国家自然科学基金(30771625)
- 作品数：12 被引量：79H指数：5
- 相关作者：吴国娟张中文陆彦沈红王惠川更多>>
- 相关机构：北京农学院北京农业职业学院新疆农业大学更多>>
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- 相关领域：农业科学化学工程自动化与计算机技术生物学更多>>
- 鸡干扰素α受体Ⅱ胞外域的克隆及GST融合蛋白原核表达
- 2010年
- 应用RT-PCR技术扩增鸡干扰素α受体Ⅱ胞外域(CHIFNAR2 EC)基因片段,将扩增产物克隆至pMD-18T,转化J M109感受态。重组质粒与表达载体pGEX-6P-1经双酶切后构建重组表达质粒pGEX-6P-CHIF-NAR2EC,转入BL21,提取质粒酶切和测序鉴定。测序结果与参考序列比较,核苷酸同源性为99%。用IPTG诱导表达,对诱导条件进行初步优化,表达蛋白主要以包涵体的形式存在。通过切胶的方法进行纯化,获取具有较高纯度的融合蛋白。表达产物经SDS-PAGE和Western Blot检测显示融合蛋白分子量大小约为50 KD,采用抗GST抗体进行Western Blot,成功检测到特异性目的条带。
- 牛金鹏王惠川吴国娟
- 关键词：克隆融合蛋白原核表达
- 中药抗病毒在兽医临床的应用与作用机理被引量：9
- 2009年
- 孙健孙健张中文
- 关键词：致病机理抗病毒兽医临床化学合成药物中药疫苗防治
- 鸡干扰素α受体Ⅱ胞外域多克隆抗体的制备被引量：1
- 2011年
- 干扰素（IFN）是机体免疫细胞在诱导剂激发下产生的一种细胞因子。自身IFN对感染性疾病尤其是病毒性疾病具有良好的治疗作用,甚至非自身IFN在治疗感染性疾病过程中也能发挥重要作用。研究表明,IFN-β和IFN-γ受体缺损的小鼠对病毒的感染特别敏感。
- 牛金鹏庄英华许承洋王惠川吴国娟
- 关键词：干扰素Α多克隆抗体IFN-Γ病毒性疾病
- 连翘酯苷对体外培养细胞的毒性研究被引量：1
- 2009年
- 探讨了连翘酯苷对体外培养细胞的毒性,以期为人们更好地研究利用连翘酯苷提供实验依据。实验采用细胞病变法观察连翘酯苷对猪肾细胞(PK-15)、猴肾细胞(Marc-145)、鸡胚肾细胞(CEK)、鸡外周血淋巴细胞(PBL)等4种细胞的形态损伤;用MTT法检测连翘酯苷作用这4种细胞后的细胞活性和细胞数量的变化。根据这两种方法的结果计算出连翘酯苷对这4种细胞的半数致死量。实验结果显示高剂量的连翘酯苷可致细胞发生病变,而低剂量组的细胞形态优于对照组。经SPSS16.0统计,连翘酯苷对PK-15、Marc-145、CEK3种细胞的半数致死量分别为137.8、87.1、384.4μg/mL,对PBL应用到中华人民共和国兽药典(2000年版)规定药量的10倍剂量,结果未发现致死性。因此,适当合理的连翘酯苷用量对体外培养的细胞没有毒性,反而有一定的维持细胞形态的营养作用和刺激细胞增殖的作用。
- 武聚富张中文况玲沈红陆彦吴国娟
- 关键词：连翘酯苷细胞培养毒性
- 鸡传染性支气管炎病毒荧光定量PCR标准曲线的建立被引量：6
- 2009年
- 笔者针对传染性支气管炎病毒(IBV)M41株中编码核衣壳蛋白的N基因设计并合成一对引物,通过构建重组阳性标准质粒的方法,成功建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法检测IBV的标准曲线。该方法所建立的曲线可检测到初始模板中5×102copies/μL的病毒核酸,与常规PCR相比敏感性大大提高。笔者建立的荧光定量PCR检测方法具有灵敏度高、特异性强、重复性好等特点,可用于传染性支气管炎的临床诊断和健康带毒鸡群的检测。
- 武聚富张中文毛东有沈红陆彦况玲吴国娟
- 关键词：传染性支气管炎病毒荧光定量PCR病毒检测
- 连翘酯苷对小鼠的急性毒性及体内诱生IFN-α的研究被引量：17
- 2009年
