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EB病毒VCA基因片段在毕赤酵母中的表达及临床应用被引量：7: 2010年; 目的探讨EB病毒（Epstein—Barrvirus，EBV）壳抗原VCA-BALF4（S）和VCA—BFRF3重组蛋白在鼻咽癌血清学诊断中的应用。方法以EBVDNA为模板，采用PCR法扩增目的基因片段BALF4（S）和BFRF3，与毕赤酵母表达载体pPICZaA连接，转化酵母菌GS115，甲醇诱导重组蛋白表达。表达产物经SDS—PAGE、免疫印迹法鉴定后，纯化目的蛋白作为包被抗原，制备ELISA试剂检测鼻咽癌患者和正常人群EBV—IgA抗体。结果在毕赤酵母菌中成功高效地表达了分泌型的VCA-BALF4（S）和VCA—BFRF3重组蛋白，相对分子质量分别为37×10^3和18×10^3，免疫印迹证实目的带均有免疫原性，目的蛋白经纯化后作为包被抗原检测鼻咽癌患者和健康对照的敏感度和特异度分别为71．0％和91．8％（VCA-BFRF3）、88．7％和96．4％[VCA—BALF4（S）]。结论毕赤酵母系统高效分泌表达了VCA—BALF4（S）和VCA—BFRF3重组蛋白，对两种重组抗原在鼻咽癌血清筛选中的诊断价值进行了初步评估，获得了在鼻咽癌筛选中有一定应用价值的pPICZa—BALF4（S）生产酵母工程菌株。; 胡波李朝霞盛平李林; 关键词：鼻咽癌毕赤酵母

EB病毒衣壳蛋白P23重组质粒的构建及其在毕赤酵母中的表达被引量：2: 2012年; 目的构建pPICZαA-BLRF2重组表达载体,实现BLRF2重组蛋白在毕赤酵母中高效分泌表达,为进一步研制高效能重组抗原诊断试剂,研发亚单位疫苗奠定基础。方法以B95-8细胞提取的EBV DNA为模板,采用PCR法扩增出目的基因片段BLRF2,与毕赤酵母表达载体pPICZαA连接,电转化酵母菌GS115,甲醇诱导重组蛋白表达,表达产物经Western blotting进行鉴定。结果成功构建pPICZαA-BLRF2重组质粒,并在毕赤酵母菌中成功表达了分泌型BLRF2重组蛋白。结论在毕赤酵母GS115中高效分泌表达了P23蛋白,获得了在鼻咽癌筛选中有一定应用价值的pPICZαA-BLRF2生产酵母工程菌株,为进一步应用研究奠定了基础。; 陈亚琼李朝霞胡波李林; 关键词：EB病毒重组蛋白分泌表达毕赤酵母

EB病毒EBNA1基因原核表达载体构建及其对鼻咽癌筛选价值研究被引量：8: 2014年; 目的:构建EB病毒(epstein-barr virus,EBV)EBNA1基因原核表达载体,并探讨其在鼻咽癌血清学诊断中的应用。方法:收集2003-02-01-2005-08-30中山大学附属肿瘤医院(216例)和江苏省肿瘤医院(84例)300例鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)患者的血清样本,同时收集2003-07-01-2005-07-30中山大学附属第三医院500名健康体检者标本作为对照组。以EBV DNA为模板,采用PCR法扩增目的基因EBNA1,定向克隆到原核表达载体pGEX-5X-1中,构建pGEX-5X-EBNA1重组质粒,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达GST/EBNA1融合蛋白。经SDS-PAGE、蛋白质印迹法鉴定表达产物后,纯化目的蛋白作为包被抗原,制备ELISA试剂检测鼻咽癌患者和正常人群EBNA1-IgA抗体。结果:在大肠埃希菌中成功表达了GST/EBNA1融合蛋白,相对分子质量为54×103,ELISA法检测结果显示,鼻咽癌患者EBNA1-IgA抗体阳性检出率为80.7%(242/300),对照组阴性检出率为91.0%(455/500);EBV-IgA检测鼻咽癌患者抗体阳性检出率为82.3%(247/300),对照组阴性检出率为93.0%(465/500),2种检测方法的阳性检出率(χ2=1.77,P=0.19)和阴性检出率(χ2=1.36,P=0.25)比较,差异均无统计学意义。结论:初步评估了EB病毒GST/EBNA1重组融合蛋白在鼻咽癌血清筛选中的诊断价值,获得了在鼻咽癌筛选中有一定应用价值的pGEX-5X-EBNA1大肠埃希菌工程菌株。; 胡波陈忠城周文营吴兴平梁志超李林; 关键词：鼻咽肿瘤 EB病毒 EBNA1 大肠埃希菌

