国家自然科学基金(81301056)
- 作品数：10 被引量：23H指数：3
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- 大鼠诱发性骨关节炎模型构建研究进展被引量：11
- 2016年
- 随着社会人口老龄化,骨关节炎(OA)发病率呈逐年上升趋势,已演变成为严重影响老年人健康及生活质量的疾病之一。OA的病因及发病机制尚不明确,构建大鼠OA模型是研究OA发病机制、病理过程及治疗方法的重要手段之一。目前可通过机械制动或运动损伤、关节腔药物注射、外科手术等方法构建大鼠OA模型。不同诱发因素构建出的大鼠OA模型具有不同特性,各有优势,需根据实验条件和研究目的等合理选择。该文就大鼠诱发性OA模型构建研究进展作一综述。
- 周炎邓明贺斌刘世清
- 关键词：骨关节炎动物
- 羧甲基壳聚糖抗氧化损伤诱导雪旺细胞凋亡的作用及机制研究被引量：2
- 2014年
- [目的]探讨羧甲基壳聚糖（carboxymethylated chitosan,CMCS）对氧化应激诱导雪旺细胞（schwann cells,SCs）凋亡的保护作用及作用机制。[方法]体外培养SCs,S-100免疫荧光染色鉴定。将SCs分为空白对照组、H2O2诱导组、H2O2加CMCS处理组。通过CCK-8检测不同组SCs增殖情况,流式细胞仪计数检测SCs早期凋亡率,检测各组细胞内超氧化物歧化酶（SOD）及丙二醛（MDA）的含量,Real-time PCR技术检测Bcl-2及Bax mRNA表达水平,Western blot法检测Bcl-2,Bax,Caspase-3、-9的表达水平。[结果]H2O2诱导SCs后其细胞增殖活性明显降低,加入不同浓度CMCS后增殖活性增加。流式细胞技术检测结果表明,经H2O2诱导SCs早期凋亡率增加,加入50-200μg/ml CMCS后凋亡率逐渐降低。经H2O2诱导组SCs与空白对照组比较SOD含量明显减少,MDA含量明显增加（P〈0.05）;加入CMCS后SOD含量增加,MDA含量减少（P〈0.05）。Real-time PCR及Western blot检测结果表明经H2O2诱导SCs内Bcl-2表达降低,Bax,Caspase-3、-9表达增高,加入CMCS后Bcl-2表达恢复,Bax,Caspase-3、9表达抑制。[结论]CMCS对H2O2诱导SCs凋亡具有保护作用。
- 贺斌陶海鹰刘世清卫爱林胡明慧
- 关键词：羧甲基壳聚糖雪旺细胞细胞凋亡氧化应激
- 羧甲基壳聚糖通过抑制线粒体途径保护氧化损伤诱导雪旺细胞凋亡
- 2016年
- [目的]探讨线粒体途径在羧甲基壳聚糖(carboxymethylated chitosan,CMCS)保护过氧化氢(H_2O_2)诱导雪旺细胞(Schwann cells,SCs)凋亡中的作用及机制。[方法]体外培养SCs,S-100免疫荧光染色鉴定。将SCs分为空白对照组、H_2O_2诱导组、H_2O_2加CMCS处理组。流式细胞仪检测细胞凋亡比率,罗丹明(Rhodamine123)荧光染色检测细胞线粒体膜电位水平,Western blot检测SCs内细胞色素C(Cytochrome C)表达水平。[结果]本实验培养细胞经S-100荧光染色鉴定阳性率达95%以上,H_2O_2诱导SCs凋亡,降低线粒体膜电位,增加细胞色素C释放;而在加入CMCS后SCs凋亡比例降低,线粒体膜电位增加,细胞色素C释放减少。[结论]CMCS通过抑制线粒体细胞凋亡途径保护H_2O_2诱导SCs凋亡。
- 贺斌陶海鹰卫爱林李孝海陈任潘峰郑啸
- 关键词：羧甲基壳聚糖雪旺细胞凋亡线粒体氧化应激
- 羧甲基壳聚糖对体外培养许旺细胞环磷腺苷/蛋白激酶A信号通路的影响
- 2015年
- 背景:已有研究证实羧甲基壳聚糖对许旺细胞增殖、分泌具有促进作用,但其对许旺细胞内环磷腺苷介导蛋白激酶A信号通路的影响仍需要进一步研究。目的:观察羧甲基壳聚糖对大鼠许旺细胞内环磷腺苷/蛋白激酶A信号通路的影响。方法:取第2代新生大鼠许旺细胞,以1×109 L-1的细胞浓度接种于6孔板,分4组培养,空白对照组加入PBS,实验组分别加入50,100,200 mg/L的羧甲基壳聚糖溶液培养。培养24 h后,检测许旺细胞内环磷腺苷浓度、蛋白激酶A活性及环磷腺苷反应元件结合蛋白m RNA的表达。结果与结论:与空白对照组比较,羧甲基壳聚糖呈剂量依赖性提高许旺细胞内环磷腺苷浓度(P<0.05),呈剂量依赖性增强许旺细胞内蛋白激酶A活性(P<0.05),呈剂量依赖性提高许旺细胞内环磷腺苷反应元件结合蛋白m RNA的表达(P<0.05)。表明羧甲基壳聚糖可增加许旺细胞内环磷腺苷浓度、促进蛋白激酶A活性,从而激活环磷腺苷/蛋白激酶A信号通路。
