广州市科技计划项目(2004Z1-E0101)
- 作品数：4 被引量：32H指数：3
- 相关作者：周灿权李宇彬麦庆云张滨蔡柳洪更多>>
- 相关机构：中山大学附属第一医院中山大学附属第三医院更多>>
- 发文基金：广州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人类卵巢组织条厚度对超低温冷冻效果影响的研究被引量：2
- 2011年
- 目的 探索不同卵巢组织条厚度对超低温冷冻效果的影响,同时评估卵巢组织的凋亡情况.方法 卵巢组织取自10例手术的妇女.冷冻前行卵巢组织切片,按最小厚度随机分成1.0、0.5、0.25 mm 3组.采用二甲基亚砜（DMSO）为冷冻保护剂的程序慢速冷冻法进行超低温冷冻保存.冻融后进行卵泡计数及各组间正常卵泡形态学分析比较,使用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术（TUNEL）进行组织细胞凋亡检测.上述结果与新鲜卵巢组织进行比较.结果新鲜卵巢组中97.6%原始卵泡保持形态学正常,切片厚度为1.0、0.5、0.25 mm三组形态正常率分别为71.1%、73.9%和72.7%,与新鲜组比较,三实验组下降明显,差别有统计学意义（χ2=15.66,P〈0.001）;而三冷冻组间相比差别无统计学意义（χ2=0.153,P=0.926）.TUNEL原位杂交显示窦前卵泡颗粒细胞中未见凋亡阳性信号,窦卵泡中可见散在阳性信号细胞,卵巢间质细胞亦有散在凋亡信号.结论 0.5～1.0 mm厚度卵巢组织为行超低温冷冻保存是较合理厚度,卵泡闭锁的机理值得进一步研究.
- 李宇彬周灿权麦庆云高军李涛
- 关键词：卵巢组织超低温冷冻保存凋亡
- 人卵巢组织两种超低温冻存方法的研究被引量：5
- 2006年
- 【目的】探索两种人卵巢组织冷冻方案用于生殖细胞保存的效果。【方法】活检卵巢组织来自15名经知情同意的手术患者。组织被随机分配到新鲜组、玻璃化冷冻组和慢速冷冻组。观察和比较各组卵巢组织冻融后的原始卵泡形态完整率,并通过体外培养系统测定培养液中的雌二醇和孕酮水平,观察和比较冻融后卵巢组织内分泌功能。【结果】本研究中新鲜组、慢速冻融组和玻璃化冻融组的原始卵泡形态完整率分别是97.6%、72.6%和80.3%。两冻融组与新鲜组相比明显下降(P<0.001),而在两冻融组间差异并无统计学意义(P=0.237)。在体外组织培养期间,两种冻融卵巢组织都能持续分泌雌二醇和孕酮,两组间差异无统计学意义(P>0.05)。【结论】本研究中两种人类卵巢组织超低温冷存的方法是可行的,可适应不同需要。
- 李宇彬周灿权杨国奋王琼麦庆云
- 关键词：卵巢组织
- 荧光素酶标记转基因人胚胎干细胞的活体观察被引量：6
- 2009年
- 【目的】研究荧光素酶作为报告基因在活体定量和定位监测转基因人胚胎干细胞移植的动向的可行性。【方法】酶切pGL3 base质粒获得荧光素酶基因,酶切LTBR-uGIP获得载体骨架,连接荧光素酶基因和载体骨架构建慢病毒载体pULP,按照常规方法包装和扩增。ULP转导293T细胞以检测其荧光素酶的表达。人胚胎干细胞H9(P40)以W3R细胞为饲养层常规培养,人胚胎干细胞转导iDuet101-IDO(吲哚胺2,3双氧化酶,IDO)或iDuet101-CTLA4Ig(细胞毒性T细胞相关分子4免疫球蛋白,CTLA4Ig),经过筛选后再次转导ULP,即iDuet101-ULP(有荧光素酶表达)、iDuet101-CTLA4Ig-ULP(有荧光素酶和CTLA4Ig表达),iDuet101-IDO-ULP(有荧光素酶和IDO表达)。经过2次转导的3组人胚胎干细胞分别移植于5只BALB/C小鼠(实验组,共15只)和2只RAG-/-γC-/-小鼠(对照组,共6只),在注射后当日、3、5、7、14、21d和28d检测荧光素酶信号。【结果】在体外最少22000个两次转导外源基因的人胚胎干细胞可检测到荧光信号。异种移植只需要5×106的细胞即可检测到荧光信号,iDuet 101-CTLA4Ig-ULP组与iDuet101-IDO-ULP组RAG-/-γC-/-小鼠在移植后荧光信号逐渐增强,观察期间逐渐上升到3×107电子和1.5×107电子,iDuet101-ULP组两只RAG-/-γC-/-小鼠在移植后第7天因伤口感染退出实验。3组BALB/C小鼠在第7天荧光信号消失,直到移植后两个月信号没有恢复。【结论】构建慢病毒载体共表达抗生素抗性基因和目的基因,结合W3R细胞作为饲养层细胞以筛选细胞保证外源基因的表达。在细胞移植免疫缺陷小鼠后,荧光素酶基因可用于活体定量和定位监测转基因人胚胎干细胞移植的动向。
- 蔡柳洪周灿权张滨
- 关键词：荧光素酶报告基因人胚胎干细胞异种移植转基因
- 现代辅助生殖技术在肿瘤患者中的临床应用被引量：19
- 2007年
- 李宇彬周灿权
- 关键词：现代辅助生殖技术肿瘤患者体外受精-胚胎移植辅助生殖治疗生育年龄不孕夫妇
