛选 ,再进行单链DNA测序。结果　分别得到若干模拟跨膜型TNF α(TM TNF α)和模拟分泌型TNF α(S TNF α)细胞毒效应的短肽 ,选择细胞毒效应最好的模拟TM TNF α短肽进行人工合成 ,体外实验显示此肽段对S TNF α耐受肿瘤细胞系HL 6 0具有明显细胞毒效应 ,且主要引起靶细胞凋亡。另外 ,利用激光共聚焦显微镜证实该合成肽段不能诱导NF κB发生核转位。结论　获得模拟TM TNF α的短肽 ,为TM TNF α用于临床抗瘤治疗提供新线索。; 叶飞姜小丹李卓娅龚非力徐勇冯玮熊平; 关键词：噬菌体肽库跨膜型TNF-Α 细胞毒效应免疫疗法

跨膜型肿瘤坏死因子信号肽氨基酸部分缺失对细胞毒作用影响被引量：2: 2004年; 目的　探讨跨膜型肿瘤坏死因子 (TM TNF)信号肽在其杀瘤中的作用。方法　用PCR构建突变体及体外转录、翻译蛋白质 ,分别获得TM TNF信号肽胞浆段、胞外与分泌型肿瘤坏死因子(S TNF)连接段以及部分跨膜段缺失即信号肽第 73～ 4 7、 73～ 34、 34～ 1、 2 1～ 1位氨基酸缺失的TM TNF体外翻译蛋白。用MTT法检测其对HL 6 0细胞的杀伤率。结果　 34～ 1、 2 1～ 1位氨基酸缺失可提高TM TNF对HL 6 0细胞的杀伤 , 73～ 4 7位氨基酸缺失对其杀瘤力无明显作用 ,而 73～ 34位氨基酸缺失可使其杀瘤率明显下降。结论　去除信号肽胞外段可提高TM TNF α对HL 6 0细胞的杀伤率 ,而TM TNF α信号肽 4 7～ 34位氨基酸在其杀瘤过程中有重要作用。; 姜小丹李清芬龚非力徐勇冯玮熊平李卓娅; 关键词：跨膜型肿瘤坏死因子信号肽氨基酸细胞毒作用

人可溶性TNF受体(sTNFRI)在大肠杆菌中的表达及其活性鉴定被引量：3: 2002年; 目的 :构建人可溶性TNF受体I(sTNFRI)基因表达载体 ,并在大肠杆菌中高效表达。方法 :用RT PCR扩增编码人TNFRI胞外段基因片段 ,将其插入到表达载体pET 2 8a ,并转入大肠杆菌进行表达。结果 :在IPTG诱导下 ,转入外源基因的大肠杆菌BL 2 1可高效表达sTNFRI蛋白 ,SDS PAGE显示在 2 7kD处有一特异表达条带 ,其表达量占菌体蛋白总量的 31%。纯化的sTNFRI可有效封闭TNF对L92 9细胞的胞毒效应 ;间接免疫荧光显示它可特异性抑制TNF与靶细胞TNFR的结合。结论 :通过基因工程技术获得了人sTNFRI重组蛋白。; 叶飞李卓娅尹丙姣龚非力姜晓丹冯玮徐勇熊平; 关键词：大肠杆菌活性鉴定

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国家自然科学基金(39870713)