- 贺斌陶海鹰卫爱林李孝海陈任
- 关键词：壳聚糖许旺细胞环AMP依赖性蛋白激酶类羧甲基壳聚糖
- 人参皂苷Rb1对体外培养大鼠雪旺细胞增殖、细胞周期及增殖细胞核抗原表达的影响
- 2015年
- 目的 观察人参皂苷Rb1（GRb1）对体外培养大鼠雪旺细胞（SCs）增殖、细胞周期及增殖细胞核抗原（PCNA）表达的影响.方法 取3～5d无特定病原体（SPF）级SD大鼠20只,雌雄不限,体质量25～30 g,分离双侧坐骨神经行SCs体外培养,培养细胞经S-100免疫荧光染色标记鉴定.取对数生长期SCs加入GRb1培养24 h,调整GRb1的终质量浓度为10 mg/L（B组）、20 mg/L（C组）、50 mg/L（D组）、100 mg/L（E组）、500 mg/L（F组）,对照组（A组）加入等量磷酸盐缓冲液（PBS）.细胞增殖检测法[细胞计数试剂盒（CCK-8）法]检测细胞增殖活性,碘化丙锭（PI）染色流式细胞仪检测细胞周期,实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）及Western blot法检测SCs内PCNA基因与蛋白的表达.结果 SCs经S-100免疫荧光标记染色提示阳性细胞率达90％以上,CCK-8检测结果显示GRb1在10～ 500 mg/L浓度范围内可以促进SCs增殖,流式细胞仪检测结果显示GRb1在10 ～500 mg/L浓度范围内可以促进SCs细胞周期进程,Real-time PCR及Western blot检测结果显示GRb1处理组SCs内PCNA基因和蛋白表达均高于对照组（P＜0.05）.结论 GRb1可以促进SCs增殖及细胞周期进程,并促进SCs内PCNA表达.
- 陶海鹰贺斌卫爱林陶凤华李孝海刘康
- 关键词：人参皂苷RB1雪旺细胞增殖细胞周期
- 羧甲基壳聚糖对氧化应激诱导雪旺细胞凋亡及BDNF与GDNF表达的影响被引量：5
- 2014年
- 目的研究羧甲基壳聚糖（carboxymethylated chitosan,CMCS）对氧化应激诱导大鼠雪旺细胞（Schwann cells,SCs）凋亡的保护作用及对SCs内脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor,BDNF）和胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line derived neurotrophic factor,GDNF）表达的影响。方法取24只3-5日龄SD大鼠（体重25-30 g,雌雄不限）双侧坐骨神经,体外分离培养SCs,S-100免疫荧光染色鉴定。于SCs培养基中加入0.01、0.10、1.00 mmol/L H2O2溶液进行诱导,作用3、6、12、24 h后采用CCK-8检测细胞增殖以及流式细胞术检测细胞凋亡,筛选H2O2诱导氧化应激SCs凋亡模型的最佳作用浓度及时间。取第2代SCs,根据不同处理方法分成5组：空白对照组（PBS处理）、1.00 mmol/L H2O2诱导组、1.00 mmol/L H2O2＋50μg/m L CMCS处理组、1.00 mmol/L H2O2＋100μg/m L CMCS处理组、1.00 mmol/L H2O2＋200μg/m L CMCS处理组。培养24 h后,采用CCK-8检测SCs增殖,流式细胞术检测SCs早期凋亡,实时定量PCR及Western blot检测SCs内BDNF、GDNF m RNA及蛋白表达。结果分离培养的细胞经S-100免疫荧光染色鉴定阳性率达95%以上。CCK-8及流式细胞术检测示,H2O2可明显抑制SCs增殖并诱发早期凋亡,且呈浓度依赖性,1.00 mmol/L H2O2溶液作用24 h效果最明显,为模型制备最佳作用浓度及时间。