EB病毒gp125蛋白的酵母表达及在鼻咽癌检测中的应用被引量：3: 2014年; 【目的】采用毕赤酵母系统构建表达EB病毒gp125重组蛋白,并探讨其在鼻咽癌血清学诊断中的应用。【方法】以EBV DNA为模版,采用PCR法扩增gp125的编码基因BALF4(2574 bp),与毕赤酵母表达载体pPIC9连接,转化酵母菌GS115,甲醇诱导重组蛋白表达。重组蛋白经SDS-PAGE、免疫印迹法鉴定后,包被聚丙乙烯板,制备ELISA试剂检测鼻咽癌患者和正常人群gp125-IgA抗体。【结果】在毕赤酵母菌中高效地表达了分泌型的gp125重组蛋白,相对分子质量为110 000,免疫印迹证实目的蛋白有免疫原性,gp125蛋白经纯化后作为包被抗原检测鼻咽癌患者和健康对照的敏感度和特异度分别为78.0%和92.0%。【结论】采用毕赤酵母系统高效分泌表达了gp125重组蛋白,初步评估了gp125蛋白在鼻咽癌血清筛选中的诊断价值。; 胡波张新玲周文营李林; 关键词：鼻咽癌毕赤酵母

毕赤酵母及大肠埃希菌表达的重组乙型肝炎病毒e抗原在乙型肝炎病毒e抗体检测中的比较分析被引量：1: 2008年; 目的探讨毕赤酵母及大肠埃希菌表达的重组乙型肝炎病毒e抗原(recombinant hepa-titis B e antigen,rHBeAg)在乙型肝炎病毒e抗体(hepatitis B e antibody,HBeAb)免疫检测中的应用。方法用分子筛纯化两种rHBeAg,进行特异性和免疫反应性鉴定;分别用纯化后毕赤酵母表达的HBeAg(A)、大肠埃希菌表达的HBeAg(B)作为中和试剂,单克隆HBeAb为固相抗体,辣根过氧化物酶标记多克隆HBeAb为探测抗体,用固相-液相竞争抑制法酶联免疫吸附实验检测HBeAb标准品及乙型肝炎病毒PCR阳性和阴性的临床标本。结果(1)检测中国药品生物制品检定所HBeAb国家参考品结果:试剂A:阴性符合率(-/-)15/15,阳性符合率(+/+)10/10;灵敏度参考品最低检出量(稀释度)1#=1∶128,2#=1∶128,3#=1∶256。试剂B:阴性符合率(-/-)15/15;阳性符合率(+/+)9/10;灵敏度参考品最低检出量(稀释度)1#=1∶32;2#=1∶64;3#=1∶64;大肠埃希菌抗原的灵敏度明显低于毕赤酵母抗原;(2)对乙型肝炎病毒PCR阳性及阴性的临床标本进行检测:试剂A和试剂B对PCR阳性组的HBeAb阳性检出率分别为50.4%和51.6%,差异无显著统计学意义(P>0.05);PCR阴性组的HBeAb阴性检出率,试剂A和试剂B分别为91.2%和86.7%,差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论毕赤酵母表达的HBeAg用于HBeAb的检测灵敏度及特异性均优于大肠埃希菌表达产物。; 洪国强李朝霞陈月燕胡波李林; 关键词：乙型肝炎病毒E抗原毕赤酵母酶联免疫吸附实验

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广东省科技计划工业攻关项目(2006B36001010)

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