- 测定连翘酯苷对小鼠腹腔注射急性毒性试验的半数致死量(LD50),检测连翘酯苷体内诱生干扰素的效果。腹腔注射连翘酯苷,用改良寇氏法计算半数致死量。眼部采血,ELISA方法测定血清中IFN-α。测得连翘酯苷对小鼠腹腔注射急性毒性的LD50为1 976.5 mg/kg,LD50的95%可信限为1 863.7 mg/kg^2 096.1 mg/kg。连翘酯苷诱生干扰素在48 h达到最高峰845.8 pg/mL±150.92 pg/mL(P<0.01)。表明连翘酯苷为低毒化合物,体内能够诱生IFN-α。
- 毛东有张中文杨明王惠川吴国娟
- 关键词：连翘酯苷急性毒性Α干扰素小鼠
- 苍术挥发油的急性毒性试验被引量：5
- 2008年
- 以等比浓度灌胃法测定苍术挥发油对小鼠的急性毒性,采用改良寇氏法计算苍术挥发油对小鼠的半数致死量(LD50)。测得LD50为2 245.87 mg/kg,LD50的95%可信限为1 958.3 mg/kg^2 575.7 mg/kg,表明苍术挥发油有一定毒性,应引起临床用药的注意。
- 杨明张中文李景如刘凤华吴国娟
- 关键词：苍术挥发油LD50小鼠
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白刺激小鼠产生抗体的研究被引量：3
- 2010年
- 为比较传统免疫、脾内免疫、胶粒免疫和硝酸纤维素膜皮下包埋等4种方法制备的猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)核衣壳蛋白抗原免疫小鼠后刺激机体产生特异性抗体的水平,比较不同方法对于特定抗原刺激机体产生免疫应答的影响,筛选一种最有效的能够用于PRRSV核衣壳蛋白多克隆抗体和单克隆抗体制备的免疫方法。用PRRSV核衣壳蛋白作免疫原,分别用传统皮下免疫法、脾内免疫法、胶粒免疫和硝酸纤维素皮下包埋法免疫BABL/c小鼠,间接ELISA检测血清效价,用Western blotting检测其特异性。三免后,常规免疫小鼠血清效价为1.28×105,脾内免疫法为1.28×105,胶粒免疫为3.2×104,NC膜皮下包埋法为6.4×104。结果表明,4种免疫方法均获得了高滴度、高特异性的多克隆抗体,与传统免疫法相比,其他3种方法有其明显的优势,即节省抗原,其中脾内免疫法为优先选用的免疫方法,其免疫效果好,可节省大量抗原和时间。
- 王星星张中文王晶郭玮赵剑利吴国娟
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白抗体硝酸纤维素膜
- 磺胺母核抗原合成及多克隆抗体的制备被引量：1
- 2008年
- 制备磺胺类药物母核结构的半抗原(H),通过免疫家兔得到多克隆抗体,为制备针对多种磺胺类药物的单抗和磺胺药检测免疫胶体金试纸条研制奠定基础。以对乙酰氨基苯磺酰氯(ASC)和对氨基苯甲酸甲酯(PA-BA)合成磺胺母核的半抗原(H);以牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)为载体,采用混合酸酐法,合成了免疫原H-BSA和包被原H-OVA通过紫外光谱定性证明偶联物偶联成功与否,以H-BSA免疫家兔,制备多克隆抗体,ELISA法对其特异性及效价进行检测。成功合成了磺胺母核人工抗原即免疫原H-BSA和包被原H-OVA,二者的蛋白浓度分别为8.46 mg/mL和10.53 mg/mL,结合比分别为13∶1和9∶1;制备的多克隆抗体特异性良好,血清效价为1∶256 000。
- 郭玮裴兆柱王星星吴国娟
- 关键词：磺胺类药物人工抗原多克隆抗体
- 绿原酸的研究进展被引量：31
- 2009年
- 绿原酸是存在于金银花、杜仲、茵陈等多种植物之中的一类苯丙素类化合物，近年来对绿原酸的研究较多，发现绿原酸具有广泛的抗菌作用、抗炎、抗病毒、保肝利胆等方面的药理作用，因此对绿原酸的深入研究具有重要意义。
- 孙健孙健
- 关键词：绿原酸抗菌作用药理作用抗病毒苯丙抗炎