当加入50-200μg/m L CMCS后,SCs增殖活性增加、细胞凋亡率降低,且随CMCS浓度增加上述效应增强。实时定量PCR及Western blot检测示,与空白对照组比较,1.00 mmol/L H2O2诱导组BDNF、GDNF m RNA及蛋白表达明显降低,差异有统计学意义（P〈0.05）;加入50、100、200μg/m L CMCS作用后,随CMCS浓度增加,BDNF、GDNF m RNA及蛋白表达逐渐增加,与空白对照组及1.00 mmol/L H2O2诱导组比较以及各CMCS处理组间比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论 CMCS对氧化应激诱导大鼠SCs凋亡具有保护作用,并促进凋亡SCs分泌BDNF与GDNF。
- 贺斌陶海鹰刘世清
- 关键词：羧甲基壳聚糖雪旺细胞胶质细胞源性神经营养因子
- 吡咯喹啉醌对氧化应激诱导雪旺细胞凋亡的保护作用及其机制被引量：3
- 2014年
- 目的 探讨吡咯喹啉醌（Pyrroloquinoline quinine，PQQ）对H202诱导雪旺细胞（Schwanncells，SCs）凋亡的保护作用及其作用机制。方法体外原代培养、纯化及S-100免疫荧光染色鉴定SCs，将培养SCs分为空白对照组、H2O2处理组（100μmol／L H202诱导组）、H：02加PQQ处理组（10、50和100nmol／LPQQ处理组）。检测各组细胞内超氧化物歧化酶（SOD）及丙二醛（MDA）的含量，流式细胞仪计数检测SCs早期凋亡率，Hoechst33342染色观察凋亡SCs核碎裂及核固缩情况，亲脂性阳离子荧光染料罗丹明染色（Rhodaminel23，Rh0123）观察凋亡SCs线粒体膜电位变化情况，Westernblot法检测Bcl-2的表达水平。结果经H，O，诱导，SCs组与空白对照组比较SOD含量明显减少，MDA含量明显增加（P〈0．05）；加入PQQ后SOD含量增加，MDA含量减少（P〈0．05）。流式细胞仪检测结果表明，经H2O2诱导SCs早期凋亡率为58．8％，与空白对照组（2．1％）比较差异有统计学意义（P〈0．05），加入10、50、100nmol／LPQQ后凋亡率分别降低为33．7％、18．7％、3．9％，差异有统计学意义（P〈0．05）。Hoechst33342染色结果表明，H，0，诱导SCs具有典型的凋亡形态特征，表现为核染色质浓聚、细胞核体积缩小、核碎裂现象明显，经PQQ作用后凋亡形态细胞比例减少。Rho123染色结果表明，经H：0：诱导后SCs线粒体膜电位明显降低，而经PQQ作用后部分逆转。Westernblot结果表明，经H：0：诱导SCs后Bcl-2表达下调，加入PQQ后Bcl-2表达有所增加，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论PQQ对氧化损伤SCs凋亡具有保护作用。
- 贺斌陶海鹰卫爱林刘世清李皓桓
- 关键词：吡咯喹啉醌雪旺细胞氧化应激凋亡
- P13K／Akt信号通路在羧甲基壳聚糖保护一氧化氮诱导软骨细胞凋亡中的作用及机制研究被引量：2
- 2015年
- 目的研究羧甲基壳聚糖（CMCS）对一氧化氮诱导大鼠软骨细胞凋亡的保护作用，并探索P13K／Akt信号转导通路在该过程中的作用及其机制。方法体外培养大鼠膝关节软骨细胞，通过Ⅱ型胶原免疫组织化学染色鉴定软骨细胞；3mmol，L硝普钠诱导软骨细胞构建凋亡模型；实验分为空白对照组、硝普钠诱导凋亡组、硝普钠＋不同浓度CMCS处理组、硝普衲＋CMCS＋P13K抑制剂Wortmannin处理组。通过细胞增殖检测试剂盒（CCK-8）对软骨细胞增殖活性进行检测，流式细胞技术检测软骨细胞凋亡率，荧光定量PCR检测软骨细胞内MMP-13及基质金属蛋白酶组织抑制物（TIMP）．1mRNA的表达水平，通过蛋白印迹法检测软骨细胞内Akt及p-Akt表达水平，采用单因素方差分析进行统计学处理。结果3mmo札硝普钠可以抑制软骨细胞增殖活性（吸光度值0．221±0．023），与对照组（0．736±0．032）比较降低70％（F=8．203，P=-0．021），诱导软骨细胞发生早期凋亡，早期凋亡率为（68．8±5．2）％；增加软骨细胞内MMP-13mRNA表达，降低TIMP-1mRNA表达；加入CMCS后软骨细胞增殖活性有所增加，软骨细胞凋亡降低，凋亡率降低为（14．7±2．3）％；并且CMCS可以激活硝普钠诱导软骨细胞内Akt激活，增加P-Akt蛋白表达水平，CMCS可以恢复硝普钠诱导软骨细胞内MMP-13mRNA增加及TIMP-1mRNA降低。结论CMCS对硝普钠诱导软骨细胞凋亡具有一定的保护作用，P13K／Akt信号通路的激活在该过程中起重要作用。
