江苏省自然科学基金(BK2010445)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 相关作者：李婷刘凤权胡白石范加勤杨雪更多>>
- 相关机构：南京农业大学安徽省农业科学院更多>>
- 发文基金：江苏高校优势学科建设工程资助项目江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 转群体感应淬灭基因attM烟草抗青枯病的研究被引量：2
- 2012年
- 自根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)克隆获得attM基因。采用叶盘转化法,农杆菌介导转化烟草,经过卡那霉素抗性筛选获得抗性愈伤组织,对其分化产生的植物株系进行PCR、PCR-Southern和荧光定量PCR及GUS染色检测分析。结果表明:attM基因被成功插入烟草基因组DNA中。在转基因株系中均能够表达,相对表达量最大可达125.8,最小为31.0。以野生型烟草和转pBI121空载体的烟草为对照,分别进行了离体及活体检测试验,结果表明:转attM基因烟草植株对茄科雷尔氏菌引起的青枯病抗性显著。1×107～1×108CFU.mL-1的青枯菌接种离体叶片,野生型烟草和转pBI121空载体的烟草的中毒面积与接种面积比值为15～25,转基因植株的比值低于3;青枯菌3×106CFU.mL-1伤根接种盆栽烟草植株14d,野生株和转空载体烟草均青枯死亡,病情指数为100,转基因植株病情指数为31.25。
- 牛毅李婷谷春艳杨雪钱国良胡白石刘凤权范加勤
- 关键词：青枯病抗病性
- N-酰基高丝氨酸内酯降解酶的抗体制备与鉴定
- 2011年
- 根据已报道的aiiA基因及attM基因序列设计引物,分别从蜡质芽孢杆菌(Bacillus cereus)和土壤根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)中PCR扩增获得aiiA基因及attM基因,构建蛋白表达载体pET30a-aiiA及pET30a-attM,在大肠杆菌BL21中诱导表达。利用AiiA解酯酶蛋白和AttM解酯酶蛋白在SDS-PAGE中对应的产物直接成兔免疫,提取血清进行ELISA和Western Blot检测。SDS-PAGE检测发现aiiA基因及attM基因能高效表达AiiA解酯酶蛋白和AttM解酯酶蛋白。ELISA检测结果表明,抗体含量高,稀释106倍依然为有效值。Western Blot检测结果表明抗体可特异性结合目的蛋白。应用检测结果表明抗体血清能检测到N-酰基高丝氨酸内酯降解酶相关基因的产物,在验证群体感应和群体淬灭等方面将具有应用价值。
- 杨雪谷春艳牛毅李婷胡白石钱国良刘凤权范加勤
- 关键词：AIIA蛋白表达