- 贺斌陶海鹰卫爱林刘世清陈庆丁万军
- 关键词：软骨细胞一氧化氮细胞凋亡羧甲基壳聚糖PI3K/AKT
- 羧甲基壳聚糖对体外培养大鼠雪旺细胞c—fos、c—jun表达及细胞增殖周期的影响被引量：2
- 2014年
- 目的观察羧甲基壳聚糖（CMCS）对雪旺细胞（SCs）增殖及c—los、c-jun及细胞周期素（Cyclin）E表达的影响。方法取3～5d鼠龄无特定病原体（SPF）级SD大鼠20只，雌雄不限，体质量25～30g，取双侧坐骨神经体外培养SCs，经S-100免疫荧光标记鉴定。取处于对数生长期的第2代SCs，应用噻唑蓝（MTT）比色法及5．溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）染色法检测不同浓度CMCS对SCs增殖的影响。将SCs分为4组，加入CMCS调整终质量浓度为50mg／L（B组）、100mg／L（C组）、200mg／L（D组），对照组（A组）加入等量磷酸盐缓冲液（PBS）；逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）检测SCs内c—fos、c-jun及CyclinE基因的表达；Westernblot法检测c—fos、c-jun及CyclinE蛋白表达的改变。结果S-100免疫荧光标记鉴定结果显示细胞阳性率达90％以上。MTT结果表明各组SCs吸光度（A）值分别为：对照组为0．1413±0．0052，10mg／LCMCS处理组为0．1525±0．0061，50mg／LCMCS处理组为0．1648±0．0072，100mg／LCMCS处理组为0．1726±0．0062，200mg／LCMCS处理组为0．1938±0．0081，500mg／LCMCS处理组为0．1947±0．0062，随着CMCS浓度的升高而增加。BrdU染色结果表明CMCS在50—200mg/L浓度范围内可以促进SCs内DNA合成，且随着CMCS浓度的增加而增加，200mg／LCMCS作用最明显，与对照组比较增加2～3倍。RT—PCR和Westemblot检测均表明B、c、D组c—foc、c—jun及CyclinEmRNA和蛋白表达均显著高于A组（P〈0．05）；其中D组作用最明显。结论CMCS可以促进SCs增殖并促进增殖周期相关基因c—fos、c-jun及CyclinE表达。
- 陶海鹰贺斌卫爱林刘世清
- 关键词：羧甲基壳聚糖雪旺细胞增殖细胞周期蛋白
- 线粒体途径在吡咯喹啉醌抑制氧化应激诱导施万细胞凋亡中的作用被引量：1
- 2017年
- 目的探讨线粒体凋亡途径在吡咯喹啉醌（pyrrUloquinolinequinone，PQQ）抑制过氧化氢（H2O2）诱导施万细胞（schwannceils，SCs）凋亡中的作用及机制。方法体外原代培养、纯化及S-100免疫荧光染色鉴定大鼠SCs。将培养的SCs分为空白对照组、H2O2诱导组（100μmol／L H2O2）、H202加PQQ处理组（10、50、100nmol／LPQQ）。CCK-8法检测SCs的增殖情况；AnnexinV—FITC／PI流式细胞术检测细胞凋亡；JC-1流式细胞术检测线粒体膜电位；Westernblot检测SCs内细胞色素c（cytochromeC，CytC）、Bax及Caspase-9蛋白表达。结果本实验培养细胞经S-100免疫荧光染色鉴定阳性率达95％以上，SCs经H2O2处理后细胞增殖明显受到抑制，凋亡增加，线粒体膜电位降低，CytC、Bax、Caspase-9表达增加；加入PQQ处理后细胞增殖活性增加，凋亡降低，线粒体膜电位部分恢复，CytC、Bax、Caspase-9表达降低。结论PQQ通过抑制线粒体凋亡途径，降低H2O2诱导的SCs凋亡。
- 贺斌
- 关键词：吡咯喹啉醌施万细胞氧化性应激线粒体
